Name: mouse mammary epithelial cells form mammospheres during lactogenic differentiation
Uploaded: 2009-10-06T16:30:00
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<p class="jove_content"> Dirigido pelo Congresso de fundos Medical Research Fund subvenção (DAMD17-01-0264) para ML Cutler e Militar dos Estados Unidos Cancer Institute para ML Cutler apoiou o trabalho. </p>

<ol><li> O HC11 células foram cultivadas a confluência de seis dias em meio RPMI 1640 suplementado com soro bovino fetal a 10%, insulina 5μg/ml, 10 mM HEPES, fator de crescimento 10ng/ml epidérmico (EGF) para estabelecer competência. </li><li> As células foram lavadas com PBS e mantidos em meio de crescimento sem EGF por 24 horas. </li><li> Para induzir a diferenciação lactogênica as células foram incubadas em meios de diferenciação, isto é, RPMI com dexametasona (10 <sup>-6</sup> M), a insulina (5 mg / ml) e prolactina (5 mg / ml)...

<ol>
	<li>Blatchford, D. R., Hendry, K. A., Turner, M. D., Burgoyne, R. D., Wilde, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vectorial+secretion+by+constitutive+and+regulated+secretory+pathways+in+mammary+epithelial+cells.">Vectorial secretion by constitutive and regulated secretory pathways in mammary epithelial cells.</a> <em style='font-style: italic'>Epithelial Cell Biol</em>. <b>4</b>, 8-16 (1995).</li><li>Wang, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Glucocorticoid+induced+expression+of+connective+tissue+growth+factor+contributes+to+lactogenic+differentiation+of+mouse+mammary+epithelial+cells.">Glucocorticoid induced expression of connective tissue growth factor contributes to lactogenic differentiation of mouse mammary epithelial cells.</a> <em style='font-style: italic'>J Cell Physiol</em>. <b>214</b>, 38-46 (2008).</li></ol>

<p class="jove_content"> Para que esta técnica seja bem sucedida e da melhor qualidade, as células epiteliais deve ser mantida a confluência antes de ser induzidos com hormônios lactogênese. Pode haver situações em que há mammospheres numerosas, o que torna a quantificação difícil. Assim, para fins quantitativos, é melhor para fotografar a mammospheres em um ponto de tempo quando o número de mammospheres é capaz de ser contado. </p><p class="jove_content"> Embora existam diversos marcadores moleculares utilizados para determinar o...

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		<div>
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		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>RPMI</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>21870076</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Fetal Bovine Serum</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Atlanta Biologicals</td>
<td>S11550</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>L-Glutamine</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Gibco</td>
<td>25030</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>PenStrep</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Gibco</td>
<td>15140</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Hepes</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Quality Biologicals</td>
<td>118089060</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>EGF</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma</td>
<td>E9644</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Insulin</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Gibco</td>
<td>12585-014</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Dexamethasone</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma</td>
<td>D1756</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Microscope</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Olympus</td>
<td>IX71</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Digital Camera</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>QImaging</td>
<td>Retiga 2000RV Fast 1394</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>
	

mouse mammary epithelial cells form mammospheres during lactogenic differentiation

<p class="jove_content">Uma medida fenotípicas comumente usado para determinar o grau de diferenciação do mouse em lactogênica mamárias culturas de células epiteliais é a formação de estruturas celulares em forma de cúpula referido como mammospheres<sup&gt; 1</sup&gt;. A linhagem de células HC11 tem sido empregado como um sistema modelo para o estudo da regulação da diferenciação lactogênica mamárias tanto<em&gt; In vitro</em&gt; E<em&gt; In vivo</em<sup&gt; 2</sup&gt;. O HC11 células se diferenciam e sintetizar proteínas do leite em resposta ao tratamento com hormônios lactogênese. Acompanhando o crescimento do HC11 rato células epiteliais mamárias de confluência, a diferenciação lactogênica foi induzida pela adição de uma combinação de hormônios lactogênica incluindo a dexametasona, insulina e prolactina, conhecido como DIP. O HC11 células induzidas para diferenciar foram fotografados em momentos até 120 horas após a indução de diferenciação e do número de mammospheres que apareciam em cada cultura foi enumerada. O tamanho da mammospheres indivíduo se correlaciona com o grau de diferenciação e este é representado nas imagens das células de diferenciação.</p>

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Mouse Mammary Epithelial Cells form Mammospheres During Lactogenic Differentiation

<p class="jove_content">HC11 lactogênica diferenciação pode ser caracterizada pela formação de estruturas de cúpula referido como mammospheres. As estruturas podem ser enumerados por microscopia de contraste de fase para ajudar a quantificar a diferenciação lactogênese.</p>

Rato células epiteliais mamárias forma Mammospheres durante a diferenciação lactogênica

A phenotypic measure commonly used to determine the degree of lactogenic differentiation in mouse mammary epithelial cell cultures is the formation of ...

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