Name: standardized preparation of single-cell suspensions from mouse lung tissue using the gentlemacs dissociator
Uploaded: 2009-07-02T00:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Standardized Preparation of Single-Cell Suspensions from Mouse Lung Tissue using the gentleMACS Dissociator at JoVE.com

<p class="jove_content"> Die Autoren sind Mitarbeiter von Miltenyi Biotec GmbH, Deutschland. </p>

<p class="jove_content"> Um Arbeit unter sterilen Bedingungen, ist es empfehlenswert, alle Schritte in einer Sterilbank durchgeführt. </p><p class="jove_title"> 1. Materialien </p><ol><li> HEPES-Puffer: 10 mM HEPES-NaOH pH 7,4, 150 mM NaCl, 5 mM KCl, 1 mM MgCl <sub>2,</sub> 1,8 mM CaCl <sub>2)</sub> </li><li> Collagenase D Lösung: Collagenase D: 100 mg / mL (Collagenase D&gt; 0,15 U / mg), in HEPES-Puffer </li><li> DNase I-Lösung: 20.000 U / mL DNase I </li><li> PBS-Puffer bei pH 7,2 </li><li> PEB-Puffer: 1 Teil BSA-Stammlösung in 20 Teile ...

<ol>
	<li>Swanson, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Flt3-Ligand,+IL-4,+GM-CSF,+and+Adherence-Mediated+Isolation+of+Murine+Lung+Dendritic+Cells:+Assessment+of+Isolation+Technique+on+Phenotype+and+Function.">Flt3-Ligand, IL-4, GM-CSF, and Adherence-Mediated Isolation of Murine Lung Dendritic Cells: Assessment of Isolation Technique on Phenotype and Function.</a> <em style='font-style: italic'>J. Immunol</em>. <b>173</b>, 4875-4881 (2004).</li><li>Vermaelen, K., Pauwels, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Accurate+and+simple+discrimination+of+mouse+pulmonary+dendritic+cell+and+macrophage+populations+by+flow+cytometry:+Methodology+and+new+insights.">Accurate and simple discrimination of mouse pulmonary dendritic cell and macrophage populations by flow cytometry: Methodology and new insights.</a> <em style='font-style: italic'>Cytometry Part A</em>. <b>61A</b>, 170-177 (2004).</li></ol>

<p class="jove_content"> In diesem Video stellen wir eine neue Methode für die Dissoziation von Maus Lungengewebe. Wir zeigen, dass eine Kombination von mechanischen und enzymatischen Behandlung von Lungengewebe zu einem hohen Prozentsatz lebensfähiger Leukozyten und Endothel-Zellen ergab. Insbesondere wurde die mechanische Zerstörung des Gewebes durch die gentleMACS Dissociator erreicht. Die gentleMACS C Tubes umfassen einen Rotor - Stator-System, das distanziert Gewebe auf sanfte Weise. Das Verfahren wird durch die Programm-Einstellungen d...

<!DOCTYPE html PUBLIC "-//W3C//DTD XHTML 1.0 Transitional//EN" "http://www.w3.org/TR/xhtml1/DTD/xhtml1-transitional.dtd">
<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>C Tubes</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Miltenyi Biotec</td>
<td>Order no. 130-093-237</td>
<td><a href="http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_709_765_gentleMACS_C_Tubes.aspx">http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_709_765_gentleMACS_C_Tubes.aspx</a></td>
</tr>
<tr>
<td>gentleMACS&#x2122; Starting Kit</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Miltenyi Biotec</td>
<td>Order no. 130-093-235</td>
<td><a href="http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_709_763_gentleMACS_Dissociator.aspx">http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_709_763_gentleMACS_Dissociator.aspx</a></td>
</tr>
<tr>
<td>MACSmix&#x2122; Tube Rotator</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Miltenyi Biotec</td>
<td>Order no. 130-090-753</td>
<td><a href="http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_34_251_MACSmix_Tube_Rotator.aspx">http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_34_251_MACSmix_Tube_Rotator.aspx</a></td>
</tr>
<tr>
<td>autoMACS&#x2122; Rinsing Solution</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Miltenyi Biotec</td>
<td>Order no. 130-091-222</td>
<td><a href="http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_134_155_autoMACS_Rinsing_Solution.aspx">http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_134_155_autoMACS_Rinsing_Solution.aspx</a></td>
</tr>
<tr>
<td>MACS&#174; BSA Stock Solution</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Miltenyi Biotec</td>
<td>Order no. 130-091-376</td>
<td><a href="http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_33_295_MACS_BSA_Stock_Solution.aspx">http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_33_295_MACS_BSA_Stock_Solution.aspx</a></td>
</tr>
<tr>
<td>CD11c MicroBeads</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Miltenyi Biotec</td>
<td>Order No. 130-052-001</td>
<td><a href="http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_93_132_CD11c_MicroBeads.aspx">http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_93_132_CD11c_MicroBeads.aspx</a></td>
</tr>
<tr>
<td>CD11c-FITC, CD11c-PE</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Miltenyi Biotec</td>
<td>Order no. 130-092-026	130-091-830</td>
<td><a href="http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_599_329_CD11c.aspx">http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_599_329_CD11c.aspx</a></td>
</tr>
<tr>
<td>Anti-mPDCA-1-APC</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Miltenyi Biotec</td>
<td>Order no. 130-091-963</td>
<td><a href="http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_599_325_Anti_mPDCA_1.aspx">http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_599_325_Anti_mPDCA_1.aspx</a></td>
</tr>
<tr>
<td>CD146-FITC</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Miltenyi Biotec</td>
<td>Order no. 130-092-026</td>
<td><a href="http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_599_417_CD146_LSEC_.aspx">http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_599_417_CD146_LSEC_.aspx</a></td>
</tr>
<tr>
<td>CD45-PE</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Miltenyi Biotec</td>
<td>Order no. 130-091-610</td>
<td><a href="http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_599_331_CD45.aspx">http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_599_331_CD45.aspx</a></td>
</tr>
<tr>
<td>Propidium Iodide Solution</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Miltenyi Biotec</td>
<td>Order no. 130-093-233</td>
<td><a href="http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_337_744_Propidium_Iodide_Solution.aspx">http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_337_744_Propidium_Iodide_Solution.aspx</a></td>
</tr>
<tr>
<td>Art 1000 Reach Pipet Tips</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Molecular BioProducts</td>
<td>Order no. 2079</td>
<td><a href="http://www.mbpinc.com/ASP/products.aspx?query_TipID=61">http://www.mbpinc.com/ASP/products.aspx?query_TipID=61</a><br /><a href="http://www.mbpinc.com/html/products/art/display.html">http://www.mbpinc.com/html/products/art/display.html</a>
</td>
</tr>		</tbody>
		</table>
		</div>
	

standardized preparation of single-cell suspensions from mouse lung tissue using the gentlemacs dissociator

<p class="jove_content">Die Herstellung von ein-Zellsuspensionen aus den Geweben ist eine wichtige Voraussetzung für viele Experimente in Zellforschung. Der Prozess der Dissoziation ganzen Organen erfordert spezifische Parameter, um eine hohe Anzahl von lebensfähigen Zellen in reproduzierbarer Weise zu erhalten. Die gentleMACS Dissociator optimiert diese Aufgabe mit einem einfachen, praktischen Protokoll. Das Gerät enthält vorprogrammierte Einstellungen, die für die effiziente, aber schonende Dissoziation von einer Vielzahl von Gewebearten, darunter Mauslungen optimiert sind. In dieser Veröffentlichung wird die Nutzung des gentleMACS Dissociator auf das Lungengewebe von Mäusen abgeleitet wird demonstriert.</p>

Watch this Scientific Journal Video about Standardized Preparation of Single-Cell Suspensions from Mouse Lung Tissue using the gentleMACS Dissociator at JoVE.com

Standardized Preparation of Single-Cell Suspensions from Mouse Lung Tissue using the gentleMACS Dissociator

<p class="jove_content">Distanziert Zellen aus bestimmten Gewebearten erfordert spezifische Parameter für die Gewebe-Agitation um ein hohes Volumen an lebensfähigen, kultivierbaren Zellen zu erhalten. Die Miltenyi gentleMACS dissociator optimiert diese Aufgabe mit einem einfachen, praktischen Protokoll. In dieser Veröffentlichung wird die Verwendung dieser Vorrichtung auf das Lungengewebe erklärt.</p>

Standardisierte Erstellung von Einzel-Zellsuspensionen aus Maus Lungengewebe mit dem gentleMACS Dissociator

The preparation of single-cell suspensions from tissues is an important prerequisite for many experiments in cellular research. The process of ...

Research

JoVE Journal

Biology

Preparation of Single-Cell Suspensions from Mouse Spleen with the gentleMACS Dissociator

Erstellung von Einzel-Zellsuspensionen aus Maus-Milz mit dem gentleMACS Dissociator

Single-cell suspensions are a prerequisite for experiments in cell separation, cell analysis and cell culture.  To avoid tedious and often painful manual ...

Forschung

Biologie

Generation of Single-Cell Suspensions from Mouse Neural Tissue

Generierung von Einzel-Zellsuspensionen aus Maus Nervengewebe

Within the nervous system, hundreds of neuronal and glial cell types have been described. Each specific cell type in the brain or spinal cord has a ...

Single-cell Suction Recordings from Mouse Cone Photoreceptors

Einzel-Zell-Saug-Recordings aus Maus Zapfen-Photorezeptoren

Rod and cone photoreceptors in the retina are responsible for light detection. In darkness, cyclic nucleotide-gated (CNG) channels in the outer segment ...

Detection of Nitric Oxide and Superoxide Radical Anion by Electron Paramagnetic Resonance Spectroscopy from Cells using Spin Traps

Nachweis von Stickstoffmonoxid und Superoxid-Radikalanion von paramagnetischer Resonanzspektroskopie von Zellen mit Spinfallen

Reactive nitrogen/oxygen species (ROS/RNS) at low concentrations play an important role in regulating cell function, signaling, and immune response but in ...

Generation of Mice Derived from Induced Pluripotent Stem Cells

Generation der Mäuse aus induzierten pluripotenten Stammzellen

The production of induced pluripotent stem cells (iPSCs) from somatic cells provides a means to create valuable tools for basic research and may also ...

Simple and Efficient Technique for the Preparation of Testicular Cell Suspensions

Einfache und effiziente Technik zur Herstellung von Hodenkrebs Zellsuspensionen

Mammalian testes are very complex organs that contain over 30 different cell types, including somatic testicular cells and different stages of germline ...

Isolation of Nuclei from Flash-Frozen Liver Tissue for Single-Cell Multiomics

Isolierung von Zellkernen aus schockgefrorenem Lebergewebe für Einzelzell-Multiomics

The liver is a complex and heterogenous tissue responsible for carrying out many critical physiological functions, such as the maintenance of energy ...

Single-Cell Suspension Preparation from Nile Tilapia Intestine for Single-Cell Sequencing

Einzelzell-Suspensionspräparat aus Nil-Tilapia-Darm für die Einzelzell-Sequenzierung

Nile tilapia is one of the most commonly cultured freshwater fish species worldwide and is a widely used research model for aquaculture fish studies. The ...

Semi-Automated Isolation of Murine White Adipose Tissue

Semi-Automated Isolation of the Stromal Vascular Fraction from Murine White Adipose Tissue Using a Tissue Dissociator

Semi-Automated Isolation of the Stromal Vascular Fraction from Murine White Adipose Tissue Using a Tissue Dissociator (Video) | JoVE 

Halbautomatische Isolierung der stromalen vaskulären Fraktion aus murinem weißem Fettgewebe mit Hilfe eines Gewebedissoziators

The in vitro study of white, brown, and beige adipocyte differentiation enables the investigation of cell-autonomous functions of adipocytes and their ...

Two-Step Cell Digestion of Mouse Carotid Artery

Preparation of a Single-Cell Suspension from Mouse Carotid Arteries for Single-Cell Sequencing

Vascular Tissue Dissociation and Exploring Single-Cell Subclusters for Targeted Therapy (Video) | JoVE

Herstellung einer Einzelzellsuspension aus den Halsschlagadern der Maus für die Einzelzellsequenzierung

Carotid arteries are major blood vessels in the neck that supply blood and oxygen to the brain, but carotid stenosis occurs when carotid arteries are ...