Name: batch immunostaining for large-scale protein detection in the whole monkey brain
Uploaded: 2009-07-27T17:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Batch Immunostaining for Large-Scale Protein Detection in the Whole Monkey Brain at JoVE.com

<p class="jove_content"> We zijn dankbaar voor Frank Ervin, Roberta Palmour en het personeel van de Gedragswetenschappen Stichting Laboratoria gevestigd in St. Kitts, West-Indië, voor hun blijvende steun van onze primaat werk. Dit werk werd ondersteund door een beurs van fragiele X Research Foundation of Canada (FXRFC) naar SZ en - exploitatiesubsidies van de Canadese Institutes of Health Research (AC) en de Nationale Engineering en Research Council of Canada (MP). </p>

<p class="jove_content"> Immunohistochemisty is een van de meest gebruikte technieken voor het karakteriseren van proteïne-expressie in de hersenen van verschillende experimentele diermodellen. Het is relatief eenvoudig om een ​​systematische immunohistochemische procedures te voeren op de hersenen van knaagdieren en andere gemeenschappelijke experimentele modellen met vergelijkbare hersengrootte. Er is echter geen gepubliceerde werk aan onze kennis, dat een volledig overzicht van het uitvoeren van een dergelijke immunodetectie procedures ...

<ol>
	<li>Olfert, E. D., Cross, B. M., McWilliam, A. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> <em style='font-style: italic'>Guide to the Care and Use of Experimental Animals</em>. , (1993).</li><li>Devys, D., Lutz, Y., Rouyer, N., Bellocq, J. P., Mandel, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+FMR-1+protein+is+cytoplasmic,+most+abundant+in+neurons+and+appears+normal+in+carriers+of+a+fragile+X+premutation.">The FMR-1 protein is cytoplasmic, most abundant in neurons and appears normal in carriers of a fragile X premutation.</a> <em style='font-style: italic'>Nat Genet</em>. <b>4</b>, 335-340 (1993).</li><li>Mullen, R. J., Buck, C. R., Smith, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=NeuN,+a+neuronal+specific+nuclear+protein+in+vertebrates.">NeuN, a neuronal specific nuclear protein in vertebrates.</a> <em style='font-style: italic'>Development</em>. <b>116</b>, 201-211 (1992).</li><li>Sternberger, L. A., Sternberger, N. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Monoclonal+antibodies+distinguish+phosphorylated+and+nonphosphorylated+forms+of+neurofilaments+in+situ.">Monoclonal antibodies distinguish phosphorylated and nonphosphorylated forms of neurofilaments in situ.</a> <em style='font-style: italic'>Proc Natl Acad Sci U S A</em>. <b>80</b>, 6126-6130 (1983).</li></ol>

<p class="jove_content"> Er zijn twee belangrijke stappen in deze procedure dat grootschalige detectie van eiwitten in een hele aap hersenen mogelijk te maken. Een daarvan is de inbedding en snijden protocol, dat blijft de eigen kennis van de NSA. De andere is het gebruik van vlekken gerechten en manden door HistoTools. Deze laatste zorgt voor eenvoudige en snelle afhandeling van een groot aantal (~ 40) delen op een bepaald tijdstip. Het biedt ook de middelen voor het behandelen van alle secties gelijkmatig over de hersenen en zorgt voor een we...

<!DOCTYPE html PUBLIC "-//W3C//DTD XHTML 1.0 Transitional//EN" "http://www.w3.org/TR/xhtml1/DTD/xhtml1-transitional.dtd">
<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>anti-FMRP monoclonal antibody</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Chemicon</td>
<td>MAB2160</td>
<td>Requires antigen retrieval in fixed tissue.</td>
</tr>
<tr>
<td>anti-NeuN monoclonal antibody</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Chemicon</td>
<td>MAB377</td>
<td>N/A</td>
</tr>
<tr>
<td>anti-Neurofilament H monoclonal antibody</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sternberger Monoclonals Inc.</td>
<td>SMI32</td>
<td>N/A</td>
</tr>
<tr>
<td>Antigen Unmasking Solution</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Vector Laboratories</td>
<td>H-3300</td>
<td>N/A</td>
</tr>
<tr>
<td>Normal horse serum</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>16050122</td>
<td>500 mL</td>
</tr>
<tr>
<td>Biotinylated Anti-Mouse IgG (H+L), made in horse</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Vector Laboratories</td>
<td>BA-2000</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>VECTASTAIN ABC Kit (Standard)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Vector Laboratories</td>
<td>PK-4000</td>
<td>1.5 mg</td>
</tr>
<tr>
<td>Staining dish for floating sections</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>HistoTools</td>
<td>10009</td>
<td>12 x 65 mm</td>
</tr>
<tr>
<td>Staining transport basket</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>HistoTools</td>
<td>10012</td>
<td>large<br />
(fits 12 x 65 mm dish)</td>
</tr>
<tr>
<td>Triton X-100</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fisher Scientific</td>
<td>P8514B</td>
<td>N/A</td>
</tr>
<tr>
<td>DAB</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fisher Scientific</td>
<td>AC11209-0050</td>
<td>N/A</td>
</tr>		</tbody>
		</table>
		</div>
	

batch immunostaining for large-scale protein detection in the whole monkey brain

<p class="jove_content">Immunohistochemie (IHC) is een van de meest gebruikte laboratoriumtechnieken voor de detectie van doeleiwitten<em&gt; In situ</em&gt;. Vragen over het expressiepatroon van een doelwit eiwit over de hele hersenen zijn relatief makkelijk te beantwoorden bij het gebruik van IHC in kleine hersenen, zoals die van knaagdieren. Echter, het beantwoorden van dezelfde vragen in grote en ingewikkelde hersenen, zoals die van primaten presenteert een aantal uitdagingen. Hier presenteren wij een systematische aanpak voor immunodetectie van target eiwitten in een volwassen aap brein. Deze aanpak is gebaseerd op het weefsel inbedding en snijden de methodologie van NeuroScience Associates (NSA) en hulpmiddelen die specifiek ontwikkeld voor de batch-kleuring van vrij zwevende delen. Het resulteert in uniform kleuring van een reeks van secties die op een bepaald interval, vertegenwoordigt het hele brein. De resulterende gekleurde coupes kunnen worden onderworpen aan een breed scala aan analytische procedures om de eiwit-niveaus, de bevolking van neuronen die een bepaald eiwit te meten.</p>

Watch this Scientific Journal Video about Batch Immunostaining for Large-Scale Protein Detection in the Whole Monkey Brain at JoVE.com

Batch Immunostaining for Large-Scale Protein Detection in the Whole Monkey Brain

<p class="jove_content">Grootschalige immunodetectie van target eiwitten in het hele primaat hersenen is mogelijk door het gebruik van nieuwe weefsel inbedden en snijden methoden gecombineerd met het gebruik van creatieve apparatuur voor batch kleuring van meerdere vrij zwevende delen op een gegeven moment.</p>

Batch Immunokleuring Grootschalige eiwitdetectie in de Whole Brain Monkey

Immunohistochemistry (IHC) is one of the most widely used laboratory techniques for the detection of target proteins in situ. Questions concerning the ...

Research

JoVE Journal

Biology

Large-Scale Screens of Metagenomic Libraries

Grootschalige Schermen van Metagenomic Bibliotheken

Metagenomic libraries archive large fragments of contiguous genomic sequences from microorganisms without requiring prior cultivation.  Generating a ...

Micro-dissection of Rat Brain for RNA or Protein Extraction from Specific Brain Region

Micro-dissectie van hersenen van de rat voor RNA of eiwit-extractie uit specifieke hersengebieden regio

Micro-dissection of rat brain into various regions is extremely important for the study of different neurodegenerative diseases. This video demonstrates ...

Detection of Protein Ubiquitination

Detectie van eiwit ubiquitinering

Ubiquitination, the covalent attachment of the polypeptide ubiquitin to target proteins, is a key posttranslational modification carried out by a set of ...

Purification of the <em>M. magneticum</em> Strain AMB-1 Magnetosome Associated Protein MamA&Delta;41

Purification of the M. magneticum Strain AMB-1 Magnetosome Associated Protein MamAÃƒÅ½Ã¢â‚¬Â41

Zuivering van het<em> M. magneticum</em> Strain AMB-1 Magnetosome geassocieerd eiwit MamAΔ41

Magnetotactic bacteria comprise a diverse group of aquatic microorganisms that are able to orientate themselves along geomagnetic fields. This behavior is ...

Large Scale Zebrafish-Based <em>In vivo</em> Small Molecule Screen

Large Scale Zebrafish-Based In vivo Small Molecule Screen

Large Scale zebravis-Based<em> In vivo</em> Kleine Molecule Screen

Given their small embryo size, rapid development, transparency, fecundity, and numerous molecular, morphological and physiological similarities to ...

Infinium Assay for Large-scale SNP Genotyping Applications

Infinium Assay voor grootschalige SNP genotypering Toepassingen

Genotyping variants in the human genome has proven to be an efficient method to identify genetic associations with phenotypes. The distribution of ...

A Strategy for Sensitive, Large Scale Quantitative Metabolomics

Een strategie voor de gevoelige, Large Scale Quantitative Metabolomics

Metabolite profiling has been a valuable asset in the study of metabolism in health and disease. However, current platforms have different limiting ...

Investigating Protein-protein Interactions in Live Cells Using Bioluminescence Resonance Energy Transfer

Onderzoeken eiwit-eiwit interacties in levende cellen met behulp van bioluminescentie resonantie energieoverbrenging

Assays based on Bioluminescence Resonance Energy Transfer (BRET) provide a sensitive and reliable means to monitor protein-protein interactions in live ...

ODELAY: A Large-scale Method for Multi-parameter Quantification of Yeast Growth

ODELAY: Een grootschalige methode voor multiparameter kwantificering van gistgroei

Growth phenotypes of microorganisms are a strong indicator of their underlying genetic fitness and can be segregated into 3 growth regimes: lag-phase, ...

Identification of Novel Regulators of Plant Transpiration by Large-Scale Thermal Imaging Screening in <em>Helianthus Annuus</em>

Identification of Novel Regulators of Plant Transpiration by Large-Scale Thermal Imaging Screening in Helianthus Annuus

Identificatie van nieuwe regulatoren van plantaardige transpiratie door grootschalige thermische beeldvorming screening in <em>Helianthus Annuus</em>

Plant adaptation to biotic and abiotic stresses is governed by a variety of factors, among which the regulation of stomatal aperture in response to water ...