Name: batch immunostaining for large-scale protein detection in the whole monkey brain
Uploaded: 2009-07-27T17:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Batch Immunostaining for Large-Scale Protein Detection in the Whole Monkey Brain at JoVE.com

<p class="jove_content"> Wir bedanken uns bei Frank Ervin, Roberta Palmour und das Personal des Behavioural Sciences Foundation Laboratories in St Kitts, West Indies, für ihre anhaltende Unterstützung unserer Primaten Arbeit befindet. Betriebskostenzuschüsse von der Canadian Institutes of Health Research (AC) und der National Engineering and Research Council of Canada (MP) - Diese Arbeit wurde durch ein Stipendium Fragile X Research Foundation of Canada (FXRFC) auf SZ und unterstützt. </p>

<p class="jove_content"> Immunohistochemisty ist eine der am häufigsten verwendeten Techniken zur Charakterisierung von Protein-Expression im Gehirn von verschiedenen experimentellen Tiermodellen. Es ist relativ leicht zu systematischen immunhistochemischen Verfahren auf die Gehirne der Nagetiere und andere gemeinsame experimentelle Modelle mit ähnlicher Größe des Gehirns führen. Allerdings gibt es keine veröffentlichten Arbeit, unser Wissen, dass eine umfassende Darstellung, wie die zur Durchführung dieser Immundetektion Verfahren im ge...

<ol>
	<li>Olfert, E. D., Cross, B. M., McWilliam, A. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> <em style='font-style: italic'>Guide to the Care and Use of Experimental Animals</em>. , (1993).</li><li>Devys, D., Lutz, Y., Rouyer, N., Bellocq, J. P., Mandel, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+FMR-1+protein+is+cytoplasmic,+most+abundant+in+neurons+and+appears+normal+in+carriers+of+a+fragile+X+premutation.">The FMR-1 protein is cytoplasmic, most abundant in neurons and appears normal in carriers of a fragile X premutation.</a> <em style='font-style: italic'>Nat Genet</em>. <b>4</b>, 335-340 (1993).</li><li>Mullen, R. J., Buck, C. R., Smith, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=NeuN,+a+neuronal+specific+nuclear+protein+in+vertebrates.">NeuN, a neuronal specific nuclear protein in vertebrates.</a> <em style='font-style: italic'>Development</em>. <b>116</b>, 201-211 (1992).</li><li>Sternberger, L. A., Sternberger, N. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Monoclonal+antibodies+distinguish+phosphorylated+and+nonphosphorylated+forms+of+neurofilaments+in+situ.">Monoclonal antibodies distinguish phosphorylated and nonphosphorylated forms of neurofilaments in situ.</a> <em style='font-style: italic'>Proc Natl Acad Sci U S A</em>. <b>80</b>, 6126-6130 (1983).</li></ol>

<p class="jove_content"> Es gibt zwei kritische Schritte in diesem Verfahren, dass groß angelegte Nachweis von Proteinen in einer ganzen Affenhirn möglich zu machen. Eine davon ist die Einbettung und Schneiden-Protokoll, das die proprietäre Wissen NSA bleibt. Die andere ist die Verwendung der Färbung Schüsseln und Körbe von HistoTools zur Verfügung gestellt. Letzteres ermöglicht eine einfache und schnelle Handhabung von vielen (~ 40) Abschnitte zu einem bestimmten Zeitpunkt. Es bietet auch die Mittel für die gleichmäßige Behandlung a...

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<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>anti-FMRP monoclonal antibody</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Chemicon</td>
<td>MAB2160</td>
<td>Requires antigen retrieval in fixed tissue.</td>
</tr>
<tr>
<td>anti-NeuN monoclonal antibody</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Chemicon</td>
<td>MAB377</td>
<td>N/A</td>
</tr>
<tr>
<td>anti-Neurofilament H monoclonal antibody</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sternberger Monoclonals Inc.</td>
<td>SMI32</td>
<td>N/A</td>
</tr>
<tr>
<td>Antigen Unmasking Solution</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Vector Laboratories</td>
<td>H-3300</td>
<td>N/A</td>
</tr>
<tr>
<td>Normal horse serum</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>16050122</td>
<td>500 mL</td>
</tr>
<tr>
<td>Biotinylated Anti-Mouse IgG (H+L), made in horse</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Vector Laboratories</td>
<td>BA-2000</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>VECTASTAIN ABC Kit (Standard)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Vector Laboratories</td>
<td>PK-4000</td>
<td>1.5 mg</td>
</tr>
<tr>
<td>Staining dish for floating sections</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>HistoTools</td>
<td>10009</td>
<td>12 x 65 mm</td>
</tr>
<tr>
<td>Staining transport basket</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>HistoTools</td>
<td>10012</td>
<td>large<br />
(fits 12 x 65 mm dish)</td>
</tr>
<tr>
<td>Triton X-100</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fisher Scientific</td>
<td>P8514B</td>
<td>N/A</td>
</tr>
<tr>
<td>DAB</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fisher Scientific</td>
<td>AC11209-0050</td>
<td>N/A</td>
</tr>		</tbody>
		</table>
		</div>
	

batch immunostaining for large-scale protein detection in the whole monkey brain

<p class="jove_content">Immunhistochemie (IHC) ist eine der am häufigsten verwendeten Labor-Techniken für die Detektion von Target-Proteinen<em&gt; In situ</em&gt;. Fragen über die Expressionsmuster eines Zielproteins über das gesamte Gehirn sind relativ leicht zu beantworten, wenn Sie IHC in kleinen Gehirne, wie die von Nagetieren. Doch die gleichen Fragen in großen und gewundenen Gehirne, wie die der Primaten stellt eine Reihe von Herausforderungen. Hier präsentieren wir einen systematischen Ansatz für die Immundetektion der Zielproteine ​​in einer erwachsenen Affen Gehirn. Dieser Ansatz stützt sich auf das Gewebe eingebettet und Schnitte Methodik der NeuroScience Associates (NSA) sowie Tools, die speziell für die Batch-Färbung der im Streubesitz befindlichen Abschnitten entwickelt. Es führt zu einer gleichmäßigen Färbung von einer Reihe von Abschnitten, die in einem bestimmten Intervall, stellt das gesamte Gehirn. Die daraus resultierenden gefärbten Schnitten kann auf eine Vielzahl von analytischen Verfahren unterzogen werden, um Protein-Spiegel, die Bevölkerung von Neuronen, die ein bestimmtes Protein zu messen.</p>

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Batch Immunostaining for Large-Scale Protein Detection in the Whole Monkey Brain

<p class="jove_content">Großflächige Immundetektion der Zielproteine ​​in der gesamten Primatengehirn wird durch den Einsatz von neuartigen Gewebe Einbettung und Schneiden Methoden mit dem Einsatz von kreativen Apparat für Batch-Färbung von mehreren frei schwebenden Abschnitte zu einem bestimmten Zeitpunkt in Kombination möglich.</p>

Batch Immunfärbung für Large-Scale Protein-Nachweis im Whole Affenhirn

Immunohistochemistry (IHC) is one of the most widely used laboratory techniques for the detection of target proteins in situ. Questions concerning the ...

Research

JoVE Journal

Biology

Large-Scale Screens of Metagenomic Libraries

Large-Scale-Bildschirme von Metagenombanken

Metagenomic libraries archive large fragments of contiguous genomic sequences from microorganisms without requiring prior cultivation.  Generating a ...

Forschung

Biologie

Micro-dissection of Rat Brain for RNA or Protein Extraction from Specific Brain Region

Micro-Dissektion Rattenhirns RNA oder Protein Extraction von bestimmten Hirnregion

Micro-dissection of rat brain into various regions is extremely important for the study of different neurodegenerative diseases. This video demonstrates ...

Detection of Protein Ubiquitination

Detektion von Protein Ubiquitination

Ubiquitination, the covalent attachment of the polypeptide ubiquitin to target proteins, is a key posttranslational modification carried out by a set of ...

Purification of the <em>M. magneticum</em> Strain AMB-1 Magnetosome Associated Protein MamA&Delta;41

Purification of the M. magneticum Strain AMB-1 Magnetosome Associated Protein MamAÃƒÅ½Ã¢â‚¬Â41

Die Reinigung des<em> M. magneticum</em> Stamm AMB-1 Magnetosom assoziierten Protein MamAΔ41

Magnetotactic bacteria comprise a diverse group of aquatic microorganisms that are able to orientate themselves along geomagnetic fields. This behavior is ...

Large Scale Zebrafish-Based <em>In vivo</em> Small Molecule Screen

Large Scale Zebrafish-Based In vivo Small Molecule Screen

Large Scale Zebrafisch-Based<em> In-vivo-</em> Small Molecule-Screen

Given their small embryo size, rapid development, transparency, fecundity, and numerous molecular, morphological and physiological similarities to ...

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Infinium-Assay für Groß SNP Genotypisierung Anwendungen

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Eine Strategie für einfühlsam, Large Scale Quantitative Metabolomics

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Identification of Novel Regulators of Plant Transpiration by Large-Scale Thermal Imaging Screening in Helianthus Annuus

Identifizierung neuartiger Regulatoren der Pflanzentranspiration durch großangelegtes Thermisches Bildgebungsscreening in <em>Helianthus Annuus</em>

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