Name: batch immunostaining for large-scale protein detection in the whole monkey brain
Uploaded: 2009-07-27T17:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Batch Immunostaining for Large-Scale Protein Detection in the Whole Monkey Brain at JoVE.com

<p class="jove_content"> Vi är tacksamma till Frank Ervin, Roberta Palmour och personalen i beteendevetenskaper stiftelsen Laboratories i St Kitts, Västindien, för deras fortsatta stöd i vårt primat arbete. Detta arbete stöddes av ett stipendium från Fragile X Research Foundation i Kanada (FXRFC) för att SZ och - verksamhetsbidrag från den kanadensiska Institutes of Health Research (AC) och National Engineering och Research Council of Canada (MP). </p>

<p class="jove_content"> Immunohistochemisty är en av de mest använda metoder för karakterisering av protein uttryck i hjärnan av olika experimentella djurmodeller. Det är relativt lätt att genomföra systematiska immunhistokemiska procedurer på hjärnan hos gnagare och andra vanliga experimentella modeller med liknande hjärnans storlek. Det finns dock inga publicerade arbete för att vår kunskap som ger en övergripande redogörelse för hur att utföra sådana immunodetection förfaranden i en hel apa hjärna. Här följer en detalje...

<ol>
	<li>Olfert, E. D., Cross, B. M., McWilliam, A. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> <em style='font-style: italic'>Guide to the Care and Use of Experimental Animals</em>. , (1993).</li><li>Devys, D., Lutz, Y., Rouyer, N., Bellocq, J. P., Mandel, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+FMR-1+protein+is+cytoplasmic,+most+abundant+in+neurons+and+appears+normal+in+carriers+of+a+fragile+X+premutation.">The FMR-1 protein is cytoplasmic, most abundant in neurons and appears normal in carriers of a fragile X premutation.</a> <em style='font-style: italic'>Nat Genet</em>. <b>4</b>, 335-340 (1993).</li><li>Mullen, R. J., Buck, C. R., Smith, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=NeuN,+a+neuronal+specific+nuclear+protein+in+vertebrates.">NeuN, a neuronal specific nuclear protein in vertebrates.</a> <em style='font-style: italic'>Development</em>. <b>116</b>, 201-211 (1992).</li><li>Sternberger, L. A., Sternberger, N. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Monoclonal+antibodies+distinguish+phosphorylated+and+nonphosphorylated+forms+of+neurofilaments+in+situ.">Monoclonal antibodies distinguish phosphorylated and nonphosphorylated forms of neurofilaments in situ.</a> <em style='font-style: italic'>Proc Natl Acad Sci U S A</em>. <b>80</b>, 6126-6130 (1983).</li></ol>

<p class="jove_content"> Det finns två viktiga steg i detta förfarande som gör storskalig detektion av proteiner i en hel apa hjärna möjligt. En är inbäddning och snittning protokoll, som fortfarande är patentskyddade kunskaper i NSA. Den andra är användningen av färgning rätter och korgar som HistoTools. Det senare möjliggör enkel och snabb hantering av många (~ 40) sektioner vid en viss tidpunkt. Det ger också medel för enhetligt behandla alla delar i hjärnan och ger en vetenskapligt sund histologisk behandling. Dessutom ger...

<!DOCTYPE html PUBLIC "-//W3C//DTD XHTML 1.0 Transitional//EN" "http://www.w3.org/TR/xhtml1/DTD/xhtml1-transitional.dtd">
<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>anti-FMRP monoclonal antibody</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Chemicon</td>
<td>MAB2160</td>
<td>Requires antigen retrieval in fixed tissue.</td>
</tr>
<tr>
<td>anti-NeuN monoclonal antibody</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Chemicon</td>
<td>MAB377</td>
<td>N/A</td>
</tr>
<tr>
<td>anti-Neurofilament H monoclonal antibody</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sternberger Monoclonals Inc.</td>
<td>SMI32</td>
<td>N/A</td>
</tr>
<tr>
<td>Antigen Unmasking Solution</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Vector Laboratories</td>
<td>H-3300</td>
<td>N/A</td>
</tr>
<tr>
<td>Normal horse serum</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>16050122</td>
<td>500 mL</td>
</tr>
<tr>
<td>Biotinylated Anti-Mouse IgG (H+L), made in horse</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Vector Laboratories</td>
<td>BA-2000</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>VECTASTAIN ABC Kit (Standard)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Vector Laboratories</td>
<td>PK-4000</td>
<td>1.5 mg</td>
</tr>
<tr>
<td>Staining dish for floating sections</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>HistoTools</td>
<td>10009</td>
<td>12 x 65 mm</td>
</tr>
<tr>
<td>Staining transport basket</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>HistoTools</td>
<td>10012</td>
<td>large<br />
(fits 12 x 65 mm dish)</td>
</tr>
<tr>
<td>Triton X-100</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fisher Scientific</td>
<td>P8514B</td>
<td>N/A</td>
</tr>
<tr>
<td>DAB</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fisher Scientific</td>
<td>AC11209-0050</td>
<td>N/A</td>
</tr>		</tbody>
		</table>
		</div>
	

batch immunostaining for large-scale protein detection in the whole monkey brain

<p class="jove_content">Immunohistokemi (IHC) är en av de mest använda Laboratoriemetoder för detektion av målproteiner<em&gt; På plats</em&gt;. Frågor om uttrycket mönster av ett målprotein över hela hjärnan är relativt lätt att svara när du använder IHC i små hjärnor, till exempel av gnagare. Men svara på samma frågor i stora och invecklad hjärnor, till exempel av primater presenteras ett antal utmaningar. Här presenterar vi ett systematiskt tillvägagångssätt för immunodetection av målproteiner i en vuxen apa hjärna. Detta synsätt bygger på vävnad inbäddning och snittning metodik för neurovetenskap Associates (NSA) samt verktyg som utvecklats speciellt för parti-färgning av fritt svävande sektioner. Det resulterar i uniform färgning av ett antal sektioner som vid ett visst intervall, representerar hela hjärnan. Den resulterande färgade snitt kan utsättas för en mängd olika analysmetoder för att mäta protein nivåer, befolkningen i nervceller som uttrycker ett visst protein.</p>

Watch this Scientific Journal Video about Batch Immunostaining for Large-Scale Protein Detection in the Whole Monkey Brain at JoVE.com

Batch Immunostaining for Large-Scale Protein Detection in the Whole Monkey Brain

<p class="jove_content">Storskalig immunodetection av målproteiner hela primat hjärnan är möjligt genom att anställa ny vävnad inbäddning och snittning metoder i kombination med användning av kreativa apparater för parti färgning av flera fritt flytande sektioner vid en viss tidpunkt.</p>

Batch immunfärgning för storskaliga Protein Detection i hela Monkey Brain

Immunohistochemistry (IHC) is one of the most widely used laboratory techniques for the detection of target proteins in situ. Questions concerning the ...

Research

JoVE Journal

Biology

Large-Scale Screens of Metagenomic Libraries

Storskaliga skärmar Metagenomic bibliotek

Metagenomic libraries archive large fragments of contiguous genomic sequences from microorganisms without requiring prior cultivation.  Generating a ...

Micro-dissection of Rat Brain for RNA or Protein Extraction from Specific Brain Region

Micro-dissekering av råtthjärna för RNA eller protein Utsug från specifika delar av hjärnan Region

Micro-dissection of rat brain into various regions is extremely important for the study of different neurodegenerative diseases. This video demonstrates ...

Detection of Protein Ubiquitination

Detektion av protein Ubiquitination

Ubiquitination, the covalent attachment of the polypeptide ubiquitin to target proteins, is a key posttranslational modification carried out by a set of ...

Purification of the <em>M. magneticum</em> Strain AMB-1 Magnetosome Associated Protein MamA&Delta;41

Purification of the M. magneticum Strain AMB-1 Magnetosome Associated Protein MamAÃƒÅ½Ã¢â‚¬Â41

Rening av<em> M. magneticum</em> Sila AMB-1 Magnetosome Medverkande Protein MamAΔ41

Magnetotactic bacteria comprise a diverse group of aquatic microorganisms that are able to orientate themselves along geomagnetic fields. This behavior is ...

Large Scale Zebrafish-Based <em>In vivo</em> Small Molecule Screen

Large Scale Zebrafish-Based In vivo Small Molecule Screen

Large Scale Zebrafish-Based<em> In vivo</em> Småmolekylära skärm

Given their small embryo size, rapid development, transparency, fecundity, and numerous molecular, morphological and physiological similarities to ...

Infinium Assay for Large-scale SNP Genotyping Applications

Infinium analys för Storskaliga SNP Genotyping Applications

Genotyping variants in the human genome has proven to be an efficient method to identify genetic associations with phenotypes. The distribution of ...

A Strategy for Sensitive, Large Scale Quantitative Metabolomics

En strategi för känsliga, storskaliga kvantitativa Metabolomics

Metabolite profiling has been a valuable asset in the study of metabolism in health and disease. However, current platforms have different limiting ...

Investigating Protein-protein Interactions in Live Cells Using Bioluminescence Resonance Energy Transfer

Undersökning av protein-proteininteraktioner i levande celler med hjälp Bioluminescence Resonance Energy Transfer

Assays based on Bioluminescence Resonance Energy Transfer (BRET) provide a sensitive and reliable means to monitor protein-protein interactions in live ...

ODELAY: A Large-scale Method for Multi-parameter Quantification of Yeast Growth

ODELAY: En storskalig metod för multiparameterkvantificering av jästtillväxt

Growth phenotypes of microorganisms are a strong indicator of their underlying genetic fitness and can be segregated into 3 growth regimes: lag-phase, ...

Identification of Novel Regulators of Plant Transpiration by Large-Scale Thermal Imaging Screening in <em>Helianthus Annuus</em>

Identification of Novel Regulators of Plant Transpiration by Large-Scale Thermal Imaging Screening in Helianthus Annuus

Identifiering av nya regulatorer av växttranspiration genom storskalig termisk avbildningsscreening i <em>Helianthus Annuus</em>

Plant adaptation to biotic and abiotic stresses is governed by a variety of factors, among which the regulation of stomatal aperture in response to water ...