Name: virus-induced gene silencing (vigs) in nicotiana benthamiana and tomato
Uploaded: 2009-06-10T00:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Virus-induced Gene Silencing VIGS in Nicotiana benthamiana and Tomato at JoVE.com

نشكر الدكتورة باتريشيا Manosalva لرؤى لها قيمة على المخطوطة. تم توفير التمويل من قبل البرنامج الوطني لمؤسسة العلوم النباتية الجينوم ، وعدد الجوائز DBI - 0605059.

الجزء 1 : المواد النباتية يجب ن النباتات المستخدمة لإسكات benthamiana يكون حوالي 2 ½ أسابيع من العمر والذي هو وقت النبتات والأولى 2 -- 4 أوراق حقيقية ظهرت. وتستخدم الطماطم (مغد lycopersicum) مصانع 7-8 ظهور آخر أيام ، عندما يترك الحقيق...

<ol>
	<li>Voinnet, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=RNA+silencing+as+a+plant+immune+system+against+viruses.">RNA silencing as a plant immune system against viruses.</a> Trends Genet. 17, 449-459 (2001).</li><li>Carrington, J. C., Ambros, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+microRNAs+in+plant+and+animal+development.">Role of microRNAs in plant and animal development.</a> Science. 301, 336-338 (2003).</li><li>Chen, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+microRNA+as+a+translational+repressor+of+APETALA2+in+Arabidopsis+flower+development.">A microRNA as a translational repressor of APETALA2 in Arabidopsis flower development.</a> Science. 303, 2022-2025 (2004).</li><li>Palatnik, J. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Control+of+leaf+morphogenesis+by+microRNAs.">Control of leaf morphogenesis by microRNAs.</a> Nature. 425, 257-263 (2003).</li><li>Brigneti, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Viral+pathogenicity+determinants+are+suppressors+of+transgene+silencing+in+Nicotiana+benthamiana.">Viral pathogenicity determinants are suppressors of transgene silencing in Nicotiana benthamiana.</a> EMBO J. 17, 6739-6746 (1998).</li><li>Liu, Y., Schiff, M., Dinesh-Kumar, S. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Virus-induced+gene+silencing+in+tomato.">Virus-induced gene silencing in tomato.</a> Plant Journal. 31, 777-786 (2002).</li><li>MacFarlane, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+biology+of+the+tobraviruses.">Molecular biology of the tobraviruses.</a> J. Gen. Virol. 80, 2799-2807 (1999).</li><li>Senthil-Kumar, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+systematic+study+to+determine+the+extent+of+gene+silencing+in+Nicotiana+benthamiana+and+other+Solanaceae+species+when+heterologous+gene+sequences+are+used+for+virus-induced+gene+silencing.">A systematic study to determine the extent of gene silencing in Nicotiana benthamiana and other Solanaceae species when heterologous gene sequences are used for virus-induced gene silencing.</a> New Phytol. 176, 782-791 (2007).</li><li>McCullen, C. A., Binns, A. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Agrobacterium+tumefaciens+and+plant+cell+interactions+and+activities+required+for+interkingdom+macromolecular+transfer.">Agrobacterium tumefaciens and plant cell interactions and activities required for interkingdom macromolecular transfer.</a> Annu. Rev. Cell Dev. Biol. 22, 101-127 (2006).</li><li>Rosebrock, T. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+bacterial+E3+ubiquitin+ligase+targets+a+host+protein+kinase+to+disrupt+plant+immunity.">A bacterial E3 ubiquitin ligase targets a host protein kinase to disrupt plant immunity.</a> Nature. 448, 370-374 (2007).</li><li>Miki, D., Itoh, R., Shimamoto, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=RNA+silencing+of+single+and+multiple+members+in+a+gene+family+of+rice.">RNA silencing of single and multiple members in a gene family of rice.</a> Plant Physiol. 138, 1903-1913 (2005).</li><li>Voinnet, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use,+tolerance+and+avoidance+of+amplified+RNA+silencing+by+plants.">Use, tolerance and avoidance of amplified RNA silencing by plants.</a> Trends Plant Sci. 13, 317-328 (2008).</li><li>Ekengren, S. K., Liu, Y., Schiff, M., Kumar-Dinesh, S. P., Martin, G. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Two+MAPK+cascades,+NPR1,+and+TGA+transcription+factors+play+a+role+in+Pto-mediated+disease+resistance+in+tomato.">Two MAPK cascades, NPR1, and TGA transcription factors play a role in Pto-mediated disease resistance in tomato.</a> Plant J. 36, 905-917 (2003).</li><li>Liu, E., Page, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optimized+cDNA+libraries+for+virus-induced+gene+silencing+(VIGS)+using+tobacco+rattle+virus.">Optimized cDNA libraries for virus-induced gene silencing (VIGS) using tobacco rattle virus.</a> Plant. Methods. 4, 5-5 (2008).</li></ol>

فيروس من صنع إسكات الجين هو الأسلوب الذي يسمح السريع شاشات الجينية العكسية. انها تتجنب توليد T - DNA أو الجينات بوساطة ينقول تدق الرافضة ، والتي لا تتوفر إلا في بعض النباتات مثل الذرة وArabidopsis. انها تلتف أيضا عملية تستغرق وقتا طويلا لتحويل النباتات ويسمح للاستهداف ج?...

virus-induced gene silencing (vigs) in nicotiana benthamiana and tomato

تدخل الحمض النووي الريبي (رني) هي محددة للغاية إسكات الجينات الظاهرة سببها الرنا المزدوج الجديلة 1. هذه الآلية إسكات يستخدم اثنين من الفئات الكبرى من المنظمين RNA : microRNAs ، والتي يتم إنتاجها من البروتين غير ترميز الجينات وقصيرة الرناوات التدخل (siRNAs). استخدام النباتات لمكافحة رني ترانسبوزونات وممارسة رقابة مشددة على عمليات التنمية مثل تشكيل هيئة زهرة نبات 2،3،4 والتنمية. النباتات أيضا استخدام رني للدفاع عن أنفسهم ضد عدوى الفيروسات. وبالتالي ، تطورت العديد من الفيروسات المكثفات من إسكات جينات للسماح بنجاح استعمارها المضيفة 5. فيروس من صنع إسكات الجينات (VIGS) هو الأسلوب الذي يستفيد من رني بوساطة محطة الآلية الدفاعية المضادة للفيروسات. في النباتات المصابة بفيروسات معدلة وتستهدف على وجه التحديد آلية ضد الجينوم الفيروسي. ومع ذلك ، مع ناقلات تحمل الفيروس تسلسل الجينات المستمدة من المضيف ، ويمكن بالإضافة إلى ذلك استهدفت عملية ضد mRNAs المضيف المطابق. وقد تم تكييفها لVIGS عالية الإنتاجية الجينوميات الوظيفية في النباتات باستخدام محطة الممرض المورمة الأجرعية لتسليم عبر تي في البلازميد ، وهو فيروس المؤتلف تحمل كامل أو جزء من تسلسل الجينات المستهدفة لإسكات. النظامية انتشار الفيروس وآلات مصنع الذاتية رني رعاية بقية. ويتم إنتاج dsRNAs المقابلة لهدف والجينات المشقوق ثم بواسطة المقامر ريبونوكلياز في siRNAs من 21-24 النيوكليوتيدات في الطول. هذه النهاية siRNAs دليل الحمض النووي الريبي التي يسببها إسكات المعقدة (RISC) أن تتحلل نص الهدف 2. وقد استخدمت ناقلات مختلفة في VIGS ويستند واحدة من أكثر استخداما على التبغ حشرجة فيروس (TRV). TRV هو فيروس الثنائية ، وكما ألف اثنين من الممثلين ، ومختلف تستخدم سلالات المورمة لVIGS. واحد يحمل pTRV1 ، الذي يشفر وظائف النسخ والحركة الفيروسية في حين أن الآخر ، pTRV2 والموانئ معطف البروتين وتسلسل المستخدمة لVIGS 6،7. تلقيح benthamiana نيكوتيانا وشتلات الطماطم مع خليط من سلالات النتائج سواء في إسكات الجينات. يستخدم إسكات الجين phytoene الذاتية (PDS) desaturase ، والذي يسبب photobleaching ، بوصفها لمراقبة كفاءة VIGS. وتجدر الإشارة إلى أنه ، مع ذلك ، أن إسكات في الطماطم هي عادة أقل كفاءة مما كان عليه في N. benthamiana. وينبغي دائما RNA فرة نسخة من هذا الجين من الفائدة يمكن قياسها للتأكد من أن الجينات المستهدفة أسفل تم بكفاءة التنظيم. ومع ذلك ، تسلسل الجينات غيري من N. يمكن أن تستخدم لإسكات benthamiana orthologs كل منهما في الطماطم ، والعكس بالعكس 8.

Watch this Scientific Journal Video about Virus-induced Gene Silencing VIGS in Nicotiana benthamiana and Tomato at JoVE.com

Virus-induced Gene Silencing VIGS in Nicotiana benthamiana and Tomato

وصف لطريقة التي يسببها الفيروس الجين (VIGS) لإسكات أسفل طرق التعبير الجيني في<em&gt; نيكوتيانا benthamiana</em&gt; والطماطم.

فيروس من صنع جين إسكات (VIGS) في نيكوتيانا benthamiana والطماطم

RNA interference (RNAi) is a highly specific gene-silencing phenomenon triggered by dsRNA1. This silencing mechanism uses two major classes of RNA ...

Research

JoVE Journal

Biology

Virus-induced Gene Silencing (VIGS) in Nicotiana benthamiana and Tomato

Live Cell Calcium Imaging Combined with siRNA Mediated Gene Silencing Identifies Ca2+ Leak Channels in the ER Membrane and their Regulatory Mechanisms

Live Cell Calcium Imaging Combined with siRNA Mediated Gene Silencing Identifies Ca2+ Leak Channels in the ER Membrane and their Regulatory Mechanisms

يعيش التصوير الكالسيوم الخلية المشتركة مع وساطة سيرنا إسكات الجينات يحدد كا 2 + قنوات تسرب في غشاء ER وآلياتها التنظيمية

In mammalian cells, the endoplasmic reticulum (ER) plays a key role in protein biogenesis as well as in calcium signalling1. The heterotrimeric Sec61 ...

Induction and Testing of Hypoxia in Cell Culture

التعريفي واختبار نقص الأكسجة في الثقافة خلية

Hypoxia is defined as the reduction or lack of oxygen in organs, tissues, or cells.  This decrease of oxygen tension can be due to a reduced supply in ...

Agrobacterium-Mediated Virus-Induced Gene Silencing Assay In Cotton

الأجرعية بوساطة الفيروسات إسكات الجينات المستحثة الفحص في القطن

Cotton (Gossypium hirsutum) is one of the most important crops worldwide. Considerable efforts have been made on molecular breeding of new varieties.  The ...

Isolation of Ribosome Bound Nascent Polypeptides in vitro to Identify Translational Pause Sites Along mRNA

Isolation of Ribosome Bound Nascent Polypeptides in vitro to Identify Translational Pause Sites Along mRNA

عزلة البروتينية ريبوسوم الوليدة منضم<em&gt; في المختبر</em&gt; لتحديد المواقع وقفة بالحركة على طول مرنا

The rate of translational elongation is non-uniform. mRNA secondary structure, codon usage and mRNA associated proteins may alter ribosome movement on the ...

Using SecM Arrest Sequence as a Tool to Isolate Ribosome Bound Polypeptides

باستخدام SecM تسلسل توقيف كأداة لعزل البروتينية منضم ريبوسوم

Extensive research has provided ample evidences suggesting that protein folding in the cell is a co-translational process1-5. However, the exact pathway ...

Agroinfiltration and PVX Agroinfection in Potato and Nicotiana benthamiana

Agroinfiltration and PVX Agroinfection in Potato and Nicotiana benthamiana

الترشيح الزراعي والإصابة بالزراعة PVX في البطاطا ونيكوتيانا بنثاميانا

Agroinfiltration and PVX agroinfection are two efficient transient expression assays for functional analysis of candidate genes in plants. The most ...

Optimization and Utilization of Agrobacterium-mediated Transient Protein Production in Nicotiana

Optimization and Utilization of Agrobacterium-mediated Transient Protein Production in Nicotiana

الأمثل والاستفادة من<em&gt; الأجرعية</em&gt; بوساطة إنتاج بروتين عابر في<em&gt; نيكوتيانا</em

Agrobacterium-mediated transient protein production in plants is a promising approach to produce vaccine antigens and therapeutic proteins within a short ...

Chitosan/Interfering RNA Nanoparticle Mediated Gene Silencing in Disease Vector Mosquito Larvae

الشيتوزان / التدخل RNA الجسيمات النانوية وساطة جين إسكات في الأمراض ناقل يرقات البعوض

Vector mosquitoes inflict more human suffering than any other organism&#8212;and kill more than one million people each year. The mosquito genome projects ...

Meiotic Spindle Assessment in Mouse Oocytes by siRNA-mediated Silencing

تقييم المغزل الانتصافي في ماوس البويضات التي كتبها بوساطة سيرنا إسكات

Errors in chromosome segregation during meiotic division in gametes can lead to aneuploidy that is subsequently transmitted to the embryo upon ...

Luciferase Complementation Imaging Assay in Nicotiana benthamiana Leaves for Transiently Determining Protein-protein Interaction Dynamics

Luciferase Complementation Imaging Assay in Nicotiana benthamiana Leaves for Transiently Determining Protein-protein Interaction Dynamics

لوسيفراس "التكامل بالتصوير الإنزيم" في أوراق نيكوتيانا بينثاميانا "تحديد عابر ديناميات التفاعل" البروتين-بروتين

Protein-protein interactions are fundamental mechanisms for relaying signal transduction in most cellular processes; therefore, identification of novel ...