Name: virus-induced gene silencing (vigs) in nicotiana benthamiana and tomato
Uploaded: 2009-06-10T00:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Virus-induced Gene Silencing VIGS in Nicotiana benthamiana and Tomato at JoVE.com

אנו מודים ד&quot;ר פטרישיה Manosalva עבור תובנות רבות ערך לה על כתב היד. המימון ניתן על ידי תוכנית הקרן הלאומית למדע הצמח הגנום, מספר פרס DBI-0605059.

חלק 1: חומר הצמח נ &#39;מפעלי benthamiana משמש להשתקת צריך להיות סביב ½ 2 שבועות וזה הזמן שבו cotyledons ו 2 הראשון - 4 עלים אמיתיים צמחו. (Solanum lycopersicum) צמחי עגבניות משמשים 7-8 ימים שלאחר הופעתה, כאשר העלים נכון עדיין לא הופיע. <p class="jove_title" s...

<ol>
	<li>Voinnet, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=RNA+silencing+as+a+plant+immune+system+against+viruses.">RNA silencing as a plant immune system against viruses.</a> Trends Genet. 17, 449-459 (2001).</li><li>Carrington, J. C., Ambros, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+microRNAs+in+plant+and+animal+development.">Role of microRNAs in plant and animal development.</a> Science. 301, 336-338 (2003).</li><li>Chen, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+microRNA+as+a+translational+repressor+of+APETALA2+in+Arabidopsis+flower+development.">A microRNA as a translational repressor of APETALA2 in Arabidopsis flower development.</a> Science. 303, 2022-2025 (2004).</li><li>Palatnik, J. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Control+of+leaf+morphogenesis+by+microRNAs.">Control of leaf morphogenesis by microRNAs.</a> Nature. 425, 257-263 (2003).</li><li>Brigneti, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Viral+pathogenicity+determinants+are+suppressors+of+transgene+silencing+in+Nicotiana+benthamiana.">Viral pathogenicity determinants are suppressors of transgene silencing in Nicotiana benthamiana.</a> EMBO J. 17, 6739-6746 (1998).</li><li>Liu, Y., Schiff, M., Dinesh-Kumar, S. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Virus-induced+gene+silencing+in+tomato.">Virus-induced gene silencing in tomato.</a> Plant Journal. 31, 777-786 (2002).</li><li>MacFarlane, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+biology+of+the+tobraviruses.">Molecular biology of the tobraviruses.</a> J. Gen. Virol. 80, 2799-2807 (1999).</li><li>Senthil-Kumar, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+systematic+study+to+determine+the+extent+of+gene+silencing+in+Nicotiana+benthamiana+and+other+Solanaceae+species+when+heterologous+gene+sequences+are+used+for+virus-induced+gene+silencing.">A systematic study to determine the extent of gene silencing in Nicotiana benthamiana and other Solanaceae species when heterologous gene sequences are used for virus-induced gene silencing.</a> New Phytol. 176, 782-791 (2007).</li><li>McCullen, C. A., Binns, A. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Agrobacterium+tumefaciens+and+plant+cell+interactions+and+activities+required+for+interkingdom+macromolecular+transfer.">Agrobacterium tumefaciens and plant cell interactions and activities required for interkingdom macromolecular transfer.</a> Annu. Rev. Cell Dev. Biol. 22, 101-127 (2006).</li><li>Rosebrock, T. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+bacterial+E3+ubiquitin+ligase+targets+a+host+protein+kinase+to+disrupt+plant+immunity.">A bacterial E3 ubiquitin ligase targets a host protein kinase to disrupt plant immunity.</a> Nature. 448, 370-374 (2007).</li><li>Miki, D., Itoh, R., Shimamoto, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=RNA+silencing+of+single+and+multiple+members+in+a+gene+family+of+rice.">RNA silencing of single and multiple members in a gene family of rice.</a> Plant Physiol. 138, 1903-1913 (2005).</li><li>Voinnet, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use,+tolerance+and+avoidance+of+amplified+RNA+silencing+by+plants.">Use, tolerance and avoidance of amplified RNA silencing by plants.</a> Trends Plant Sci. 13, 317-328 (2008).</li><li>Ekengren, S. K., Liu, Y., Schiff, M., Kumar-Dinesh, S. P., Martin, G. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Two+MAPK+cascades,+NPR1,+and+TGA+transcription+factors+play+a+role+in+Pto-mediated+disease+resistance+in+tomato.">Two MAPK cascades, NPR1, and TGA transcription factors play a role in Pto-mediated disease resistance in tomato.</a> Plant J. 36, 905-917 (2003).</li><li>Liu, E., Page, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optimized+cDNA+libraries+for+virus-induced+gene+silencing+(VIGS)+using+tobacco+rattle+virus.">Optimized cDNA libraries for virus-induced gene silencing (VIGS) using tobacco rattle virus.</a> Plant. Methods. 4, 5-5 (2008).</li></ol>

Virus-Induced השתקת הגן היא שיטה המאפשרת מהירה מסכי גנטית הפוכה. זה ימנע את הדור של T-DNA או גן transposon בתיווך דפיקה-outs, אשר זמינים רק בצמחים מסוימים כמו ארבידופסיס תירס. זה גם עוקף את התהליך לארוך זמן רב של טרנספורמציה הצמח מאפשר מיקוד של גנים מרובים בו זמנית, בתנאי שיש להם ?...

virus-induced gene silencing (vigs) in nicotiana benthamiana and tomato

התערבות RNA (RNAi) היא מאוד ספציפיות גנים והשתקת תופעה מופעלות על ידי dsRNA 1. מנגנון ההשתקה משתמשת בשני סוגים עיקריים של הרגולטורים RNA: מיקרו RNA, שהן המופק ללא חלבון גנים קידוד RNAs התערבות קצר (siRNAs). צמחים משתמשים RNAi לשלוט transposons ולהפעיל פיקוח הדוק על תהליכים התפתחותיים כגון היווצרות איברים פרח ופיתוח עלה 2,3,4. צמחים גם להשתמש RNAi להגן על עצמם מפני זיהום על ידי וירוסים. כתוצאה מכך, וירוסים רבים התפתחו מדכאי השתקה של הגן על מנת לאפשר התיישבות מוצלח שלהם של המארח שלהם 5. Virus-Induced להשתקת גנים (VIGS) היא שיטה שמנצלת מנגנון המפעל RNAi בתיווך הגנה אנטי. במפעלי נגוע וירוסים ללא שינוי מנגנון מיועד במיוחד נגד הגנום הויראלי. עם זאת, עם וקטורים וירוס נושאת רצפי גנים שמקורם המארח, תהליך זה יכול להיות ממוקד ובנוסף נגד mRNAs המארח המתאים. VIGS הותאם תפוקה גבוהה גנומיקה פונקציונלית בצמחים באמצעות הצמח tumefaciens הפתוגן Agrobacterium לספק, באמצעות פלסמיד Ti שלה, וירוס רקומביננטי הנושא את כולו או חלק מרצף הגן ממוקד עבור השתקה. התפשטות הנגיף מערכתית במפעל אנדוגני RNAi מכונות לדאוג לשאר. dsRNAs המתאים הגן היעד מיוצרים ביקע מכן על ידי דייסר ribonuclease לתוך siRNAs של 21-24 נוקלאוטידים אורך. SiRNAs אלה בסופו של דבר המדריך RNA-Induced השתקה מורכבות (RISC) לבזות את התמליל היעד 2. וקטורים שונים כבר המועסקים VIGS ואחד הנפוצים ביותר מבוסס על טבק רעשן וירוס (TRV). TRV הוא וירוס bipartite, וכפי א, כגון שונה two זנים tumefaciens משמשים VIGS. אחת נושאת pTRV1, אשר מקודד את השכפול ואת התנועה פונקציות ויראלי בעוד אחרים, pTRV2, נמלים החלבון המעיל ואת הרצף המשמש VIGS 6,7. הרכבה של ניקוטיאנה benthamiana ושתילי העגבניות בתערובת של שני זנים תוצאות ב להשתקת גנים. השתקת הגן אנדוגני phytoene (PDS) desaturase, הגורמת photobleaching, משמש לשלוט ליעילות VIGS. יצוין, עם זאת, ההשתקה של העגבניות הוא בדרך כלל פחות יעיל מאשר נ benthamiana. שפע תעתיק הרנ&quot;א של הגן של עניין תמיד צריך להימדד על מנת להבטיח כי הגן היעד כבר ביעילות למטה מוסדר. עם זאת, הגן רצפים Heterologous מ נ benthamiana ניתן להשתמש כדי להשתיק orthologs שלהם ברוטב עגבניות ולהיפך 8.

Watch this Scientific Journal Video about Virus-induced Gene Silencing VIGS in Nicotiana benthamiana and Tomato at JoVE.com

Virus-induced Gene Silencing VIGS in Nicotiana benthamiana and Tomato

תיאור וירוס-Induced שיטה להשתקת (VIGS) הגן לדפוק למטה של ​​ביטוי גנים<em&gt; ניקוטיאנה benthamiana</em&gt; עגבניות.

Virus-Induced להשתקת גנים (VIGS) ב ניקוטיאנה benthamiana עגבניות

RNA interference (RNAi) is a highly specific gene-silencing phenomenon triggered by dsRNA1. This silencing mechanism uses two major classes of RNA ...

Research

JoVE Journal

Biology

Virus-induced Gene Silencing (VIGS) in Nicotiana benthamiana and Tomato

Live Cell Calcium Imaging Combined with siRNA Mediated Gene Silencing Identifies Ca2+ Leak Channels in the ER Membrane and their Regulatory Mechanisms

Live Cell Calcium Imaging Combined with siRNA Mediated Gene Silencing Identifies Ca2+ Leak Channels in the ER Membrane and their Regulatory Mechanisms

תא חי סידן הדמיה בשילוב עם השתקת siRNA מתווכת ג&#39;ין מזהה Ca 2 + ערוצי דליפה בקרום ER ו מנגנוני ויסות שלהם

In mammalian cells, the endoplasmic reticulum (ER) plays a key role in protein biogenesis as well as in calcium signalling1. The heterotrimeric Sec61 ...

Induction and Testing of Hypoxia in Cell Culture

אינדוקציה ובדיקה של היפוקסיה בתרבות התא

Hypoxia is defined as the reduction or lack of oxygen in organs, tissues, or cells.  This decrease of oxygen tension can be due to a reduced supply in ...

Agrobacterium-Mediated Virus-Induced Gene Silencing Assay In Cotton

Agrobacterium בתיווך Virus-induced ג&#39;ין השתקת Assay כותנה

Cotton (Gossypium hirsutum) is one of the most important crops worldwide. Considerable efforts have been made on molecular breeding of new varieties.  The ...

Isolation of Ribosome Bound Nascent Polypeptides in vitro to Identify Translational Pause Sites Along mRNA

Isolation of Ribosome Bound Nascent Polypeptides in vitro to Identify Translational Pause Sites Along mRNA

הבידוד של הריבוזום פוליפפטידים המתהווה כרוכים<em&gt; במבחנה</em&gt; כדי לזהות אתרים השהה של תרגום לאורך ה-mRNA

The rate of translational elongation is non-uniform. mRNA secondary structure, codon usage and mRNA associated proteins may alter ribosome movement on the ...

Using SecM Arrest Sequence as a Tool to Isolate Ribosome Bound Polypeptides

באמצעות רצף מעצר SecM ככלי לבודד פוליפפטידים כרוכים הריבוזום

Extensive research has provided ample evidences suggesting that protein folding in the cell is a co-translational process1-5. However, the exact pathway ...

Agroinfiltration and PVX Agroinfection in Potato and Nicotiana benthamiana

Agroinfiltration and PVX Agroinfection in Potato and Nicotiana benthamiana

אגרוינפינציה ו- PVX אגרוינבינציה בתפוח אדמה וניקוטיאנה בנתאמיאנה

Agroinfiltration and PVX agroinfection are two efficient transient expression assays for functional analysis of candidate genes in plants. The most ...

Optimization and Utilization of Agrobacterium-mediated Transient Protein Production in Nicotiana

Optimization and Utilization of Agrobacterium-mediated Transient Protein Production in Nicotiana

אופטימיזציה וניצול<em&gt; Agrobacterium</emייצור חלבון חלוף&gt; בתיווך ב<em&gt; Nicotiana</em

Agrobacterium-mediated transient protein production in plants is a promising approach to produce vaccine antigens and therapeutic proteins within a short ...

Chitosan/Interfering RNA Nanoparticle Mediated Gene Silencing in Disease Vector Mosquito Larvae

Chitosan / השתקת הגנים RNA Nanoparticle המתווכת להתערב במחלת וקטור כילה נגד זחלים

Vector mosquitoes inflict more human suffering than any other organism&#8212;and kill more than one million people each year. The mosquito genome projects ...

Meiotic Spindle Assessment in Mouse Oocytes by siRNA-mediated Silencing

Meiotic ציר ההערכה בעכבר ביציות על ידי השתקה בתיווך siRNA

Errors in chromosome segregation during meiotic division in gametes can lead to aneuploidy that is subsequently transmitted to the embryo upon ...

Luciferase Complementation Imaging Assay in Nicotiana benthamiana Leaves for Transiently Determining Protein-protein Interaction Dynamics

Luciferase Complementation Imaging Assay in Nicotiana benthamiana Leaves for Transiently Determining Protein-protein Interaction Dynamics

לוציפראז קומפלמנטציה הדמיה Assay העלים טבק benthamiana עבור Transiently קביעת חלבון אינטראקציה דינמיקה

Protein-protein interactions are fundamental mechanisms for relaying signal transduction in most cellular processes; therefore, identification of novel ...