Name: virus-induced gene silencing (vigs) in nicotiana benthamiana and tomato
Uploaded: 2009-06-10T00:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Virus-induced Gene Silencing VIGS in Nicotiana benthamiana and Tomato at JoVE.com

私たちは、原稿上で彼女の貴重な洞察力のために博士パトリシアManosalvaに感謝。資金は、全米科学財団の植物ゲノムのプログラム、受賞番号DBI - 0605059で提供されていました。

パート1：植物材料サイレンシングのために使用されるN. benthamiana植物は2前後となるはず½子葉や最初の2時間である週は古い- 4本葉が浮上している。 8日間の後出現、真の葉はまだ登場していない-トマト（ トマト ）の植物は、7を使用されています。 パート2：VIGS 1日目<ol><li>各実験、pTRV1をかくまってアグロバクテ?...

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	<li>Voinnet, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=RNA+silencing+as+a+plant+immune+system+against+viruses.">RNA silencing as a plant immune system against viruses.</a> Trends Genet. 17, 449-459 (2001).</li><li>Carrington, J. 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K., Liu, Y., Schiff, M., Kumar-Dinesh, S. P., Martin, G. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Two+MAPK+cascades,+NPR1,+and+TGA+transcription+factors+play+a+role+in+Pto-mediated+disease+resistance+in+tomato.">Two MAPK cascades, NPR1, and TGA transcription factors play a role in Pto-mediated disease resistance in tomato.</a> Plant J. 36, 905-917 (2003).</li><li>Liu, E., Page, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optimized+cDNA+libraries+for+virus-induced+gene+silencing+(VIGS)+using+tobacco+rattle+virus.">Optimized cDNA libraries for virus-induced gene silencing (VIGS) using tobacco rattle virus.</a> Plant. Methods. 4, 5-5 (2008).</li></ol>

ウイルス誘発性遺伝子サイレンシングは、急速な逆遺伝学的スクリーンを可能にする方法です。それは、T - DNAまたはシロイヌナズナとトウモロコシのような特定の植物にのみ利用可能なトランスポゾン媒介遺伝子ノックアウトアウト、の生成が回避される。また、植物形質転換の時間のかかるプロセスを回避し、彼らが10またはその別のホストの標的配列を十分な相同性を持?...

virus-induced gene silencing (vigs) in nicotiana benthamiana and tomato

RNA干渉（RNAi）は、dsRNAの1によって引き起こさ非常に特異的な遺伝子サイレンシングの現象です。マイクロRNA、非蛋白質をコードする遺伝子と短い干渉RNA（siRNA）から生成されています：このサイレンシング機構は、RNAのレギュレータの2つの主要なクラスを使用しています。植物は、トランスポゾンを制御するため、および花の器官形成と葉の開発2,3,4などの発達過程を厳密にコントロールを発揮するために、RNAiを使用してください。植物はまた、ウイルスによる感染から身を守るために、RNAiを使用してください。その結果、多くのウイルスはその宿主5の彼らの成功した植民地化を可能にするためにサイレンシング遺伝子の抑制を進化させてきた。 ウイルス誘発性遺伝子サイレンシング（VIGS）は、植物RNAiによる抗ウイルス防御機構を利用する方法です。変更されていないウイルスに感染した植物では機構は、特にウイルスのゲノム比較対象としています。しかし、ホストの遺伝子由来の配列を有するウイルスベクターを用いて、プロセスはさらに、対応するホストのmRNAを対象とすることのできる。 VIGSは、プラスミド、そのチタン、全体またはサイレンシングの対象となる遺伝子配列の一部を担持する組換えウイルスを介して、配信するために植物病原体アグロバクテリウムツメファシエンスを使用して、植物におけるハイスループットゲノム機能解析に適応されています。全身性ウイルスの拡散と内生植物のRNAi機構は、残りの世話をする。標的遺伝子に対応するdsRNAは長さ21〜24ヌクレオチドのsiRNAへのリボヌクレアーゼのダイサーによって生成され、その後切断されています。これらのsiRNAは最終的にターゲット転写物2を分解するRNA誘導サイレンシング複合体（RISC）を導く。 異なるベクターはVIGSで採用されていると、最も頻繁に使用されるのいずれかがタバコ茎えそウイルス（TRV）に基づいています。 TRVは、二分ウイルスであり、そのような、二つの異なるAとしてツメファシエンス株は 、VIGSに使用されます。一つは、pTRV2、他のコートタンパク質とVIGS 6,7のために使用されるシーケンスを庇護しながら複製し、動きのウイルスの機能をコードpTRV1を、運びます。遺伝子サイレンシングの菌株の結果、両方の混合物とタバコbenthamianaとトマトの苗を接種。退色の原因内因性フィトエンデサチュラーゼ（PDS）遺伝子のサイレンシングは、VIGSの効率のためのコントロールとして使用されます。それはトマトのサイレンシングは通常Nに比べて非効率であること、しかし、注意すべきであるbenthamiana。目的の遺伝子のRNA転写物の豊富さは、常に、ターゲット遺伝子を効率的にダウンレギュレートされていることを保証するために測定する必要があります。 N.からそれにもかかわらず、異種遺伝子配列benthamiana、トマト、その逆も8で、それぞれのオルソログを黙らせるために使用することができます。

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Virus-induced Gene Silencing VIGS in Nicotiana benthamiana and Tomato

ノックダウン遺伝子発現の内のウイルス誘発性遺伝子サイレンシング（VIGS）メソッドの説明<em&gt;タバコbenthamiana</em&gt;とトマト。

ウイルス誘導ジーンサイレンシング（VIGS）でタバコbenthamianaとトマト

RNA interference (RNAi) is a highly specific gene-silencing phenomenon triggered by dsRNA1. This silencing mechanism uses two major classes of RNA ...

Research

JoVE Journal

Biology

Virus-induced Gene Silencing (VIGS) in Nicotiana benthamiana and Tomato

Live Cell Calcium Imaging Combined with siRNA Mediated Gene Silencing Identifies Ca2+ Leak Channels in the ER Membrane and their Regulatory Mechanisms

Live Cell Calcium Imaging Combined with siRNA Mediated Gene Silencing Identifies Ca2+ Leak Channels in the ER Membrane and their Regulatory Mechanisms

siRNAを介した遺伝子サイレンシングと組み合わせることで生細胞のカルシウムイメージングでは、CAを識別 2 + ER膜のリークチャネルとその調節機序

In mammalian cells, the endoplasmic reticulum (ER) plays a key role in protein biogenesis as well as in calcium signalling1. The heterotrimeric Sec61 ...

Induction and Testing of Hypoxia in Cell Culture

細胞培養で誘導し、低酸素のテスト

Hypoxia is defined as the reduction or lack of oxygen in organs, tissues, or cells.  This decrease of oxygen tension can be due to a reduced supply in ...

Agrobacterium-Mediated Virus-Induced Gene Silencing Assay In Cotton

コットンでアグロバクテリウムを介したウイルス誘発遺伝子サイレンシングアッセイ

Cotton (Gossypium hirsutum) is one of the most important crops worldwide. Considerable efforts have been made on molecular breeding of new varieties.  The ...

Isolation of Ribosome Bound Nascent Polypeptides in vitro to Identify Translational Pause Sites Along mRNA

Isolation of Ribosome Bound Nascent Polypeptides in vitro to Identify Translational Pause Sites Along mRNA

リボソーム結合した新生ポリペプチドの分離<em&gt; in vitroで</em&gt; mRNAに沿って並進一時サイトを識別するために

The rate of translational elongation is non-uniform. mRNA secondary structure, codon usage and mRNA associated proteins may alter ribosome movement on the ...

Using SecM Arrest Sequence as a Tool to Isolate Ribosome Bound Polypeptides

リボソーム結合したポリペプチドを単離するためのツールと​​してSECM逮捕シーケンスを使用して、

Extensive research has provided ample evidences suggesting that protein folding in the cell is a co-translational process1-5. However, the exact pathway ...

Agroinfiltration and PVX Agroinfection in Potato and Nicotiana benthamiana

Agroinfiltration and PVX Agroinfection in Potato and Nicotiana benthamiana

ジャガイモとニコティアナベンタミアナにおけるアグロインフィルトレーションとPVXアグロパネクチ

Agroinfiltration and PVX agroinfection are two efficient transient expression assays for functional analysis of candidate genes in plants. The most ...

Optimization and Utilization of Agrobacterium-mediated Transient Protein Production in Nicotiana

Optimization and Utilization of Agrobacterium-mediated Transient Protein Production in Nicotiana

最適化と利用の<em&gt;アグロバクテリウム</em中&gt;媒介一過性タンパク質産生<em&gt;タバコ</em

Agrobacterium-mediated transient protein production in plants is a promising approach to produce vaccine antigens and therapeutic proteins within a short ...

Chitosan/Interfering RNA Nanoparticle Mediated Gene Silencing in Disease Vector Mosquito Larvae

病気のベクトル蚊幼虫におけるキトサン/干渉RNAナノ粒子媒介遺伝子サイレンシング

Vector mosquitoes inflict more human suffering than any other organism&#8212;and kill more than one million people each year. The mosquito genome projects ...

Meiotic Spindle Assessment in Mouse Oocytes by siRNA-mediated Silencing

siRNA媒介サイレンシングによるマウス卵母細胞における減数分裂紡錘体の評価

Errors in chromosome segregation during meiotic division in gametes can lead to aneuploidy that is subsequently transmitted to the embryo upon ...

Luciferase Complementation Imaging Assay in Nicotiana benthamiana Leaves for Transiently Determining Protein-protein Interaction Dynamics

Luciferase Complementation Imaging Assay in Nicotiana benthamiana Leaves for Transiently Determining Protein-protein Interaction Dynamics

ベンサミアーナ タバコ葉蛋白質蛋白質の相互作用ダイナミクスの一過性の決定のための試金補完ルシフェラーゼ イメージング

Protein-protein interactions are fundamental mechanisms for relaying signal transduction in most cellular processes; therefore, identification of novel ...