Name: virus-induced gene silencing (vigs) in nicotiana benthamiana and tomato
Uploaded: 2009-06-10T00:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Virus-induced Gene Silencing VIGS in Nicotiana benthamiana and Tomato at JoVE.com

Agradecemos a la Dra. Patricia Manosalva por su valiosa información sobre el manuscrito. El financiamiento fue proporcionado por el Programa Nacional de Ciencia Fundación Genoma Vegetal, el número de premios DBI-0605059.

Parte 1: El material vegetal Plantas de N. benthamiana utiliza para silenciar debe estar alrededor de 2 ½ semanas de edad, que es el momento en que los cotiledones y las primeras 2 a 4 hojas verdaderas, han surgido. Tomate (Solanum lycopersicum) se utilizan plantas 7 a 8 días después de la emergencia, cuando las hojas verdaderas aún no han aparecido. Parte 2: VIGS DIA 1 <ol><li> Para cada experimento, Agrobacter...

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	<li>Voinnet, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=RNA+silencing+as+a+plant+immune+system+against+viruses.">RNA silencing as a plant immune system against viruses.</a> Trends Genet. 17, 449-459 (2001).</li><li>Carrington, J. 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Inducida por el virus de silenciamiento génico es un método que permite una rápida pantallas de genética inversa. Evita la generación de T-ADN o genes transposón mediada por knock-out, que sólo están disponibles en ciertas plantas como Arabidopsis y el maíz. También se evita el proceso que lleva tiempo de transformación de la planta y permite la focalización de los múltiples genes al mismo tiempo, siempre que tengan suficiente homología de 10 o de que las diferentes secuencias de host d...

virus-induced gene silencing (vigs) in nicotiana benthamiana and tomato

ARN de interferencia (ARNi) es una muy específica silenciamiento génico fenómeno desencadenado por dsRNA 1. Este mecanismo de silenciamiento utiliza dos clases principales de los reguladores de ARN: los microRNAs, que se producen a partir de los genes que codifican proteínas y ARN corto de interferencia (siRNA). Las plantas utilizan la RNAi para controlar los transposones y ejercer un estricto control sobre los procesos de desarrollo tales como la formación de órganos florales y desarrollo de las hojas 2,3,4. Las plantas también el uso de RNAi para defenderse de la infección por virus. En consecuencia, muchos virus han evolucionado de silenciamiento de genes supresores de permitir la colonización exitosa de su anfitrión 5. Inducida por el virus de silenciamiento génico (VIGS) es un método que se aprovecha de la planta mediante RNAi mecanismo de defensa antiviral. En las plantas infectadas con el virus sin modificar el mecanismo está dirigido específicamente contra el genoma viral. Sin embargo, con los vectores de virus que lleva las secuencias derivadas de los genes del hospedador, el proceso puede ser, además, dirigidos contra el ARNm de host correspondiente. VIGS ha sido adaptado de alto rendimiento para la genómica funcional en plantas mediante el uso de los patógenos de plantas Agrobacterium tumefaciens para ofrecer, a través de su plásmido Ti, un virus recombinante que lleva la totalidad o parte de la secuencia del gen diana para silenciar. Propagación del virus y la endógena sistémica planta de RNAi maquinaria cuidar de los demás. dsRNAs correspondiente a la meta de genes se producen y se escinde luego por la ribonucleasa Dicer en siRNA de 21 a 24 nucleótidos de longitud. Estos siRNAs en última instancia, la Guía del silenciamiento inducido por ARN complejo (RISC) para degradar la transcripción de la meta 2. Diferentes vectores se han utilizado en VIGS y uno de los más utilizados se basa en el tabaco sonajero virus (TRV). TRV es un virus bipartito y, como tales A., dos diferentes tumefaciens cepas se utilizan para VIGS. Uno lleva pTRV1, que codifica las funciones de replicación viral y el movimiento mientras que el otro, pTRV2, alberga la proteína de la cubierta y la secuencia utilizada para VIGS 6,7. La inoculación de Nicotiana benthamiana y plántulas de tomate con una mezcla de ambas cepas de resultados en el silenciamiento de genes. El silenciamiento de la endógena fitoeno desaturasa (PDS) de genes, lo que hace que photobleaching, se utiliza como control de la eficiencia VIGS. Cabe señalar, sin embargo, que el silenciamiento de tomate suele ser menos eficiente que en N. benthamiana. La abundancia de transcripción de ARN del gen de interés siempre se debe medir para asegurarse de que el objetivo de genes de manera eficiente ha sido regulados. Sin embargo, las secuencias de genes heterólogos de N. benthamiana puede ser utilizado para silenciar a sus respectivos orthologs en ​​el tomate y viceversa 8.

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Virus-induced Gene Silencing VIGS in Nicotiana benthamiana and Tomato

Descripción de un virus inducida por silenciamiento génico (VIGS) método de derribo de la expresión génica en<em&gt; Nicotiana benthamiana</em&gt; Y el tomate.

Inducida por el virus de silenciamiento génico (VIGS) en Nicotiana benthamiana Y tomate

RNA interference (RNAi) is a highly specific gene-silencing phenomenon triggered by dsRNA1. This silencing mechanism uses two major classes of RNA ...

Research

JoVE Journal

Biology

Virus-induced Gene Silencing (VIGS) in Nicotiana benthamiana and Tomato

Live Cell Calcium Imaging Combined with siRNA Mediated Gene Silencing Identifies Ca2+ Leak Channels in the ER Membrane and their Regulatory Mechanisms

Live Cell Calcium Imaging Combined with siRNA Mediated Gene Silencing Identifies Ca2+ Leak Channels in the ER Membrane and their Regulatory Mechanisms

Imágenes en vivo del calcio celular combinado con el silenciamiento de genes mediada por siRNA Identifica Ca 2 + Canales de fugas en la membrana del ER y sus mecanismos de regulación

In mammalian cells, the endoplasmic reticulum (ER) plays a key role in protein biogenesis as well as in calcium signalling1. The heterotrimeric Sec61 ...

Investigación

Biología

Induction and Testing of Hypoxia in Cell Culture

Inducción y prueba de hipoxia en el cultivo celular

Hypoxia is defined as the reduction or lack of oxygen in organs, tissues, or cells.  This decrease of oxygen tension can be due to a reduced supply in ...

Agrobacterium-Mediated Virus-Induced Gene Silencing Assay In Cotton

Mediada por Agrobacterium inducida por el virus Gene ensayo silenciamiento en algodón

Cotton (Gossypium hirsutum) is one of the most important crops worldwide. Considerable efforts have been made on molecular breeding of new varieties.  The ...

Isolation of Ribosome Bound Nascent Polypeptides in vitro to Identify Translational Pause Sites Along mRNA

Isolation of Ribosome Bound Nascent Polypeptides in vitro to Identify Translational Pause Sites Along mRNA

El aislamiento de los ribosomas polipéptidos nacientes Bound<em&gt; In vitro</em&gt; Para la identificación de sitios de traslación pausa a lo largo del ARNm

The rate of translational elongation is non-uniform. mRNA secondary structure, codon usage and mRNA associated proteins may alter ribosome movement on the ...

Using SecM Arrest Sequence as a Tool to Isolate Ribosome Bound Polypeptides

Usar secuencias de detención SecM como una herramienta para aislar Ribosome polipéptidos enlazados

Extensive research has provided ample evidences suggesting that protein folding in the cell is a co-translational process1-5. However, the exact pathway ...

Agroinfiltration and PVX Agroinfection in Potato and Nicotiana benthamiana

Agroinfiltration and PVX Agroinfection in Potato and Nicotiana benthamiana

Agroinfiltración y PVX Agroinfección en Papa y Nicotiana benthamiana

Agroinfiltration and PVX agroinfection are two efficient transient expression assays for functional analysis of candidate genes in plants. The most ...

Optimization and Utilization of Agrobacterium-mediated Transient Protein Production in Nicotiana

Optimization and Utilization of Agrobacterium-mediated Transient Protein Production in Nicotiana

La optimización y utilización de<em&gt; Agrobacterium</em&gt; Mediada por la producción de proteína transitoria en<em&gt; Nicotiana</em

Agrobacterium-mediated transient protein production in plants is a promising approach to produce vaccine antigens and therapeutic proteins within a short ...

Chitosan/Interfering RNA Nanoparticle Mediated Gene Silencing in Disease Vector Mosquito Larvae

El quitosano / ARN de interferencia mediada por nanopartículas silenciamiento génico en la enfermedad vectorial larvas de mosquitos

Vector mosquitoes inflict more human suffering than any other organism&#8212;and kill more than one million people each year. The mosquito genome projects ...

Meiotic Spindle Assessment in Mouse Oocytes by siRNA-mediated Silencing

Evaluación del huso meiótico en ovocitos de ratón por silenciamiento siRNA mediada

Errors in chromosome segregation during meiotic division in gametes can lead to aneuploidy that is subsequently transmitted to the embryo upon ...

Luciferase Complementation Imaging Assay in Nicotiana benthamiana Leaves for Transiently Determining Protein-protein Interaction Dynamics

Luciferase Complementation Imaging Assay in Nicotiana benthamiana Leaves for Transiently Determining Protein-protein Interaction Dynamics

Complementación de luciferase imagen ensayo en hojas de Nicotiana benthamiana para determinar transitoriamente proteínas interacción dinámica

Protein-protein interactions are fundamental mechanisms for relaying signal transduction in most cellular processes; therefore, identification of novel ...