Name: imaging exocytosis in retinal bipolar cells with tirf microscopy
Uploaded: 2009-06-09T00:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Imaging Exocytosis in Retinal Bipolar Cells with TIRF Microscopy at JoVE.com

وأيد هذا العمل من قبل المعاهد الوطنية للصحة منح EY 14990.

الجزء 1 : تشريح القطبين وعزل الخلايا <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إعداد الحلول المدرجة في الجدول 2 ، والرقم الهيدروجيني للقارعو الأجراس &quot;(الخارجية) وينبغي تعديلها إلى 7.4 مع حلول هيدروكسيد الصوديوم ، وينبغي تعديل الرقم الهيدروجيني من الحل الداخل...

<ol>
	<li>Axelrod, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Total+internal+reflection+fluorescence+microscopy+in+cell+biology.">Total internal reflection fluorescence microscopy in cell biology.</a> Traffic. 2, 764-774 (2001).</li><li>Zenisek, D., Steyer, J. A., Almers, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transport,+capture+and+exocytosis+of+single+synaptic+vesicles+at+active+zones.">Transport, capture and exocytosis of single synaptic vesicles at active zones.</a> Nature. 406, 849-854 (2000).</li><li>Zenisek, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vesicle+association+and+exocytosis+at+ribbon+and+extraribbon+sites+in+retinal+bipolar+cell+presynaptic+terminals.">Vesicle association and exocytosis at ribbon and extraribbon sites in retinal bipolar cell presynaptic terminals.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 105, 4922-4927 (2008).</li><li>Zenisek, D., Horst, N. K., Merrifield, C., Sterling, P., Matthews, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Visualizing+synaptic+ribbons+in+the+living+cell.">Visualizing synaptic ribbons in the living cell.</a> J. Neurosci. 24, 9752-9759 (2004).</li><li>Axelrod, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Selective+imaging+of+surface+fluorescence+with+very+high+aperture+microscope+objectives.">Selective imaging of surface fluorescence with very high aperture microscope objectives.</a> J. Biomed. Opt. 6, 6-13 (2001).</li><li>Rouze, N. C., Schwartz, E. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Continous+and+transient+vesicle+cycling+at+a+ribbon+synapse.">Continous and transient vesicle cycling at a ribbon synapse.</a> J. Neurosci. 18, 8614-8624 (1998).</li></ol>

مزايا المجهري TIRF الهدف من النوع هي أن 1) أنه يوفر sectioning البصرية ممتازة من خلال تقييد ضوء الإثارة إلى منطقة ضيقة داخل الطائرة البؤرية لهذا الهدف ، وبالتالي تقليل الخروج من تركيز الضوء ؛ 2) منذ قطرات الضوء بشكل كبير ، مع المسافة يمكن رصد حركة في اتجاه عمودي على أنه تغيير في كثافة مضا?...

imaging exocytosis in retinal bipolar cells with tirf microscopy

مجموع الانعكاس الداخلي مضان (TIRF) المجهري هو الاسلوب الذي يسمح للدراسة الأحداث يحدث في غشاء الخلية ، من خلال التصوير الانتقائي للجزيئات الفلورسنت التي هي أقرب إلى مادة الانكسار ارتفاع الرقم القياسي مثل الزجاج<sup&gt; 1</sup&gt;. في هذه المقالة ، ونحن نطبق هذه التقنية لإيماس صورة حويصلات متشابك في خلايا الشبكية القطبين معزولة من الشبكية ذهبية. هذه الخلايا العصبية هي مناسبة جدا لهذا النوع من الدراسة بسبب هذه المحطات محور عصبي كبير. قبل التصحيح في وقت واحد لقط الخلايا القطبين ، فمن الممكن للتحقيق في العلاقة بين مرحلة ما قبل متشابك الجهد والإفراج متشابك<sup&gt; 2،3</sup&gt;. يتم تحميل حويصلات متشابك داخل الخلية محطات القطبين مع صبغة الفلورسنت (FM 1-43 ®) التي شاركت في النفخ الصبغة وإيجاد حل الجرس K يحتوي على ارتفاع<sup&gt; +</sup&gt; التركيز على المحطات متشابك. هذا depolarizes الخلايا ويحفز امتصاص الصبغة الإلتقام وما يترتب على ذلك إلى الحويصلات glutamatergic. بعد غسل الصبغة بعيدا عن نحو 30 دقيقة ، والخلايا التي تكون جاهزة للتصوير والتصحيح فرضت في وقت واحد مع ليزر 488 نانومتر. الحل ماصة التصحيح يحتوي على الببتيد المستندة رودامين التي تربط بشكل انتقائي للRIBEYE الشريط بروتين متشابك<sup&gt; 4</sup&gt; ، مما وسم الشرائط المصورة على وجه التحديد عند محطات مع ليزر 561 نانومتر. هذا يسمح للتوطين الدقيق للمناطق نشطة وفصل متشابك من خارج متشابك الأحداث.

Watch this Scientific Journal Video about Imaging Exocytosis in Retinal Bipolar Cells with TIRF Microscopy at JoVE.com

Imaging Exocytosis in Retinal Bipolar Cells with TIRF Microscopy

في هذا الفيديو ، ونحن لشرح كيفية تسمية واحدة تصور إيماس حويصلة متشابك والاتجار في خلايا شبكية العين باستخدام القطبين ذهبية مجموع مضان الانعكاس الداخلي (TIRF) المجهري.

إيماس التصوير في خلايا الشبكية مع القطبين الميكروسكوب TIRF

Total internal reflectance fluorescence (TIRF) microscopy is a technique that allows the study of events happening at the cell membrane, by selective ...

Research

JoVE Journal

Biology

Measuring Exocytosis in Neurons Using FM Labeling

قياس إيماس في الخلايا العصبية عن طريق وصفها وزير الخارجية

The ability to measure the kinetics of vesicle release can help provide insight into some of the basics of neurotransmission.  Here we used real-time ...

Long-term Imaging Mammalian Cells using Wide-Field Microscopy

التصوير خلايا الثدييات على المدى الطويل باستخدام الميكروسكوب واسعة الميدانية

Labeling Stem Cells with Fluorescent Dyes for non-invasive Detection with Optical Imaging

وسم الخلايا الجذعية مع الأصباغ نيون للمنظمات غير الغازية مع الكشف عن التصوير الضوئي

Optical imaging (OI) is an easy, fast and inexpensive tool for in vivo monitoring of new stem cell based therapies. The technique is based on ex vivo ...

Fluorescence-based Measurement of Store-operated Calcium Entry in Live Cells: from Cultured Cancer Cell to Skeletal Muscle Fiber

مضان القائم على القياس من دخول الكالسيوم المتجر الذي يعمل في الخلايا الحية: من خلية السرطان مثقف على عضلة

Store operated Ca2+ entry (SOCE), earlier termed capacitative Ca2+ entry, is a tightly regulated mechanism for influx of extracellular Ca2+ into cells to ...

In Vivo 4-Dimensional Tracking of Hematopoietic Stem and Progenitor Cells in Adult Mouse Calvarial Bone Marrow

In Vivo 4-Dimensional Tracking of Hematopoietic Stem and Progenitor Cells in Adult Mouse Calvarial Bone Marrow

في فيفو تتبع 4 الأبعاد للالجذعية المكونة للدم والسلف الكبار في خلايا الفأر قبي نخاع العظم

Through a delicate balance between quiescence and proliferation, self renewal and production of differentiated progeny, hematopoietic stem cells (HSCs) ...

Fluorescence Imaging with One-nanometer Accuracy (FIONA)

Fluorescence Imaging with One-nanometer Accuracy FIONA

التصوير مضان مع نانومتر دقة واحدة (FIONA)

Fluorescence imaging with one-nanometer accuracy (FIONA) is a simple but useful technique for localizing single fluorophores with nanometer precision in ...

Tandem High-pressure Freezing and Quick Freeze Substitution of Plant Tissues for Transmission Electron Microscopy

جنبا إلى جنب تجميد الضغط العالي والسريع تجميد استبدال الأنسجة النباتية للنقل المجهر الإلكتروني

Since the 1940s transmission electron microscopy (TEM) has been providing biologists with ultra-high resolution images of biological materials. Yet, ...

A Graphical User Interface for Software-assisted Tracking of Protein Concentration in Dynamic Cellular Protrusions

واجهة المستخدم الرسومية لتتبع بمساعدة برنامج تركيز البروتين في النتوءات الخلوية الديناميكية

Filopodia are dynamic, finger-like cellular protrusions associated with migration and cell-cell communication. In order to better understand the complex ...

Imaging FITC-dextran as a Reporter for Regulated Exocytosis

تصوير فيتك-ديكستران كمراسل للرقابة الخاضعة للتنظيم

Regulated exocytosis is a process by which cargo, which is stored in secretory granules (SGs), is released in response to a secretory trigger. Regulated ...

Biological Sample Preparation by High-pressure Freezing, Microwave-assisted Contrast Enhancement, and Minimal Resin Embedding for Volume Imaging

إعداد العينات البيولوجية بالتجميد ذات الضغط العالي، وتعزيز النقيض ساعدت الموجات الدقيقة، والحد الأدنى راتنج التضمين لتصوير حجم

The described sample preparation technique is designed to combine the best quality of ultrastructural preservation with the most suitable contrast for the ...