Name: imaging exocytosis in retinal bipolar cells with tirf microscopy
Uploaded: 2009-06-09T00:00:00
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Ce travail a été soutenu par des subventions du NIH EY 14990.

Partie 1: Dissection et isolement des cellules bipolaires <ol><li> Préparer des solutions énumérées dans le tableau 2; Le pH de sonneries &#39;(extérieurs) des solutions devraient être ajusté à 7,4 avec NaOH et le pH de la solution interne devrait être ajusté à 7,2 avec CsOH. Protéger la solution interne de la lumière avec du papier aluminium et gardez à 4 ° C jusqu&#39;à leur utilisation; </li><li> Dark-adapter un poisson rouge pendant au moins 30 minutes avant la dissection; </li><li> Alors que l&#39...

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	<li>Axelrod, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Total+internal+reflection+fluorescence+microscopy+in+cell+biology.">Total internal reflection fluorescence microscopy in cell biology.</a> Traffic. 2, 764-774 (2001).</li><li>Zenisek, D., Steyer, J. A., Almers, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transport,+capture+and+exocytosis+of+single+synaptic+vesicles+at+active+zones.">Transport, capture and exocytosis of single synaptic vesicles at active zones.</a> Nature. 406, 849-854 (2000).</li><li>Zenisek, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vesicle+association+and+exocytosis+at+ribbon+and+extraribbon+sites+in+retinal+bipolar+cell+presynaptic+terminals.">Vesicle association and exocytosis at ribbon and extraribbon sites in retinal bipolar cell presynaptic terminals.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 105, 4922-4927 (2008).</li><li>Zenisek, D., Horst, N. K., Merrifield, C., Sterling, P., Matthews, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Visualizing+synaptic+ribbons+in+the+living+cell.">Visualizing synaptic ribbons in the living cell.</a> J. Neurosci. 24, 9752-9759 (2004).</li><li>Axelrod, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Selective+imaging+of+surface+fluorescence+with+very+high+aperture+microscope+objectives.">Selective imaging of surface fluorescence with very high aperture microscope objectives.</a> J. Biomed. Opt. 6, 6-13 (2001).</li><li>Rouze, N. C., Schwartz, E. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Continous+and+transient+vesicle+cycling+at+a+ribbon+synapse.">Continous and transient vesicle cycling at a ribbon synapse.</a> J. Neurosci. 18, 8614-8624 (1998).</li></ol>

Les avantages de l&#39;objectif de type microscopie TIRF sont que 1) il fournit une excellente sectionnement optique en limitant la lumière d&#39;excitation à une région étroite dans le plan focal de l&#39;objectif, minimisant ainsi les focus-du-léger; 2) car la lumière tombe exponentiellement avec la distance , le mouvement dans une direction verticale peut être surveillé comme un changement dans l&#39;intensité de fluorescence; 3) la collecte efficace de la lumière à travers l&#39;objectif d&#39;ouverture numérique élevée <s...

imaging exocytosis in retinal bipolar cells with tirf microscopy

Réflectance interne totale de fluorescence (FRBR) microscopie est une technique qui permet l&#39;étude des événements qui se déroulent à la membrane cellulaire, l&#39;imagerie par sélectif des molécules fluorescentes qui sont proches d&#39;une substance indice de réfraction élevé, comme le verre<sup&gt; 1</sup&gt;. Dans cet article, nous appliquons cette technique à l&#39;exocytose image de vésicules synaptiques dans les cellules rétiniennes bipolaires isolés de la rétine des poissons rouges. Ces neurones sont très convenable pour ce genre d&#39;étude en raison de leur grande terminaisons axonales. Par simultanément patch clamp les cellules bipolaires, il est possible d&#39;étudier la relation entre la tension pré-synaptique et la libération synaptique<sup&gt; 2,3</sup&gt;. Les vésicules synaptiques l&#39;intérieur des terminaux cellulaires bipolaires sont chargées avec un colorant fluorescent (FM 1-43 ®) par la co-soufflant le colorant et une solution de Ringer contenant un K élevé<sup&gt; +</supConcentration&gt; sur le terminaisons synaptiques. Cette dépolarise les cellules et stimule l&#39;endocytose et conséquente absorption de colorants dans les vésicules glutamatergique. Après le lavage l&#39;excès de colorant loin pour environ 30 minutes, les cellules sont prêtes pour être serré de patch et imagé simultanément avec un laser à 488 nm. La solution la pipette de patch contient un peptide rhodamine base qui se lie sélectivement à l&#39;RIBEYE protéines synaptiques ruban<sup&gt; 4</sup&gt;, Ce qui l&#39;étiquetage des rubans spécifiquement lorsque les terminaux sont imagés avec un laser 561 nm. Cela permet la localisation précise des zones actives et la séparation des synaptique à partir des événements extra-synaptiques.

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Imaging Exocytosis in Retinal Bipolar Cells with TIRF Microscopy

Dans cette vidéo, nous démontrons comment étiqueter et de visualiser seule exocytose des vésicules synaptiques et la traite des cellules rétiniennes bipolaires poissons rouges en utilisant la fluorescence totale internes réflectance (FRBR) microscopie.

L&#39;exocytose imagerie dans les cellules bipolaires rétine par microscopie TIRF

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Measuring Exocytosis in Neurons Using FM Labeling

Mesure exocytose dans les neurones en utilisant un étiquetage FM

The ability to measure the kinetics of vesicle release can help provide insight into some of the basics of neurotransmission.  Here we used real-time ...

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Long-term Imaging Mammalian Cells using Wide-Field Microscopy

Cellules d&#39;imagerie à long terme des mammifères en utilisant la microscopie à champ large

Labeling Stem Cells with Fluorescent Dyes for non-invasive Detection with Optical Imaging

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Optical imaging (OI) is an easy, fast and inexpensive tool for in vivo monitoring of new stem cell based therapies. The technique is based on ex vivo ...

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Basées sur la fluorescence de mesure de l&#39;entrée du calcium magasin fonctionnant dans des cellules vivantes: à partir de cellules cancéreuses en culture de fibre musculaire squelettique

Store operated Ca2+ entry (SOCE), earlier termed capacitative Ca2+ entry, is a tightly regulated mechanism for influx of extracellular Ca2+ into cells to ...

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In Vivo suivi 4-Dimensional de hématopoïétiques cellules souches et progénitrices adultes dans la voûte du crâne de souris de moelle osseuse

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L&#39;imagerie de fluorescence avec un nanomètre Précision (FIONA)

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Tandem High-pressure Freezing and Quick Freeze Substitution of Plant Tissues for Transmission Electron Microscopy

Tandem de congélation à haute pression et rapide Gel Remplacement de tissus végétaux pour microscopie électronique à transmission

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A Graphical User Interface for Software-assisted Tracking of Protein Concentration in Dynamic Cellular Protrusions

Une interface utilisateur graphique pour le suivi assisté par logiciel de la concentration de protéines dans les protrusions cellulaires dynamiques

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Biological Sample Preparation by High-pressure Freezing, Microwave-assisted Contrast Enhancement, and Minimal Resin Embedding for Volume Imaging

Préparation de l’échantillon biologique par congélation à haute pression, amélioration du contraste assistée par micro-ondes et minime résine enrobage pour l’imagerie de Volume

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