Name: imaging exocytosis in retinal bipolar cells with tirf microscopy
Uploaded: 2009-06-09T00:00:00
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이 작품은 NIH 그랜트 어이 14990에 의해 지원되었다.

1 부 : 해부 및 바이폴라 셀 절연 <ol><li> 표 2에 나열된 솔루션을 준비, 링거스 &#39;의 산도는 (외부) 솔루션은 NaOH와 7.4으로 조정되어야하며 내부 솔루션의 산도는 7.2 CsOH로 조정해야합니다. 알루미늄 호일과 빛으로부터 내부 솔루션을 보호하고 4를 유지 ° C를 사용까지; </li><li> 해부하기 전에 적어도 30 분 금붕어를 어두운 적응; </li><li> (; 시그마, 세인트 루이스, MO 낮은 칼슘 2 + 링거스 입?...

<ol>
	<li>Axelrod, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Total+internal+reflection+fluorescence+microscopy+in+cell+biology.">Total internal reflection fluorescence microscopy in cell biology.</a> Traffic. 2, 764-774 (2001).</li><li>Zenisek, D., Steyer, J. A., Almers, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transport,+capture+and+exocytosis+of+single+synaptic+vesicles+at+active+zones.">Transport, capture and exocytosis of single synaptic vesicles at active zones.</a> Nature. 406, 849-854 (2000).</li><li>Zenisek, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vesicle+association+and+exocytosis+at+ribbon+and+extraribbon+sites+in+retinal+bipolar+cell+presynaptic+terminals.">Vesicle association and exocytosis at ribbon and extraribbon sites in retinal bipolar cell presynaptic terminals.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 105, 4922-4927 (2008).</li><li>Zenisek, D., Horst, N. K., Merrifield, C., Sterling, P., Matthews, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Visualizing+synaptic+ribbons+in+the+living+cell.">Visualizing synaptic ribbons in the living cell.</a> J. Neurosci. 24, 9752-9759 (2004).</li><li>Axelrod, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Selective+imaging+of+surface+fluorescence+with+very+high+aperture+microscope+objectives.">Selective imaging of surface fluorescence with very high aperture microscope objectives.</a> J. Biomed. Opt. 6, 6-13 (2001).</li><li>Rouze, N. C., Schwartz, E. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Continous+and+transient+vesicle+cycling+at+a+ribbon+synapse.">Continous and transient vesicle cycling at a ribbon synapse.</a> J. Neurosci. 18, 8614-8624 (1998).</li></ol>

빛이 거리와 함께 기하 급수적으로 방울 년부터 2) 목적 형 TIRF 현미경의 장점은 1) 그함으로써 빛을 - 오브 - 초점 밖으로 최소화 목적의 초점 평면 내의 좁은 지역에 여기 광을 제한함으로써 우수한 광학 sectioning을 제공한다는 점입니다 , 수직 방향으로 움직임은 형광 강도의 변화로 모니터링할 수 있으며, 높은 수치 조리개 목적 1.5을 통해 3) 효율적인 조명 컬렉션. 기술의 주요 단점은 그것이 전자 ...

imaging exocytosis in retinal bipolar cells with tirf microscopy

총 내부 반사율 형광 (TIRF) 현미경은 유리 같은 높은 굴절률 물질에 가까운 형광 분자의 선택적 이미징에 의해 세포막에서 일어나는 사건의 연구를 수있게 해주는 기술입니다<sup&gt; 1</sup&gt;. 이 문서에서는, 우리는 금붕어 망막으로부터 격리 망막 바이폴라 세포의 시냅스 vesicles의 이미지 exocytosis이 기술을 적용할 수 있습니다. 이 뉴런들은 대형 축삭 터미널로 인해 이런 종류의 연구에 매우 적합합니다. 양극성 세포를 클램핑 동시에 패치함으로써, 사전 시냅스 전압과 시냅스 릴리스 사이의 관계를 조사 수 있습니다<sup&gt; 2,3</sup&gt;. 양극성 세포 터미널 내부 시냅스 vesicles가에 의해 형광 염료 (FM 1-43 ®)와 함께 로드된 공동 피고 높은 K를 포함하는 염료와 닮은 솔루션<sup&gt; +</sup시냅스 터미널에&gt; 집중. 이것은 세포를 depolarizes하고 glutamatergic vesicles에 endocytosis와 결과의 염료 이해를 촉진. 약 30 분 거리에 여분의 염료를 세척 후, 전지는 패치가 고정되어와 488 nm의 레이저와 동시에 몇 군데 것에 대해 준비가되어 있습니다. 패치 피펫 솔루션은 시냅스 리본 단백질 RIBEYE을 선택 바인딩 rhodamine 기반의 펩티드를 포함<sup&gt; 4</sup&gt; 단말기가 561 nm의 레이저로 몇 군데있을 때이를 구체적으로 리본을 라벨. 이것은 활성 영역의 정확한 현지화 및 추가 - 시냅스 이벤트에서 시냅스의 분리 수 있습니다.

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Imaging Exocytosis in Retinal Bipolar Cells with TIRF Microscopy

이 비디오에서는, 우리는 총 내부 반사율의 형광 (TIRF) 현미경을 사용하여 금붕어 망막 바이폴라 세포에서 단일 시냅스 소포의 exocytosis와 인​​신 매매를 라벨 및 시각화하는 방법을 보여줍니다.

TIRF 현미경과 망막 바이폴라 세포 이미징 Exocytosis

Total internal reflectance fluorescence (TIRF) microscopy is a technique that allows the study of events happening at the cell membrane, by selective ...

Research

JoVE Journal

Biology

Measuring Exocytosis in Neurons Using FM Labeling

FM 레이블을 사용하여 뉴런의 Exocytosis 측정

The ability to measure the kinetics of vesicle release can help provide insight into some of the basics of neurotransmission.  Here we used real-time ...

연구

생물학

Long-term Imaging Mammalian Cells using Wide-Field Microscopy

와이드 필드 현미경을 사용하여 장기 이미징 포유 동물 세포

Labeling Stem Cells with Fluorescent Dyes for non-invasive Detection with Optical Imaging

광학 이미징과 비침습 감지를위한 형광 염료와 함께 줄기 세포를 라벨링

Optical imaging (OI) is an easy, fast and inexpensive tool for in vivo monitoring of new stem cell based therapies. The technique is based on ex vivo ...

Fluorescence-based Measurement of Store-operated Calcium Entry in Live Cells: from Cultured Cancer Cell to Skeletal Muscle Fiber

라이브 세포의 저장소로 작동하는 칼슘 항목의 형광 기반의 측정 : 교양 암 세포에서 골격근 섬유에

Store operated Ca2+ entry (SOCE), earlier termed capacitative Ca2+ entry, is a tightly regulated mechanism for influx of extracellular Ca2+ into cells to ...

In Vivo 4-Dimensional Tracking of Hematopoietic Stem and Progenitor Cells in Adult Mouse Calvarial Bone Marrow

In Vivo 4-Dimensional Tracking of Hematopoietic Stem and Progenitor Cells in Adult Mouse Calvarial Bone Marrow

성인 마우스 두개골 골수에서 조혈 줄기 및 전구 세포의 생체 내 4 차원 추적에서

Through a delicate balance between quiescence and proliferation, self renewal and production of differentiated progeny, hematopoietic stem cells (HSCs) ...

Fluorescence Imaging with One-nanometer Accuracy (FIONA)

Fluorescence Imaging with One-nanometer Accuracy FIONA

하나 나노 미터의 정확도와 형광 이미징 (피오나)

Fluorescence imaging with one-nanometer accuracy (FIONA) is a simple but useful technique for localizing single fluorophores with nanometer precision in ...

Tandem High-pressure Freezing and Quick Freeze Substitution of Plant Tissues for Transmission Electron Microscopy

탠덤 고압 냉동 및 투과 전자 현미경을위한 식물 조직의 빠른 동결 교체

Since the 1940s transmission electron microscopy (TEM) has been providing biologists with ultra-high resolution images of biological materials. Yet, ...

A Graphical User Interface for Software-assisted Tracking of Protein Concentration in Dynamic Cellular Protrusions

동적 세포 돌출부에서 소프트웨어를 이용한 단백질 농도 추적을위한 그래픽 사용자 인터페이스

Filopodia are dynamic, finger-like cellular protrusions associated with migration and cell-cell communication. In order to better understand the complex ...

Imaging FITC-dextran as a Reporter for Regulated Exocytosis

이미징 FITC-dextran 규제 Exocytosis 위한 기자로 서

Regulated exocytosis is a process by which cargo, which is stored in secretory granules (SGs), is released in response to a secretory trigger. Regulated ...

Biological Sample Preparation by High-pressure Freezing, Microwave-assisted Contrast Enhancement, and Minimal Resin Embedding for Volume Imaging

고압 냉동, 전자 레인지를 이용한 콘트라스트 향상, 그리고 볼륨 이미지에 대 한 포함 하는 최소한의 수 지에 의해 생물학 견본 준비

The described sample preparation technique is designed to combine the best quality of ultrastructural preservation with the most suitable contrast for the ...