Name: imaging exocytosis in retinal bipolar cells with tirf microscopy
Uploaded: 2009-06-09T00:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Imaging Exocytosis in Retinal Bipolar Cells with TIRF Microscopy at JoVE.com

Эта работа была поддержана NIH Грант EY 14990.

Часть 1: Разбор и изоляции Биполярный сотовый <ol><li> Подготовка решений, перечисленных в таблице 2; рН звонков &quot;(внешний) решения должны быть скорректированы до 7,4 с NaOH и рН внутреннего решения должны быть скорректированы до 7,2 с CsOH. Защита внутреннего решения от света с алюминиевой фоль...

<ol>
	<li>Axelrod, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Total+internal+reflection+fluorescence+microscopy+in+cell+biology.">Total internal reflection fluorescence microscopy in cell biology.</a> Traffic. 2, 764-774 (2001).</li><li>Zenisek, D., Steyer, J. A., Almers, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transport,+capture+and+exocytosis+of+single+synaptic+vesicles+at+active+zones.">Transport, capture and exocytosis of single synaptic vesicles at active zones.</a> Nature. 406, 849-854 (2000).</li><li>Zenisek, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vesicle+association+and+exocytosis+at+ribbon+and+extraribbon+sites+in+retinal+bipolar+cell+presynaptic+terminals.">Vesicle association and exocytosis at ribbon and extraribbon sites in retinal bipolar cell presynaptic terminals.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 105, 4922-4927 (2008).</li><li>Zenisek, D., Horst, N. K., Merrifield, C., Sterling, P., Matthews, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Visualizing+synaptic+ribbons+in+the+living+cell.">Visualizing synaptic ribbons in the living cell.</a> J. Neurosci. 24, 9752-9759 (2004).</li><li>Axelrod, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Selective+imaging+of+surface+fluorescence+with+very+high+aperture+microscope+objectives.">Selective imaging of surface fluorescence with very high aperture microscope objectives.</a> J. Biomed. Opt. 6, 6-13 (2001).</li><li>Rouze, N. C., Schwartz, E. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Continous+and+transient+vesicle+cycling+at+a+ribbon+synapse.">Continous and transient vesicle cycling at a ribbon synapse.</a> J. Neurosci. 18, 8614-8624 (1998).</li></ol>

Преимущества объективного типа микроскопии TIRF в том, что 1) он обеспечивает отличные оптические секционирования, ограничивая возбуждающего света к узкой области в фокальной плоскости объектива, тем самым минимизируя вне фокусировать свет, 2), поскольку световые капли экспоненциально с расстояни?...

imaging exocytosis in retinal bipolar cells with tirf microscopy

Полное внутреннее отражение флуоресценции (TIRF) микроскопия является метод, который позволяет изучать события, происходящие на клеточную мембрану, селективного изображений флуоресцентных молекул, которые находятся ближе всего к высоким показателем преломления вещества, такие как стекло<sup&gt; 1</sup&gt;. В этой статье мы применяем эту технику, чтобы изображение экзоцитоза синаптических пузырьков в биполярных клеток сетчатки изолированы от золотой рыбки сетчатки. Эти нейроны очень подходит для такого рода исследования из-за их больших терминалов аксона. При одновременном патч зажима биполярные клетки, можно исследовать отношения между пресинаптических напряжения и синаптических релиз<sup&gt; 2,3</sup&gt;. Synaptic пузырьков внутри терминалов биполярные ячейки загружаются с флуоресцентным красителем (FM 1-43 ®) путем совместного пыхтя красителя и звонка раствор, содержащий высокие K<sup&gt; +</sup&gt; Концентрация на синаптических терминалов. Это деполяризует клеток и стимулирует эндоцитоз и последующее поглощение красителя в глутаматергической пузырьков. После мытья избыток красителя далеко в течение около 30 минут, клетки готовы за то, что патч зажат и отображение одновременно с 488 нм лазер. Решение патч пипетки содержит родамина основе пептида, который избирательно связывается с белком синаптических Рибай лента<sup&gt; 4</sup&gt;, Таким образом, маркировка ленты особенно когда терминалы, полученную с использованием 561 нм лазер. Это позволяет точную локализацию активных зон и разделение синаптических от экстра-синаптических событий.

Watch this Scientific Journal Video about Imaging Exocytosis in Retinal Bipolar Cells with TIRF Microscopy at JoVE.com

Imaging Exocytosis in Retinal Bipolar Cells with TIRF Microscopy

В этом видео показано, как на этикетке и визуализировать один синаптических пузырьков экзоцитоза и торговлей золотыми рыбками биполярных клеток сетчатки использованием полного внутреннего отражения флуоресценции (TIRF) микроскопии.

Изображений экзоцитоза в клетки сетчатки Биполярный с Микроскопия TIRF

Total internal reflectance fluorescence (TIRF) microscopy is a technique that allows the study of events happening at the cell membrane, by selective ...

Research

JoVE Journal

Biology

Measuring Exocytosis in Neurons Using FM Labeling

Измерение экзоцитоза в Нейроны Использование FM-маркировки

The ability to measure the kinetics of vesicle release can help provide insight into some of the basics of neurotransmission.  Here we used real-time ...

Long-term Imaging Mammalian Cells using Wide-Field Microscopy

Долгосрочные изображений клетках млекопитающих использованием широкого поля микроскопии

Labeling Stem Cells with Fluorescent Dyes for non-invasive Detection with Optical Imaging

Маркировка стволовых клеток с флуоресцентными красителями для неинвазивного обнаружения оптических изображений с

Optical imaging (OI) is an easy, fast and inexpensive tool for in vivo monitoring of new stem cell based therapies. The technique is based on ex vivo ...

Fluorescence-based Measurement of Store-operated Calcium Entry in Live Cells: from Cultured Cancer Cell to Skeletal Muscle Fiber

Флуоресценции на основе измерения магазин управлением поступления кальция в живых клетках: от искусственного раковых клеток в скелетных мышечных волокон

Store operated Ca2+ entry (SOCE), earlier termed capacitative Ca2+ entry, is a tightly regulated mechanism for influx of extracellular Ca2+ into cells to ...

In Vivo 4-Dimensional Tracking of Hematopoietic Stem and Progenitor Cells in Adult Mouse Calvarial Bone Marrow

In Vivo 4-Dimensional Tracking of Hematopoietic Stem and Progenitor Cells in Adult Mouse Calvarial Bone Marrow

В Vivo 4-мерном Tracking гемопоэтических стволовых и клеток-предшественников в взрослой мыши свода черепа костного мозга

Through a delicate balance between quiescence and proliferation, self renewal and production of differentiated progeny, hematopoietic stem cells (HSCs) ...

Fluorescence Imaging with One-nanometer Accuracy (FIONA)

Fluorescence Imaging with One-nanometer Accuracy FIONA

Флуоресценции изображений с Один-нм Точность (Fiona)

Fluorescence imaging with one-nanometer accuracy (FIONA) is a simple but useful technique for localizing single fluorophores with nanometer precision in ...

Tandem High-pressure Freezing and Quick Freeze Substitution of Plant Tissues for Transmission Electron Microscopy

Тандем Замораживание высокого давления и резких похолоданий Замена тканей растений для просвечивающей электронной микроскопии

Since the 1940s transmission electron microscopy (TEM) has been providing biologists with ultra-high resolution images of biological materials. Yet, ...

A Graphical User Interface for Software-assisted Tracking of Protein Concentration in Dynamic Cellular Protrusions

Графический пользовательский интерфейс для отслеживания концентрации белка в программном сопровождении в динамических клеточных выпячиваниях

Filopodia are dynamic, finger-like cellular protrusions associated with migration and cell-cell communication. In order to better understand the complex ...

Imaging FITC-dextran as a Reporter for Regulated Exocytosis

Imaging FITC-декстран репортером для регулируемых экзоцитоз

Regulated exocytosis is a process by which cargo, which is stored in secretory granules (SGs), is released in response to a secretory trigger. Regulated ...

Biological Sample Preparation by High-pressure Freezing, Microwave-assisted Contrast Enhancement, and Minimal Resin Embedding for Volume Imaging

Подготовка биологический образец высокого давления замораживания, при содействии Микроволновая печь контрастности и минимальным смолы, встраивание образов тома

The described sample preparation technique is designed to combine the best quality of ultrastructural preservation with the most suitable contrast for the ...