Name: live cell imaging of f-actin dynamics via fluorescent speckle microscopy (fsm)
Uploaded: 2009-08-05T19:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Live Cell Imaging of F-actin Dynamics via Fluorescent Speckle Microscopy FSM at JoVE.com

ويتم تمويل تطوير qFSM من U01 منحة المعاهد الوطنية للصحة GM06230.

المادة 1 : الحصول على أكتين الخاص fluorescently المسمى لFSM المواد المطلوبة : تنقية أكتين ، fluorophore (اليكسا ، X - رودامين مستحسن). G - العازلة ، نابذة فائقة السرعة <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ومن المكونات الرئيسية لاكتساب ...

<ol>
	<li>Waterman-Storer, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fluorescent+speckle+microscopy+(FSM)+of+microtubules+and+actin+in+living+cells.">Fluorescent speckle microscopy (FSM) of microtubules and actin in living cells.</a> Curr Protoc Cell Biol. Chapter 4, Unit 4.10-Unit 4.10 (2002).</li><li>Ponti, A., Machacek, M., Gupton, S. L., Waterman-Storer, C. M., Danuser, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Two+distinct+actin+networks+drive+the+protrusion+of+migrating+cells.">Two distinct actin networks drive the protrusion of migrating cells.</a> Science. 305, 1782-1786 (2004).</li><li>Zhang, X. F., Schaefer, A. W., Burnette, D. T., Schoonderwoert, V. T., Forscher, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rho-dependent+contractile+responses+in+the+neuronal+growth+cone+are+independent+of+classical+peripheral+retrograde+actin+flow.">Rho-dependent contractile responses in the neuronal growth cone are independent of classical peripheral retrograde actin flow.</a> Neuron. 40, 931-944 (2003).</li><li>Salmon, W. C., Adams, M. C., Waterman-Storer, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dual-wavelength+fluorescent+speckle+microscopy+reveals+coupling+of+microtubule+and+actin+movements+in+migrating+cells.">Dual-wavelength fluorescent speckle microscopy reveals coupling of microtubule and actin movements in migrating cells.</a> J Cell Biol. 158, 31-37 (2002).</li><li>Danuser, G., Waterman-Storer, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantitative+fluorescent+speckle+microscopy+of+cytoskeleton+dynamics.">Quantitative fluorescent speckle microscopy of cytoskeleton dynamics.</a> Annu Rev Biophys Biomol Struct. 35, 361-387 (2006).</li></ol>

عدة عوامل رئيسية هي حاسمة لنجاح رقطة الحصول على الصور ، الرقطة جيدة ولكن تبدأ وتنتهي مع نوعية أكتين الخاص fluorescently المسمى. وهناك نسبة عالية من العلامات صبغ لمونومر أكتين ، بتعيين حوالي 0،4-0،7 ضمان الرقطة ستظهر مشرق ومنفصلة ، في حين أن البروتين المسمى ذاتها ينبغي أن تكون...

حقن العازلة (IB) 50 ملي الغلوتامات البوتاسيوم 0.5 M MgCl2 (الملحق 2A) تخزين ما يصل الى 2 سنوات في -20 درجة مئوية &nbsp; G - العازلة 2 مم تريس ⋅ الكلورين ، ودرجة الحموضة 8.0 (الملحق 2A) 0.2 ملم CaCl2 (الملحق 2A) إضافة قبل الاستخدام : 0.2 ملم ATP (راجع صفة ل100 ملم) 0.5 مم 2 - المركابتويثانول تخزين ما يصل إلى 1 في اليوم 4 درجات مئوية

live cell imaging of f-actin dynamics via fluorescent speckle microscopy (fsm)

في هذا البروتوكول وصفنا استخدام الميكروسكوب الرقطة نيون (FSM) لالتقاط صور عالية الدقة للديناميات أكتين PtK1 في الخلايا. وهناك ميزة فريدة من FSM هو قدرته على التقاط الحركة ودوران حركية (التجميع / التفكيك) من شبكة من طراز F - أكتين داخل الخلايا الحية. هذه التقنية مفيدة بشكل خاص في القياسات الكمية المستمدة من طراز F - أكتين ديناميات عندما يقترن برامج الكمبيوتر الرؤية (qFSM). نحن تصف التحديد ، والتصور microinjection تحقيقات أكتين الفلورية في الخلايا الحية. الأهم من ذلك ، إجراءات مماثلة تنطبق على تصور macomolecular الجمعيات الأخرى. وقد ثبت عن FSM ميكروتثبول ، خيوط وسيطة ، والمجمعات الالتصاق.

Watch this Scientific Journal Video about Live Cell Imaging of F-actin Dynamics via Fluorescent Speckle Microscopy FSM at JoVE.com

Live Cell Imaging of F-actin Dynamics via Fluorescent Speckle Microscopy FSM

الاختيار ، microinjection ، والتصوير من fluorescently المسمى F - أكتين عبر الفلورسنت رقطة المجهري (FSM).

يعيش التصوير خلية من طراز F - أكتين حيوية عن طريق الميكروسكوب الرقطة نيون (FSM)

In this protocol we describe the use of Fluorescent Speckle Microscopy (FSM) to capture high-resolution images of actin dynamics in PtK1 cells. A unique ...

Research

JoVE Journal

Biology

Live Cell Imaging of F-actin Dynamics via Fluorescent Speckle Microscopy (FSM)

Actin Co-Sedimentation Assay; for the Analysis of Protein Binding to F-Actin

أكتين المشارك الترسيب الفحص ، وبالنسبة للتحليل البروتين ملزمة لF - أكتين

The actin cytoskeleton within the cell is a network of actin filaments that allows the movement of cells and cellular processes, and that generates ...

Assembly, Loading, and Alignment of an Analytical Ultracentrifuge Sample Cell

التجمع ، والتحميل ، والمحاذاة لخلية نموذج تحليلي نابذة فائقة السرعة

The analytical ultracentrifuge (AUC) is a powerful biophysical tool that allows us to record macromolecular sedimentation profiles during high speed ...

Fluorescent Labeling of COS-7 Expressing SNAP-tag Fusion Proteins for Live Cell Imaging

الفلورسنت وصفها من COS - 7 تعرب عن البروتينات الانصهار SNAP - شعارا لتصوير الخلايا الحية

SNAP-tag and CLIP-tag protein labeling systems enable the specific, covalent attachment of molecules, including fluorescent dyes, to a protein of interest ...

Fluorescence-based Measurement of Store-operated Calcium Entry in Live Cells: from Cultured Cancer Cell to Skeletal Muscle Fiber

مضان القائم على القياس من دخول الكالسيوم المتجر الذي يعمل في الخلايا الحية: من خلية السرطان مثقف على عضلة

Store operated Ca2+ entry (SOCE), earlier termed capacitative Ca2+ entry, is a tightly regulated mechanism for influx of extracellular Ca2+ into cells to ...

Intravital Microscopy for Imaging Subcellular Structures in Live Mice Expressing Fluorescent Proteins

حيوي داخلي المجهري للهياكل التصوير التحت خلوية في الفئران لايف تعرب عن البروتينات الفلورية

Here we describe a procedure to image subcellular structures in live rodents that is based on the use of confocal intravital microscopy. As a model organ, ...

Real-time Imaging of Plant Cell Surface Dynamics with Variable-angle Epifluorescence Microscopy

التصوير في الوقت الحقيقي من النبات خلية سطح حيوية مع زاوية المتغير المجهر epifluorescence

A plant&#8217;s cell surface is its interface for perceiving environmental cues; it responds with cell biological changes such as membrane trafficking and ...

Three-dimensional Super Resolution Microscopy of F-actin Filaments by Interferometric PhotoActivated Localization Microscopy (iPALM)

Three-dimensional Super Resolution Microscopy of F-actin Filaments by Interferometric PhotoActivated Localization Microscopy iPALM

ثلاثي الأبعاد فائقة الدقة المجهر من الشعيرات F-أكتين من التداخل PhotoActivated التعريب المجهري (iPALM)

Fluorescence microscopy enables direct visualization of specific biomolecules within cells. However, for conventional fluorescence microscopy, the spatial ...

Exploiting Live Imaging to Track Nuclei During Myoblast Differentiation and Fusion

استغلال التصوير الحي إلى نويات المسار خلال ميوبلاست التمايز والانصهار

Nuclear positioning within cells is important for multiple cellular processes in development and regeneration. The most intriguing example of nuclear ...

Examination of Mitotic and Meiotic Fission Yeast Nuclear Dynamics by Fluorescence Live-cell Microscopy

فحص الديناميات النووية الخميرة الانشطارية الميتومية وMeiotic عن طريق الفلورة الخلية الحية المجهرية

Live-cell imaging is a microscopy technique used to examine cell and protein dynamics in living cells. This imaging method is not toxic, generally does ...

Live Cell Imaging to Assess the Dynamics of Metaphase Timing and Cell Fate Following Mitotic Spindle Perturbations

التصوير بالخلايا الحية لتقييم ديناميات توقيت الطور ومصير الخلية بعد اضطرابات المغزل الميتوتيك

Live cell time-lapse imaging is an important tool in cell biology that provides insight into cellular processes that might otherwise be overlooked, ...