Name: live cell imaging of f-actin dynamics via fluorescent speckle microscopy (fsm)
Uploaded: 2009-08-05T19:00:00
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qFSM के विकास NIH अनुदान U01 GM06230 द्वारा वित्त पोषित है.

धारा 1: FSM के लिए अपने fluorescently लेबल actin प्राप्त आवश्यक सामग्री: actin, की fluorophore (Alexa, की सिफारिश की एक्स - rhodamine) शुद्ध. जी बफर, ultracentrifuge <ol><li> अच्छा FSM फिल्में प्राप्त करने के लिए एक प्रमुख घटक actin की उचित अपनी पसंद की fl...

<ol>
	<li>Waterman-Storer, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fluorescent+speckle+microscopy+(FSM)+of+microtubules+and+actin+in+living+cells.">Fluorescent speckle microscopy (FSM) of microtubules and actin in living cells.</a> Curr Protoc Cell Biol. Chapter 4, Unit 4.10-Unit 4.10 (2002).</li><li>Ponti, A., Machacek, M., Gupton, S. L., Waterman-Storer, C. M., Danuser, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Two+distinct+actin+networks+drive+the+protrusion+of+migrating+cells.">Two distinct actin networks drive the protrusion of migrating cells.</a> Science. 305, 1782-1786 (2004).</li><li>Zhang, X. F., Schaefer, A. W., Burnette, D. T., Schoonderwoert, V. T., Forscher, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rho-dependent+contractile+responses+in+the+neuronal+growth+cone+are+independent+of+classical+peripheral+retrograde+actin+flow.">Rho-dependent contractile responses in the neuronal growth cone are independent of classical peripheral retrograde actin flow.</a> Neuron. 40, 931-944 (2003).</li><li>Salmon, W. C., Adams, M. C., Waterman-Storer, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dual-wavelength+fluorescent+speckle+microscopy+reveals+coupling+of+microtubule+and+actin+movements+in+migrating+cells.">Dual-wavelength fluorescent speckle microscopy reveals coupling of microtubule and actin movements in migrating cells.</a> J Cell Biol. 158, 31-37 (2002).</li><li>Danuser, G., Waterman-Storer, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantitative+fluorescent+speckle+microscopy+of+cytoskeleton+dynamics.">Quantitative fluorescent speckle microscopy of cytoskeleton dynamics.</a> Annu Rev Biophys Biomol Struct. 35, 361-387 (2006).</li></ol>

कई महत्वपूर्ण कारक महत्वपूर्ण हैं के लिए सफलतापूर्वक छवियों को प्राप्त करने धब्बा, लेकिन अच्छा speckles के शुरू और अपने fluorescently लेबल actin की गुणवत्ता के साथ खत्म. Actin monomer, 0.4 के आसपास 0.7 करने के लिए सेट करने के लिए डाई ?...

इंजेक्शन बफर (आईबी) 50 मिमी पोटेशियम ग्लूटामेट 0.5 एम MgCl2 (परिशिष्ट 2A) -20 डिग्री सेल्सियस पर 2 साल के लिए स्टोर &nbsp; जी - बफर 2 मिमी Tris ⋅ सीएल, पीएच 8.0 (2A परिशिष्ट) 0.2 मिमी CaCl2 (2A परिशिष्ट) बस का उपयोग करने से पहले जोड़ें: 0.2 मिमी एटीपी (100 मिमी के लिए नुस्खा देखें) 0.5 2 - mercaptoethanol मिमी 4 में 1 दिन के लिए स्टोर डिग्री सेल्सियस

live cell imaging of f-actin dynamics via fluorescent speckle microscopy (fsm)

हम इस प्रोटोकॉल का वर्णन प्रतिदीप्त का उपयोग माइक्रोस्कोपी (FSM) PtK1 कोशिकाओं में actin गतिशीलता के उच्च संकल्प छवियों पर कब्जा धब्बा. FSM का एक अनूठा लाभ इसके लिए जीवित कोशिकाओं के भीतर आंदोलन और एफ actin नेटवर्क के कारोबार कैनेटीक्स (विधानसभा / disassembly) पर कब्जा करने की क्षमता है. इस तकनीक को एफ actin गतिशीलता के मात्रात्मक मापन जब कंप्यूटर दृष्टि सॉफ्टवेयर (qFSM) के साथ बनती पाने में विशेष रूप से उपयोगी है. हम चयन microinjection, और जीवित कोशिकाओं में फ्लोरोसेंट actin जांच के दृश्य का वर्णन. महत्वपूर्ण बात है, इसी तरह की प्रक्रियाओं अन्य macomolecular विधानसभाओं visualizing करने के लिए लागू होते हैं. FSM सूक्ष्मनलिकाएं, मध्यवर्ती filaments, और आसंजन परिसरों के लिए प्रदर्शन किया गया.

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Live Cell Imaging of F-actin Dynamics via Fluorescent Speckle Microscopy FSM

चयन, microinjection, और इमेजिंग फ्लोरोसेंट के माध्यम से fluorescently लेबल एफ actin माइक्रोस्कोपी धब्बा (FSM).

एफ actin प्रतिदीप्त के माध्यम से गतिशीलता का लाइव सेल इमेजिंग माइक्रोस्कोपी धब्बा (FSM)

In this protocol we describe the use of Fluorescent Speckle Microscopy (FSM) to capture high-resolution images of actin dynamics in PtK1 cells. A unique ...

Research

JoVE Journal

Biology

Live Cell Imaging of F-actin Dynamics via Fluorescent Speckle Microscopy (FSM)

Actin Co-Sedimentation Assay; for the Analysis of Protein Binding to F-Actin

एफ actin के लिए बाइंडिंग प्रोटीन का विश्लेषण के लिए, actin सह अवसादन परख

The actin cytoskeleton within the cell is a network of actin filaments that allows the movement of cells and cellular processes, and that generates ...

Assembly, Loading, and Alignment of an Analytical Ultracentrifuge Sample Cell

विधानसभा, लोड हो रहा है, और एक विश्लेषणात्मक ultracentrifuge नमूना सेल के संरेखण

The analytical ultracentrifuge (AUC) is a powerful biophysical tool that allows us to record macromolecular sedimentation profiles during high speed ...

Fluorescent Labeling of COS-7 Expressing SNAP-tag Fusion Proteins for Live Cell Imaging

COS-7 के फ्लोरोसेंट लेबलिंग लाइव सेल इमेजिंग के लिए तस्वीर टैग फ्यूजन प्रोटीन व्यक्त

SNAP-tag and CLIP-tag protein labeling systems enable the specific, covalent attachment of molecules, including fluorescent dyes, to a protein of interest ...

Fluorescence-based Measurement of Store-operated Calcium Entry in Live Cells: from Cultured Cancer Cell to Skeletal Muscle Fiber

स्टोर संचालित जीवित कोशिकाओं में कैल्शियम प्रविष्टि प्रतिदीप्ति आधारित मापन संवर्धित सेल कैंसर से कंकाल की मांसपेशी फाइबर

Store operated Ca2+ entry (SOCE), earlier termed capacitative Ca2+ entry, is a tightly regulated mechanism for influx of extracellular Ca2+ into cells to ...

Intravital Microscopy for Imaging Subcellular Structures in Live Mice Expressing Fluorescent Proteins

फ्लोरोसेंट प्रोटीन व्यक्त करते रहते चूहों में इमेजिंग subcellular संरचनाओं के लिए intravital माइक्रोस्कोपी

Here we describe a procedure to image subcellular structures in live rodents that is based on the use of confocal intravital microscopy. As a model organ, ...

Real-time Imaging of Plant Cell Surface Dynamics with Variable-angle Epifluorescence Microscopy

चर-कोण Epifluorescence माइक्रोस्कोपी के साथ संयंत्र सेल भूतल गतिशीलता की वास्तविक समय इमेजिंग

A plant&#8217;s cell surface is its interface for perceiving environmental cues; it responds with cell biological changes such as membrane trafficking and ...

Three-dimensional Super Resolution Microscopy of F-actin Filaments by Interferometric PhotoActivated Localization Microscopy (iPALM)

Three-dimensional Super Resolution Microscopy of F-actin Filaments by Interferometric PhotoActivated Localization Microscopy iPALM

तीन आयामी सुपर Interferometric Photoactivated स्थानीयकरण माइक्रोस्कोपी द्वारा एफ actin फिलामेंट्स के संकल्प माइक्रोस्कोपी (iPALM)

Fluorescence microscopy enables direct visualization of specific biomolecules within cells. However, for conventional fluorescence microscopy, the spatial ...

Exploiting Live Imaging to Track Nuclei During Myoblast Differentiation and Fusion

मायोब्लास्ट विभेद और फ्यूजन के दौरान नाभिक को ट्रैक करने के लिए लाइव इमेजिंग का दोहन

Nuclear positioning within cells is important for multiple cellular processes in development and regeneration. The most intriguing example of nuclear ...

Examination of Mitotic and Meiotic Fission Yeast Nuclear Dynamics by Fluorescence Live-cell Microscopy

फ्लोरेसेंस लाइव-सेल माइक्रोस्कोपी द्वारा मिट्रोटिक और मीओटिक फिसेशन खमीर न्यूक्लियर डायनामिक्स की परीक्षा

Live-cell imaging is a microscopy technique used to examine cell and protein dynamics in living cells. This imaging method is not toxic, generally does ...

Live Cell Imaging to Assess the Dynamics of Metaphase Timing and Cell Fate Following Mitotic Spindle Perturbations

मेटाफेज टाइमिंग और सेल फैट के बाद माइटोटिक स्पिनल क्षोभ के बाद गतिशीलता का आकलन करने के लिए लाइव सेल इमेजिंग

Live cell time-lapse imaging is an important tool in cell biology that provides insight into cellular processes that might otherwise be overlooked, ...