Name: in utero and ex vivo electroporation for gene expression in mouse retinal ganglion cells
Uploaded: 2009-09-24T15:00:00
Duration: 25 min 6 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about In utero and ex vivo Electroporation for Gene Expression in Mouse Retinal Ganglion Cells at JoVE.com

نشكر الدكتور ريتشارد وفاليه شريستا Brikha للمساعدة في داخل الرحم وخارج الجسم الحي electroporation التقنيات الشبكية ، على التوالي ، والدكتور T. ساكوراي للتعليق على هذا البروتوكول. وأيد هذا العمل من قبل المعاهد الوطنية للصحة منح F31 NS051008 (TJP) ، ومؤسسة من أجل لا ميديكال بحوث والعلوم الحدودي برنامج الإنسان (ع) وEY12736 R01 (CM).

<ol>
	<li>Chalupa, L. M., Williams, R. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Eye Retina and the Visual Systems of the Mouse. , (2008).</li><li>Matsuda, T., Cepko, C. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Electroporation+and+RNA+interference+in+the+rodent+retina+in+vivo+and+in+vitro.">Electroporation and RNA interference in the rodent retina in vivo and in vitro.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 101, 16-22 (2004).</li><li>Ishikawa, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+GDNF+gene+transfer+into+axotomized+retinal+ganglion+cells+using+in+vivo+electroporation+with+a+contact+lens-type+electrode.">Effect of GDNF gene transfer into axotomized retinal ganglion cells using in vivo electroporation with a contact lens-type electrode.</a> Gene Ther. 12, 289-298 (2005).</li><li>Donovan, S. L., Dyer, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preparation+and+square+wave+electroporation+of+retinal+explant+cultures.">Preparation and square wave electroporation of retinal explant cultures.</a> Nat Protoc. 1, 2710-2718 (2006).</li><li>Garcia-Frigola, C., Carreres, M. I., Vegar, C., Herrera, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gene+delivery+into+mouse+retinal+ganglion+cells+by+in+utero+electroporation.">Gene delivery into mouse retinal ganglion cells by in utero electroporation.</a> BMC Dev Biol. 7, 103-10 (2007).</li><li>Petros, T. J., Shrestha, B. R., Mason, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Specificity+and+sufficiency+of+EphB1+in+driving+the+ipsilateral+retinal+projection.">Specificity and sufficiency of EphB1 in driving the ipsilateral retinal projection.</a> J Neurosci. 29, 3463-3474 (2009).</li></ol>

في هذا الفيديو ، لقد أثبتنا تقنيات electroporation ، سواء في داخل الرحم وفيفو السابقين ، لتوصيل الجينات في الفئران الجنينية RGCs في الرحم electroporation الشبكية يوفر آلية لمعالجة التعبير الجيني في RGCs ووضع تصور لإسقاطات محوار في الجسم الحي. السماح للأجنة البقاء على قيد الحياة بعد الولادة ، تصاريح دراسة هذه التوقعات GFP + RGC الى هدفهم ، والنواة الركبية الجانبية (LGN). electroporation الشبكية خارج الجسم ويوفر المزيد من القدرة على السيطرة على المناطق المستهدفة شبكية محددة للاستخدام مع المقايسات في المختبر. الجمع في الجسم الحي في التحليلات المختبرية والمستمدة من هذه التقنيات تسمح توصيف دقيق للوضع RGC والإسقاطات محوار في مجموعة فرعية من RGCs في خلفية طبيعية على خلاف ذلك. في حين يركز على مظاهرة لدينا توجيهات محوار RGC في chiasm البصرية ، سواء في داخل الرحم وخارج الجسم الحي electroporations الشبكية يمكن أن تكون مفيدة لدراسة كيفية حدوث اضطرابات في التعبير الجيني تمايز تأثير RGC ، مورفولوجيا الجذعية ، والخصائص الكهربية ، وتشكيل المشبك والسليم الاستهداف في مناطق مثل هذا الإنهاء كما LGN وأكيمة متفوقة.

<!DOCTYPE html PUBLIC "-//W3C//DTD XHTML 1.0 Transitional//EN" "http://www.w3.org/TR/xhtml1/DTD/xhtml1-transitional.dtd">
<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>BTX Electro Square Porator ECM 830 (with foot paddle)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Harvard Apparatus</td>
<td>450052</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Round tweezer electrodes</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Nepa Gene</td>
<td>CUY650-5 or CUY650-7</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Silk Sutures</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Henry Schein</td>
<td>101-2636</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Glass micropipettes with plungers</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Drummond</td>
<td>5-000-1001-X10</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Antibiototic-antimycotic</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>15240096</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>DMEM/F12 medium</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Gibco</td>
<td>11330057</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Albumin bovine serum</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma</td>
<td>A8806-5G</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>ITS supplement</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma</td>
<td>I-1884</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Penicillin-Streptomycin</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>15140-122</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Methyl cellulose</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma</td>
<td>M0512</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Glass Bottom Microwell Dishes</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>MatTek Corporation</td>
<td>P35G-1.5-14-C</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Poly-L-ornithine</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma</td>
<td>P4957</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Laminin</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>23017-015</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>

in utero and ex vivo electroporation for gene expression in mouse retinal ganglion cells

شبكية العين والخلايا العصبية انتاجها الوحيد الخلية العقدة الشبكية (RGC) ، يشكلون نموذجا ممتازا فيها لدراسة المسائل البيولوجية مثل تمايز الخلايا والتوجيه محور عصبي ، وتنظيم شبكي التوضع وتشكيل المشبك [1]. عيب واحد هو عدم القدرة على التعامل بكفاءة وموثوقية في التعبير الجيني RGCs في الجسم الحي ، وخصوصا في المسارات البصرية في المتناول الفئران. ويمكن استخدام الفئران المعدلة وراثيا لمعالجة الجينات ، ولكن هذا النهج كثيرا ما تكون مكلفة ومستهلكة للوقت ، ويمكن ان تنتج الآثار الجانبية غير المرغوب فيها. في الفرخ ، في electroporation البيضة يستخدم للتلاعب في التعبير الجيني لفحص شبكية العين RGCs والتنمية RGC. على الرغم من تطوير تقنيات مماثلة في electroporation الجراء الماوس الولدان [2] ، الفئران الكبار [3] ، وشبكية الفئران الجنينية في المختبر [4] ، فإن أيا من هذه الاستراتيجيات تسمح التوصيف الكامل للتنمية RGC والإسقاطات محوار في الجسم الحي. تحقيقا لهذه الغاية ، قمنا بتطوير طلبين من electroporation ، واحدة في الرحم وغيرها من فيفو السابقين ، خصيصا لاستهداف RGCs الفئران الجنينية [5 ، 6]. في الرحم مع electroporation الشبكية ، يمكننا misexpress downregulate أو جينات معينة في RGCs التوقعات ومتابعة محور عصبي من خلال المسارات البصرية في الجسم الحي ، مما يتيح فحص قرارات التوجيه على أهداف وسيطة ، مثل chiasm البصرية ، أو في المناطق المستهدفة ، مثل الركبي الوحشي النواة. الاقلاق التعبير الجيني في مجموعة فرعية من RGCs في خلفية خلاف البرية من نوع يسهل فهم وظائف الجينات طوال الطريق في شبكية العين. بالإضافة إلى ذلك ، قمنا بتطوير تقنية لتحليل مصاحب RGC النمو محوار في المختبر. نحن electroporate الجنينية فيفو السابقين رؤساء وجمع واحتضان شبكية العين كله ، ثم يعد explants من هذه الأيام عدة الشبكية في وقت لاحق. ويمكن استخدام explants الشبكية في مجموعة متنوعة من فحوصات في المختبر لدراسة استجابة المحاوير RGC electroporated إلى العظة توجيه أو غيرها من العوامل. باختصار ، هذه المجموعة من تقنيات يعزز قدرتنا على misexpress downregulate أو الجينات في RGCs المساعدات بشكل كبير ، وينبغي النظر في وضع الدراسات والتوقعات RGC محور عصبي.

Watch this Scientific Journal Video about In utero and ex vivo Electroporation for Gene Expression in Mouse Retinal Ganglion Cells at JoVE.com

In utero and ex vivo Electroporation for Gene Expression in Mouse Retinal Ganglion Cells

هنا نقدم اثنين من التقنيات لمعالجة الجينات في خلايا الفئران العقدة الشبكية (RGCs) من قبل<em&gt; في الرحم</em&gt; و<em&gt; خارج الحي</em&gt; electroporation. هذه التقنيات يمكن لاحد لدراسة كيفية إحداث تغييرات في التعبير الجيني تؤثر على التنمية RGC والتوجيه محور عصبي ، والخصائص الفنية.

Electroporation في الجسم الحي وخارج الرحم للتعبير الجينات في خلايا الشبكية العقدة ماوس

The retina and its sole output neuron, the retinal ganglion cell (RGC), comprise an excellent model in which to examine biological questions such as cell ...

Research

JoVE Journal

Biology

In utero and ex vivo Electroporation for Gene Expression in Mouse Retinal Ganglion Cells

In Utero Intraventricular Injection and Electroporation of E16 Rat Embryos

في الرحم وحقن داخل البطيني Electroporation الجنين الجرذ E16

In-utero in-vivo injection and electroporation of the embryonic rat neocortex provides a powerful tool for the manipulation of individual progenitors ...

In Utero Intraventricular Injection and Electroporation of E15 Mouse Embryos

في الرحم وحقن داخل البطيني Electroporation من أجنة الفئران E15

In-utero in-vivo injection and electroporation of the embryonic mouse neocortex provides a powerful tool for the manipulation of individual progenitors ...

The Preparation of Primary Hematopoietic Cell Cultures From Murine Bone Marrow for Electroporation

التحضير لزراعة الخلايا المكونة للدم الابتدائية من نخاع عظام الفئران لElectroporation

It is becoming increasingly apparent that electroporation is the most effective way to introduce plasmid DNA or siRNA into primary cells. The Gene Pulser ...

Using the Gene Pulser MXcell Electroporation System to Transfect Primary Cells with High Efficiency

باستخدام الجينات Electroporation MXcell بولسير النظام لTransfect الخلايا الأولية ذات الكفاءة العالية

Using an Automated Cell Counter to Simplify Gene Expression Studies: siRNA Knockdown of IL-4 Dependent Gene Expression in Namalwa Cells

باستخدام خلية مكافحة الآلي لتبسيط دراسات التعبير الجيني : ضربة قاضية سيرنا من IL - 4 التعبير الجيني في الخلايا التابعة Namalwa

The use of siRNA mediated gene knockdown is continuing to be an important tool in studies of gene expression.  siRNA studies are being conducted not only ...

In vitro Reconstitution of the Active T. castaneum Telomerase

In vitro Reconstitution of the Active T. castaneum Telomerase

إعادة إعماره في المختبر من أحدث T. castaneum تيلوميراز

Efforts to isolate the catalytic subunit of telomerase, TERT, in sufficient quantities for structural studies, have been met with limited success for more ...

Using SecM Arrest Sequence as a Tool to Isolate Ribosome Bound Polypeptides

باستخدام SecM تسلسل توقيف كأداة لعزل البروتينية منضم ريبوسوم

Extensive research has provided ample evidences suggesting that protein folding in the cell is a co-translational process1-5. However, the exact pathway ...

Gene Transfer into Older Chicken Embryos by ex ovo Electroporation

Gene Transfer into Older Chicken Embryos by ex ovo Electroporation

نقل الجينات في أجنة الدجاج أقدم من قبل<em&gt; OVO السابقين</em&gt; Electroporation

The chicken embryo provides an  excellent model system for studying gene function and regulation during  embryonic development. In ovo electroporation is ...

siRNA Screening to Identify Ubiquitin and Ubiquitin-like System Regulators of Biological Pathways in Cultured Mammalian Cells

سيرنا فحص لتحديد اليوبيكويتين واليوبيكويتين مثل المنظمين نظام مقررات تمهيدية البيولوجية في خلايا الثدييات مثقف

Post-translational modification of proteins with ubiquitin and ubiquitin-like molecules (UBLs) is emerging as a dynamic cellular signaling network that ...

Measurement of Metabolic Rate in Drosophila using Respirometry

Measurement of Metabolic Rate in Drosophila using Respirometry

قياس معدل الأيض في<em&gt; ذبابة الفاكهة</em&gt; باستخدام قياس التنفس

Metabolic disorders are a frequent problem affecting human health. Therefore, understanding the mechanisms that regulate metabolism is a crucial ...