Name: in utero and ex vivo electroporation for gene expression in mouse retinal ganglion cells
Uploaded: 2009-09-24T15:00:00
Duration: 25 min 6 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about In utero and ex vivo Electroporation for Gene Expression in Mouse Retinal Ganglion Cells at JoVE.com

אנו מודים לד&quot;ר ריצ&#39;רד Vallee ו Brikha Shrestha לעזרה עם ברחם לשעבר טכניקות vivo electroporation רשתית, בהתאמה, ד&quot;ר ט סקוראי להערות על פרוטוקול זה. עבודה זו נתמכה על ידי המכונים הלאומיים לבריאות מענקים F31 NS051008 (TJP), מגט לשפוך la משוכלל ונדיר Medicale, ואת Frontier Science Program האדם (ע&quot;ר) ו - R01 EY12736 (CM).

<ol>
	<li>Chalupa, L. M., Williams, R. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Eye Retina and the Visual Systems of the Mouse. , (2008).</li><li>Matsuda, T., Cepko, C. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Electroporation+and+RNA+interference+in+the+rodent+retina+in+vivo+and+in+vitro.">Electroporation and RNA interference in the rodent retina in vivo and in vitro.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 101, 16-22 (2004).</li><li>Ishikawa, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+GDNF+gene+transfer+into+axotomized+retinal+ganglion+cells+using+in+vivo+electroporation+with+a+contact+lens-type+electrode.">Effect of GDNF gene transfer into axotomized retinal ganglion cells using in vivo electroporation with a contact lens-type electrode.</a> Gene Ther. 12, 289-298 (2005).</li><li>Donovan, S. L., Dyer, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preparation+and+square+wave+electroporation+of+retinal+explant+cultures.">Preparation and square wave electroporation of retinal explant cultures.</a> Nat Protoc. 1, 2710-2718 (2006).</li><li>Garcia-Frigola, C., Carreres, M. I., Vegar, C., Herrera, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gene+delivery+into+mouse+retinal+ganglion+cells+by+in+utero+electroporation.">Gene delivery into mouse retinal ganglion cells by in utero electroporation.</a> BMC Dev Biol. 7, 103-10 (2007).</li><li>Petros, T. J., Shrestha, B. R., Mason, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Specificity+and+sufficiency+of+EphB1+in+driving+the+ipsilateral+retinal+projection.">Specificity and sufficiency of EphB1 in driving the ipsilateral retinal projection.</a> J Neurosci. 29, 3463-3474 (2009).</li></ol>

בסרטון זה, יש לנו טכניקות הפגינו electroporation, הן ברחם לשעבר vivo, למסירה גן לתוך RGCs Murine עובריים. ברחם electroporation רשתית מספק מנגנון מניפולציה ביטוי גנים RGCs ולדמיין תחזיות האקסון שלהם in vivo. מתן העוברים לשרוד לאחר הלידה מאפשר בדיקה של ה-GFP אלה + תחזיות RGC לתוך היעד שלהם, את גרעין הברכיתי לרוחב (LGN). Ex vivo electroporation רשתית מספק יכולת לשלוט יותר למקד לאזורים ספציפיים ברשתית לשימוש ב מבחני חוץ גופית. שילוב in vivo ו בניתוח חוץ גופית נגזר הטכניקות הללו מאפשרת אפיון מעמיק של התפתחות RGC ותחזיות האקסון משנה של RGCs ברקע נורמלית אחרת. בזמן ההפגנה שלנו מתמקדת הדרכה האקסון RGC ב התצלובת הראייה, הן ברחם לשעבר electroporations vivo ברשתית יכול להיות מועיל עבור הלומדים כיצד ההפרעות בידול הביטוי אפקט גן RGC, מורפולוגיה הדנדריטים, מאפיינים אלקטרו, היווצרות הסינפסה ונכון מיקוד באזורי סיום כזה כמו LGN ו colliculus מעולה.

<!DOCTYPE html PUBLIC "-//W3C//DTD XHTML 1.0 Transitional//EN" "http://www.w3.org/TR/xhtml1/DTD/xhtml1-transitional.dtd">
<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>BTX Electro Square Porator ECM 830 (with foot paddle)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Harvard Apparatus</td>
<td>450052</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Round tweezer electrodes</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Nepa Gene</td>
<td>CUY650-5 or CUY650-7</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Silk Sutures</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Henry Schein</td>
<td>101-2636</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Glass micropipettes with plungers</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Drummond</td>
<td>5-000-1001-X10</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Antibiototic-antimycotic</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>15240096</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>DMEM/F12 medium</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Gibco</td>
<td>11330057</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Albumin bovine serum</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma</td>
<td>A8806-5G</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>ITS supplement</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma</td>
<td>I-1884</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Penicillin-Streptomycin</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>15140-122</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Methyl cellulose</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma</td>
<td>M0512</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Glass Bottom Microwell Dishes</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>MatTek Corporation</td>
<td>P35G-1.5-14-C</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Poly-L-ornithine</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma</td>
<td>P4957</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Laminin</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>23017-015</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>

in utero and ex vivo electroporation for gene expression in mouse retinal ganglion cells

הרשתית נוירון פלט דעתה הבלעדי, את תא הגנגליון ברשתית (RGC), מהווים מודל מצוין בו כדי לבחון שאלות ביולוגיות כגון התמיינות תאים, הדרכה האקסון, ארגון retinotopic היווצרות הסינפסה [1]. חיסרון אחד הוא חוסר היכולת יעיל ומהימן לתפעל ביטוי גנים RGCs in vivo, במיוחד מסלולים נגישים אחרת חזותי Murine. העכברים הטרנסגניים ניתן להשתמש כדי לתפעל ביטוי גנים, אך גישה זו היא לרוב יקרה, זמן רב, יכול לייצר תופעות לוואי בלתי רצויות. בשנת חומוס, ב electroporation אובו משמש כדי לתפעל ביטוי גנים RGCs לבדיקת הרשתית ופיתוח RGC. למרות טכניקות electroporation דומה פותחו גורים עכבר היילודים [2], חולדות הבוגרת [3], ו - רשתיות Murine עובריים במבחנה [4], אף אחד אסטרטגיות אלה מאפשרים אפיון מלא של התפתחות RGC ותחזיות האקסון in vivo. לשם כך, פיתחנו שני יישומים של electroporation, אחד ברחם לבין vivo לשעבר אחרים, שמתמקדים RGCs Murine עובריים [5, 6]. עם ב electroporation ברחם רשתית, אנחנו יכולים misexpress או downregulate גנים ספציפיים RGCs ופעל תחזיות האקסון שלהם דרך מסלולי חזותי in vivo, המאפשר בחינה של החלטות והכוונה לעבר מטרות ביניים, כגון התצלובת הראייה, או אזורים היעד, כגון הברכיתי לרוחב הגרעין. מביך ביטוי גנים משנה של RGCs ברקע אחרת wild-type מאפשר הבנה של תפקיד הגן לאורך מסלול הרשתית. בנוסף, פיתחנו טכניקה נלווה לניתוח הצמיחה האקסון RGC במבחנה. אנו electroporate vivo ראשי עובריים לשעבר, לאסוף דגירה הרשתית כולה, ואז להכין explants אלה רשתיות מספר ימים מאוחר יותר. Explants רשתית ניתן להשתמש במגוון של מבחני חוץ גופית כדי לבחון את התגובה של אקסונים RGC electroporated לאותות הנחיה או גורמים אחרים. לסיכום, זו קבוצה של טכניקות משפר את היכולת שלנו misexpress או downregulate גנים RGCs וצריך מאוד סיוע בפיתוח מחקרים הבוחנים RGC ותחזיות האקסון.

Watch this Scientific Journal Video about In utero and ex vivo Electroporation for Gene Expression in Mouse Retinal Ganglion Cells at JoVE.com

In utero and ex vivo Electroporation for Gene Expression in Mouse Retinal Ganglion Cells

כאן אנו מציגים שתי טכניקות מניפולציה ביטוי גנים בתאי הגנגליון ברשתית Murine (RGCs) על ידי<em&gt; בתוך הרחם</em&gt; ו<em&gt; לשעבר vivo</em&gt; Electroporation. טכניקות אלה מאפשרות לבחון כיצד שינויים בביטוי הגנים משפיעים על התפתחות RGC, הדרכה האקסון, ומאפיינים תפקודית.

ב electroporation ברחם לשעבר vivo על ביטוי גנים בתאים עכבר גנגליון רשתית

The retina and its sole output neuron, the retinal ganglion cell (RGC), comprise an excellent model in which to examine biological questions such as cell ...

Research

JoVE Journal

Biology

In utero and ex vivo Electroporation for Gene Expression in Mouse Retinal Ganglion Cells

In Utero Intraventricular Injection and Electroporation of E16 Rat Embryos

בשנת הזרקה תוך חדרי ברחם ו electroporation של E16 עוברים עכברוש

In-utero in-vivo injection and electroporation of the embryonic rat neocortex provides a powerful tool for the manipulation of individual progenitors ...

In Utero Intraventricular Injection and Electroporation of E15 Mouse Embryos

בשנת הזרקה תוך חדרי ברחם ו electroporation E15 של עוברי עכברים

In-utero in-vivo injection and electroporation of the embryonic mouse neocortex provides a powerful tool for the manipulation of individual progenitors ...

The Preparation of Primary Hematopoietic Cell Cultures From Murine Bone Marrow for Electroporation

הכנת ראשי בתרביות תאים hematopoietic ממח העצם Murine עבור electroporation

It is becoming increasingly apparent that electroporation is the most effective way to introduce plasmid DNA or siRNA into primary cells. The Gene Pulser ...

Using the Gene Pulser MXcell Electroporation System to Transfect Primary Cells with High Efficiency

שימוש ג&#39;ין Pulser מערכת MXcell electroporation כדי Transfect תאים ראשוניים עם יעילות גבוהה

Using an Automated Cell Counter to Simplify Gene Expression Studies: siRNA Knockdown of IL-4 Dependent Gene Expression in Namalwa Cells

שימוש מונה תא אוטומטי כדי לפשט את הביטוי מחקרים ג&#39;ין: siRNA מציאה הביטוי IL 4-Gene תלויים תאים Namalwa

The use of siRNA mediated gene knockdown is continuing to be an important tool in studies of gene expression.  siRNA studies are being conducted not only ...

In vitro Reconstitution of the Active T. castaneum Telomerase

In vitro Reconstitution of the Active T. castaneum Telomerase

ב הכינון במבחנה של ט פעילים castaneum שהטלומרז

Efforts to isolate the catalytic subunit of telomerase, TERT, in sufficient quantities for structural studies, have been met with limited success for more ...

Using SecM Arrest Sequence as a Tool to Isolate Ribosome Bound Polypeptides

באמצעות רצף מעצר SecM ככלי לבודד פוליפפטידים כרוכים הריבוזום

Extensive research has provided ample evidences suggesting that protein folding in the cell is a co-translational process1-5. However, the exact pathway ...

Gene Transfer into Older Chicken Embryos by ex ovo Electroporation

Gene Transfer into Older Chicken Embryos by ex ovo Electroporation

ין העברת לעוברי עוף מבוגרים יותר על ידי<em&gt; לג&#39;ימי לשעבר</em&gt; Electroporation

The chicken embryo provides an  excellent model system for studying gene function and regulation during  embryonic development. In ovo electroporation is ...

siRNA Screening to Identify Ubiquitin and Ubiquitin-like System Regulators of Biological Pathways in Cultured Mammalian Cells

הקרנת siRNA לזיהוי יוביקוויטין ורגולטורים מערכת דמויות יוביקוויטין של מסלולים ביולוגיים בתאי יונקים בתרבית

Post-translational modification of proteins with ubiquitin and ubiquitin-like molecules (UBLs) is emerging as a dynamic cellular signaling network that ...

Measurement of Metabolic Rate in Drosophila using Respirometry

Measurement of Metabolic Rate in Drosophila using Respirometry

מדידה של קצב חילוף החומרים ב<em&gt; דרוזופילה</em&gt; באמצעות Respirometry

Metabolic disorders are a frequent problem affecting human health. Therefore, understanding the mechanisms that regulate metabolism is a crucial ...