Name: in utero and ex vivo electroporation for gene expression in mouse retinal ganglion cells
Uploaded: 2009-09-24T15:00:00
Duration: 25 min 6 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about In utero and ex vivo Electroporation for Gene Expression in Mouse Retinal Ganglion Cells at JoVE.com

हम utero और पूर्व vivo रेटिना electroporation तकनीक, क्रमशः के साथ मदद के लिए धन्यवाद डॉ. रिचर्ड वेली और Brikha श्रेष्ठ है, और इस प्रोटोकॉल पर टिप्पणियों के लिए डॉ. टी. Sakurai . यह काम राष्ट्रीय स्वास्थ्य अनुदान के संस्थानों NS051008 F31 (TJP), Fondation डालना ला Recherche MEDICALE, और मानव फ्रंटियर विज्ञान कार्यक्रम (ए आर) और EY12736 R01 (मुख्यमंत्री) द्वारा समर्थित किया गया था.

<ol>
	<li>Chalupa, L. M., Williams, R. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Eye Retina and the Visual Systems of the Mouse. , (2008).</li><li>Matsuda, T., Cepko, C. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Electroporation+and+RNA+interference+in+the+rodent+retina+in+vivo+and+in+vitro.">Electroporation and RNA interference in the rodent retina in vivo and in vitro.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 101, 16-22 (2004).</li><li>Ishikawa, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+GDNF+gene+transfer+into+axotomized+retinal+ganglion+cells+using+in+vivo+electroporation+with+a+contact+lens-type+electrode.">Effect of GDNF gene transfer into axotomized retinal ganglion cells using in vivo electroporation with a contact lens-type electrode.</a> Gene Ther. 12, 289-298 (2005).</li><li>Donovan, S. L., Dyer, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preparation+and+square+wave+electroporation+of+retinal+explant+cultures.">Preparation and square wave electroporation of retinal explant cultures.</a> Nat Protoc. 1, 2710-2718 (2006).</li><li>Garcia-Frigola, C., Carreres, M. I., Vegar, C., Herrera, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gene+delivery+into+mouse+retinal+ganglion+cells+by+in+utero+electroporation.">Gene delivery into mouse retinal ganglion cells by in utero electroporation.</a> BMC Dev Biol. 7, 103-10 (2007).</li><li>Petros, T. J., Shrestha, B. R., Mason, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Specificity+and+sufficiency+of+EphB1+in+driving+the+ipsilateral+retinal+projection.">Specificity and sufficiency of EphB1 in driving the ipsilateral retinal projection.</a> J Neurosci. 29, 3463-3474 (2009).</li></ol>

इस वीडियो में, हम दोनों utero और पूर्व vivo में electroporation तकनीक, भ्रूण murine RGCs में जीन डिलीवरी के लिए प्रदर्शन किया है utero में रेटिना electroporation RGCs में जीन की अभिव्यक्ति जोड़ तोड़ के लिए एक तंत्र प्रदान करता है और vivo में अपने अक्षतंतु अनुमानों कल्पना. भ्रूण जीवित रहने की अनुमति दे postnatally अपने लक्ष्य में इन + GFP RGC अनुमानों की परीक्षा परमिट, पार्श्व geniculate (LGN) नाभिक पूर्व vivo रेटिना electroporation एक और अधिक नियंत्रित करने के लिए इन विट्रो assays में के साथ प्रयोग के लिए विशिष्ट रेटिना क्षेत्रों को लक्षित करने की क्षमता प्रदान करता है. और vivo में इन विट्रो इन तकनीकों से प्राप्त विश्लेषण में संयोजन RGC विकास और एक अन्यथा सामान्य पृष्ठभूमि में RGCs के एक सबसेट में अक्षतंतु अनुमानों की पूरी तरह से लक्षण वर्णन अनुमति देता है. हालांकि हमारे प्रदर्शन ऑप्टिक chiasm RGC अक्षतंतु मार्गदर्शन पर दोनों utero में और पूर्व vivo रेटिना electroporations अध्ययन कैसे जीन की अभिव्यक्ति प्रभाव RGC भेदभाव, वृक्ष के समान आकारिकी, electrophysiological गुण, synapse गठन और उचित में perturbations समाप्ति जैसे क्षेत्रों में लक्षित करने के लिए फायदेमंद हो सकता है, ध्यान केंद्रित LGN और बेहतर colliculus के रूप में.

<!DOCTYPE html PUBLIC "-//W3C//DTD XHTML 1.0 Transitional//EN" "http://www.w3.org/TR/xhtml1/DTD/xhtml1-transitional.dtd">
<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>BTX Electro Square Porator ECM 830 (with foot paddle)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Harvard Apparatus</td>
<td>450052</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Round tweezer electrodes</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Nepa Gene</td>
<td>CUY650-5 or CUY650-7</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Silk Sutures</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Henry Schein</td>
<td>101-2636</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Glass micropipettes with plungers</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Drummond</td>
<td>5-000-1001-X10</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Antibiototic-antimycotic</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>15240096</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>DMEM/F12 medium</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Gibco</td>
<td>11330057</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Albumin bovine serum</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma</td>
<td>A8806-5G</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>ITS supplement</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma</td>
<td>I-1884</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Penicillin-Streptomycin</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>15140-122</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Methyl cellulose</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma</td>
<td>M0512</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Glass Bottom Microwell Dishes</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>MatTek Corporation</td>
<td>P35G-1.5-14-C</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Poly-L-ornithine</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma</td>
<td>P4957</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Laminin</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>23017-015</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>

in utero and ex vivo electroporation for gene expression in mouse retinal ganglion cells

रेटिना और इसकी एकमात्र उत्पादन के न्यूरॉन, रेटिना नाड़ीग्रन्थि सेल (RGC), जिसमें सेल भेदभाव, अक्षतंतु मार्गदर्शन, retinotopic संगठन और synapse [1] गठन जैसे जैविक सवालों की जांच करने के लिए एक शानदार मॉडल शामिल हैं. एक दोष करने के लिए कुशलतापूर्वक और मज़बूती vivo में RGCs में विशेष रूप से अन्यथा सुलभ murine दृश्य रास्ते में जीन की अभिव्यक्ति, हेरफेर करने में असमर्थता है. ट्रांसजेनिक चूहों जीन अभिव्यक्ति में हेरफेर करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है, लेकिन इस दृष्टिकोण अक्सर महंगा है, समय लगता है, और अवांछित दुष्प्रभावों का उत्पादन कर सकते हैं. लड़की, ओवो electroporation में रेटिना और RGC विकास की जांच के लिए RGCs में जीन अभिव्यक्ति में हेरफेर करने के लिए प्रयोग किया जाता है. हालांकि इसी तरह electroporation तकनीक नवजात माउस पिल्ले में विकसित किया गया है [2], वयस्क [3] चूहों, और भ्रूण murine retinae इन विट्रो में [4], इन रणनीतियों में से कोई भी RGC और vivo में विकास अक्षतंतु अनुमानों का पूरा लक्षण वर्णन की अनुमति. यह अंत करने के लिए, हम electroporation की दो अनुप्रयोगों, एक utero और अन्य पूर्व vivo में विकसित किया है, विशेष रूप से भ्रूण murine [5 6] RGCs लक्ष्य. Utero रेटिना electroporation में के साथ, हम misexpress या RGCs में विशिष्ट जीन downregulate कर सकते हैं और vivo में दृश्य रास्ते के माध्यम से अपने अक्षतंतु अनुमानों का पालन, मार्गदर्शन निर्णय ऑप्टिक chiasm जैसे मध्यवर्ती लक्ष्य, या लक्ष्य क्षेत्रों, जैसे परीक्षा की अनुमति पार्श्व geniculate नाभिक. एक अन्यथा जंगली प्रकार पृष्ठभूमि में RGCs के एक सबसेट में जीन की अभिव्यक्ति perturbing रेटिना मार्ग भर में जीन समारोह की समझ की सुविधा. इसके अतिरिक्त, हम इन विट्रो में RGC अक्षतंतु विकास का विश्लेषण करने के लिए एक साथी की तकनीक विकसित की है. हम भ्रूण सिर पूर्व vivo electroporate, इकट्ठा और पूरे रेटिना सेते हैं, तो इन retinae कई दिनों से explants बाद तैयार. रेटिना explants इन विट्रो assays में की एक किस्म में इस्तेमाल किया जा सकता है क्रम में करने के लिए मार्गदर्शन cues या अन्य कारकों के लिए electroporated RGC axons की प्रतिक्रिया की जांच. संक्षेप में, तकनीक के इस सेट हमारे misexpress या RGCs में जीन downregulate और बहुत RGC विकास और अक्षतंतु अनुमानों की जांच के अध्ययन में सहायता करनी चाहिए करने की क्षमता को बढ़ाता है.

Watch this Scientific Journal Video about In utero and ex vivo Electroporation for Gene Expression in Mouse Retinal Ganglion Cells at JoVE.com

In utero and ex vivo Electroporation for Gene Expression in Mouse Retinal Ganglion Cells

यहाँ हम murine रेटिनल नाड़ीग्रन्थि कोशिकाओं (RGCs) में जीन की अभिव्यक्ति जोड़ तोड़ करने के लिए दो तकनीकों को प्रस्तुत<em&gt; Utero में</em&gt; और<em&gt; पूर्व vivo</em&gt; Electroporation. इन तकनीकों में एक जांच करने के लिए कैसे जीन अभिव्यक्ति में परिवर्तन RGC विकास, अक्षतंतु मार्गदर्शन और कार्यात्मक संपत्तियों को प्रभावित कर सकें.

Utero और पूर्व जीन एक्सप्रेशन के लिए माउस रेटिना नाड़ीग्रन्थि कोशिकाओं में vivo electroporation में

The retina and its sole output neuron, the retinal ganglion cell (RGC), comprise an excellent model in which to examine biological questions such as cell ...

Research

JoVE Journal

Biology

In utero and ex vivo Electroporation for Gene Expression in Mouse Retinal Ganglion Cells

In Utero Intraventricular Injection and Electroporation of E16 Rat Embryos

Utero Intraventricular और E16 चूहा भ्रूण के इंजेक्शन electroporation में

In-utero in-vivo injection and electroporation of the embryonic rat neocortex provides a powerful tool for the manipulation of individual progenitors ...

In Utero Intraventricular Injection and Electroporation of E15 Mouse Embryos

Utero Intraventricular और E15 माउस भ्रूण इंजेक्शन electroporation में

In-utero in-vivo injection and electroporation of the embryonic mouse neocortex provides a powerful tool for the manipulation of individual progenitors ...

The Preparation of Primary Hematopoietic Cell Cultures From Murine Bone Marrow for Electroporation

प्राथमिक electroporation के लिए murine अस्थि मज्जा से hematopoietic सेल संस्कृतियों की तैयारी

It is becoming increasingly apparent that electroporation is the most effective way to introduce plasmid DNA or siRNA into primary cells. The Gene Pulser ...

Using the Gene Pulser MXcell Electroporation System to Transfect Primary Cells with High Efficiency

जीन Pulser MXcell electroporation प्रणाली का उपयोग करने के लिए उच्च क्षमता के साथ प्राथमिक कोशिकाओं transfect

Using an Automated Cell Counter to Simplify Gene Expression Studies: siRNA Knockdown of IL-4 Dependent Gene Expression in Namalwa Cells

एक स्वचालित सेल काउंटर का उपयोग करने के लिए जीन एक्सप्रेशन अध्ययन सरल: आईएल-4 निर्भर जीन एक्सप्रेशन के Namalwa कक्ष में siRNA नॉकडाउन

The use of siRNA mediated gene knockdown is continuing to be an important tool in studies of gene expression.  siRNA studies are being conducted not only ...

In vitro Reconstitution of the Active T. castaneum Telomerase

In vitro Reconstitution of the Active T. castaneum Telomerase

सक्रिय टी. के पुनर्गठन इन विट्रो में castaneum टेलोमिरेज

Efforts to isolate the catalytic subunit of telomerase, TERT, in sufficient quantities for structural studies, have been met with limited success for more ...

Using SecM Arrest Sequence as a Tool to Isolate Ribosome Bound Polypeptides

SECM गिरफ्तार अनुक्रम एक ribosome बाध्य polypeptides पृथक उपकरण के रूप में का उपयोग

Extensive research has provided ample evidences suggesting that protein folding in the cell is a co-translational process1-5. However, the exact pathway ...

Gene Transfer into Older Chicken Embryos by ex ovo Electroporation

Gene Transfer into Older Chicken Embryos by ex ovo Electroporation

पुराने चिकन भ्रूण में जीन द्वारा स्थानांतरण<em&gt; पूर्व ओवो</em&gt; Electroporation

The chicken embryo provides an  excellent model system for studying gene function and regulation during  embryonic development. In ovo electroporation is ...

siRNA Screening to Identify Ubiquitin and Ubiquitin-like System Regulators of Biological Pathways in Cultured Mammalian Cells

संवर्धित स्तनधारी कोशिकाओं में जैविक रास्ते की Ubiquitin और ubiquitin की तरह सिस्टम नियामकों की पहचान siRNA स्क्रीनिंग

Post-translational modification of proteins with ubiquitin and ubiquitin-like molecules (UBLs) is emerging as a dynamic cellular signaling network that ...

Measurement of Metabolic Rate in Drosophila using Respirometry

Measurement of Metabolic Rate in Drosophila using Respirometry

मेटाबोलिक दर के मापन में<em&gt; ड्रोसोफिला</em&gt; Respirometry का उपयोग

Metabolic disorders are a frequent problem affecting human health. Therefore, understanding the mechanisms that regulate metabolism is a crucial ...