Name: in utero and ex vivo electroporation for gene expression in mouse retinal ganglion cells
Uploaded: 2009-09-24T15:00:00
Duration: 25 min 6 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about In utero and ex vivo Electroporation for Gene Expression in Mouse Retinal Ganglion Cells at JoVE.com

Мы благодарим д-р Ричард Валле и Brikha Шреста за помощь в утробе матери и исключая виво сетчатки методы электропорации, соответственно, и д-р Т. Сакураи для комментариев на этот протокол. Работа выполнена при поддержке Национального института здоровья грантов F31 NS051008 (TJP), Фонд залить La Recherche Medicale и правам Программа научно-Пограничный (AR) и R01 EY12736 (СМ).

<ol>
	<li>Chalupa, L. M., Williams, R. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Eye Retina and the Visual Systems of the Mouse. , (2008).</li><li>Matsuda, T., Cepko, C. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Electroporation+and+RNA+interference+in+the+rodent+retina+in+vivo+and+in+vitro.">Electroporation and RNA interference in the rodent retina in vivo and in vitro.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 101, 16-22 (2004).</li><li>Ishikawa, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+GDNF+gene+transfer+into+axotomized+retinal+ganglion+cells+using+in+vivo+electroporation+with+a+contact+lens-type+electrode.">Effect of GDNF gene transfer into axotomized retinal ganglion cells using in vivo electroporation with a contact lens-type electrode.</a> Gene Ther. 12, 289-298 (2005).</li><li>Donovan, S. L., Dyer, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preparation+and+square+wave+electroporation+of+retinal+explant+cultures.">Preparation and square wave electroporation of retinal explant cultures.</a> Nat Protoc. 1, 2710-2718 (2006).</li><li>Garcia-Frigola, C., Carreres, M. I., Vegar, C., Herrera, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gene+delivery+into+mouse+retinal+ganglion+cells+by+in+utero+electroporation.">Gene delivery into mouse retinal ganglion cells by in utero electroporation.</a> BMC Dev Biol. 7, 103-10 (2007).</li><li>Petros, T. J., Shrestha, B. R., Mason, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Specificity+and+sufficiency+of+EphB1+in+driving+the+ipsilateral+retinal+projection.">Specificity and sufficiency of EphB1 in driving the ipsilateral retinal projection.</a> J Neurosci. 29, 3463-3474 (2009).</li></ol>

В этом видео, мы продемонстрировали электропорации методы, как в утробе матери и бывшего естественных условиях, для доставки генов в мышиные эмбриональные РГК. Внутриутробное сетчатки электропорации представляет собой механизм для манипулирования экспрессии генов в РГК и визуализировать их аксонов прогнозы в естественных условиях. Разрешение эмбрионов, чтобы выжить после рождения позволяет рассмотрение этих GFP + РГК проекции в своей цели, наружного коленчатого тела (ЛГН). Ex естественных сетчатки электропорации обеспечивает более контролируемой способность ориентироваться на конкретные сетчатки регионах для использования с в пробирке анализов. Сочетая в естественных условиях и в пробирке анализы, полученные из этих методов позволяет тщательной характеристике РГК развития и аксонов проекции в подмножество РГК в противном случае нормального фона. Хотя наши демонстрации сосредотачивается на руководство РСК аксонов в зрительных нервов, как в утробе матери и исключая виво сетчатки electroporations могли бы оказаться полезными для изучения того, как возмущения в экспрессии генов, эффект РГК дифференциации, дендритные морфологии, электрофизиологических свойств, формирование синапса и надлежащей ориентации в прекращении таких зон как LGN и верхний бугорок.

<!DOCTYPE html PUBLIC "-//W3C//DTD XHTML 1.0 Transitional//EN" "http://www.w3.org/TR/xhtml1/DTD/xhtml1-transitional.dtd">
<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>BTX Electro Square Porator ECM 830 (with foot paddle)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Harvard Apparatus</td>
<td>450052</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Round tweezer electrodes</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Nepa Gene</td>
<td>CUY650-5 or CUY650-7</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Silk Sutures</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Henry Schein</td>
<td>101-2636</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Glass micropipettes with plungers</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Drummond</td>
<td>5-000-1001-X10</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Antibiototic-antimycotic</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>15240096</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>DMEM/F12 medium</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Gibco</td>
<td>11330057</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Albumin bovine serum</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma</td>
<td>A8806-5G</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>ITS supplement</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma</td>
<td>I-1884</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Penicillin-Streptomycin</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>15140-122</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Methyl cellulose</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma</td>
<td>M0512</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Glass Bottom Microwell Dishes</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>MatTek Corporation</td>
<td>P35G-1.5-14-C</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Poly-L-ornithine</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma</td>
<td>P4957</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Laminin</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>23017-015</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>

in utero and ex vivo electroporation for gene expression in mouse retinal ganglion cells

Сетчатки и ее единственного нейрона выход, ганглиозных клеток сетчатки (РГК), составляют отличную модель, в которой для изучения биологических вопросов, таких как дифференцировка клеток, аксонов руководство, retinotopic организации и формирование синапса [1]. Одним из недостатков является неспособность эффективно и надежно управлять экспрессии генов в РГК в естественных условиях, особенно в противном случае доступны мышиной зрительных путей. Трансгенные мыши могут быть использованы для манипулирования экспрессии генов, однако этот подход часто является дорогостоящим, требует много времени, и может привести к нежелательным побочным эффектам. В куриных, в ово электропорации используется для манипулирования экспрессии генов в РГК для изучения сетчатки и РГК развития. Хотя подобные методы электропорации были разработаны в неонатальном щенков мыши [2], у взрослых крыс [3], и эмбриональных мышиных сетчатки в пробирке [4], ни одна из этих стратегий позволит полной характеристики РГК развития и аксонов прогнозы в естественных условиях. С этой целью мы разработали два приложения электропорации, один в утробе матери и других естественных отл, непосредственно для мышиных эмбриональных РГК [5, 6]. С внутриутробно сетчатки электропорации, мы можем misexpress или подавлять определенные гены в РГК и следовать их проекции аксонов через зрительные пути в естественных условиях, что позволяет рассмотрения руководством решений на промежуточные цели, например, зрительных нервов, или в целевых регионах, таких как латерального коленчатого тела. Пошевелив экспрессии генов в подмножество РГК в противном случае дикого типа фона облегчает понимание функции генов всей сетчатки пути. Кроме того, мы разработали спутник техники для анализа РГК рост аксонов в пробирке. Мы electroporate эмбриональных глав бывших естественных условиях, собирать и инкубировать целом сетчатке, а затем подготовить эксплантов из этих сетчатки через несколько дней. Сетчатки эксплантов может быть использован в разнообразных в пробирке тесты, чтобы выяснить реакцию электропорации РГК аксоны руководством сигналы или других факторов. В общем, это набор методов, усиливает нашу способность misexpress или подавлять гены в РГК и должны очень помочь результаты исследований РГК развития и аксонов прогнозы.

Watch this Scientific Journal Video about In utero and ex vivo Electroporation for Gene Expression in Mouse Retinal Ganglion Cells at JoVE.com

In utero and ex vivo Electroporation for Gene Expression in Mouse Retinal Ganglion Cells

Здесь мы приведем два способа манипулирования экспрессии генов в мышиные клетки сетчатки ганглия (РГК) по<em&gt; Внутриутробно</em&gt; И<em&gt; Исключая виво</em&gt; Электропорации. Эти методы дают возможность исследовать, как изменения в экспрессии генов влияет на развитие RGC, аксоны руководство и функциональные свойства.

В утробе матери и исключая виво Электропорация для экспрессии генов у мыши ганглиозных клеток сетчатки

The retina and its sole output neuron, the retinal ganglion cell (RGC), comprise an excellent model in which to examine biological questions such as cell ...

Research

JoVE Journal

Biology

In utero and ex vivo Electroporation for Gene Expression in Mouse Retinal Ganglion Cells

In Utero Intraventricular Injection and Electroporation of E16 Rat Embryos

In Utero инъекций Внутрижелудочковая и электропорации E16 крысиных эмбрионов

In-utero in-vivo injection and electroporation of the embryonic rat neocortex provides a powerful tool for the manipulation of individual progenitors ...

In Utero Intraventricular Injection and Electroporation of E15 Mouse Embryos

In Utero инъекций Внутрижелудочковая и электропорации E15 эмбрионов мыши

In-utero in-vivo injection and electroporation of the embryonic mouse neocortex provides a powerful tool for the manipulation of individual progenitors ...

The Preparation of Primary Hematopoietic Cell Cultures From Murine Bone Marrow for Electroporation

Подготовка первичных гемопоэтических клеточных культур из костного мозга мышей для Электропорация

It is becoming increasingly apparent that electroporation is the most effective way to introduce plasmid DNA or siRNA into primary cells. The Gene Pulser ...

Using the Gene Pulser MXcell Electroporation System to Transfect Primary Cells with High Efficiency

Использование генной Pulser MXcell Электропорация системы для трансфекции первичных элементов с высоким КПД

Using an Automated Cell Counter to Simplify Gene Expression Studies: siRNA Knockdown of IL-4 Dependent Gene Expression in Namalwa Cells

Использование автоматизированных счетчиков сотовый для упрощения исследования экспрессии генов: миРНК Нокдаун ИЛ-4 зависимости экспрессии генов в клетках Namalwa

The use of siRNA mediated gene knockdown is continuing to be an important tool in studies of gene expression.  siRNA studies are being conducted not only ...

In vitro Reconstitution of the Active T. castaneum Telomerase

In vitro Reconstitution of the Active T. castaneum Telomerase

В пробирке восстановление активность Т. castaneum Теломераза

Efforts to isolate the catalytic subunit of telomerase, TERT, in sufficient quantities for structural studies, have been met with limited success for more ...

Using SecM Arrest Sequence as a Tool to Isolate Ribosome Bound Polypeptides

Использование МЭСМ последовательности арест как средство изолировать Рибосома связанных полипептидов

Extensive research has provided ample evidences suggesting that protein folding in the cell is a co-translational process1-5. However, the exact pathway ...

Gene Transfer into Older Chicken Embryos by ex ovo Electroporation

Gene Transfer into Older Chicken Embryos by ex ovo Electroporation

Перенос генов в старых куриных эмбрионов на<em&gt; Бывший ово</em&gt; Электропорация

The chicken embryo provides an  excellent model system for studying gene function and regulation during  embryonic development. In ovo electroporation is ...

siRNA Screening to Identify Ubiquitin and Ubiquitin-like System Regulators of Biological Pathways in Cultured Mammalian Cells

миРНК Скрининг для идентификации Убиквитин и Убиквитин-подобной системе регуляторов биологических путей в культивируемых клетках млекопитающих

Post-translational modification of proteins with ubiquitin and ubiquitin-like molecules (UBLs) is emerging as a dynamic cellular signaling network that ...

Measurement of Metabolic Rate in Drosophila using Respirometry

Measurement of Metabolic Rate in Drosophila using Respirometry

Измерение скорости обмена веществ в<em&gt; Дрозофилы</em&gt; С помощью респирометрии

Metabolic disorders are a frequent problem affecting human health. Therefore, understanding the mechanisms that regulate metabolism is a crucial ...