Name: human pancreatic islet isolation: part ii: purification and culture of human islets
Uploaded: 2009-05-26T00:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Human Pancreatic Islet Isolation: Part II: Purification and Culture of Human Islets at JoVE.com

शिकागो में इलिनोइस विश्वविद्यालय से स्थापना के रूप में अच्छी तरह के द्वारा समर्थित आइलेट सेल संसाधन केंद्र NIH अनुदान (RFA-05-003 आर आर), क्रिस्टोफर फाउंडेशन, Efroymson फाउंडेशन, और Tellabs फाउंडेशन के रूप में.

1. Islets की शुद्धि <ol><li> आइलेट शुद्धि प्रक्रिया शुरू करने के लिए, COBE बैग लोड, हरे रंग की ट्यूब को छोड़कर सभी ट्यूबों दबाना, और 1500 के लिए गति सेट और सुपर 0 से बाहर. </li><li> हुड में पंप और ढाल beakers सेट और हरे रंग की ट्यूब संग?...

<ol>
	<li>Shapiro, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Islet+transplantation+in+seven+patients+with+type+1+diabetes+mellitus+using+a+glucocorticoid-free+immunosuppressive+regimen.">Islet transplantation in seven patients with type 1 diabetes mellitus using a glucocorticoid-free immunosuppressive regimen.</a> N Engl J Med. 343, 230-238 (2000).</li><li>Nano, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Islet+isolation+for+allotransplantation:+variables+associated+with+successful+islet+yield+and+graft+function.">Islet isolation for allotransplantation: variables associated with successful islet yield and graft function.</a> Diabetologia. 48, 906-912 (2005).</li><li>Barbaro, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improved+human+pancreatic+islet+purification+with+the+refined+UIC-UB+density+gradient.">Improved human pancreatic islet purification with the refined UIC-UB density gradient.</a> Transplantation. 84, 1200-1203 (2007).</li><li>Lakey, J. R., Rajotte, R. V., Warnock, G. L., Kneteman, N. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+pancreas+preservation+prior+to+islet+isolation.+Cold+ischemic+tolerance.">Human pancreas preservation prior to islet isolation. Cold ischemic tolerance.</a> Transplantation. 59, 689-694 (1995).</li><li>Fridell, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+histidine-tryptophan-ketoglutarate+solution+and+University+of+Wisconsin+solution+for+organ+preservation+in+clinical+pancreas+transplantation.">Comparison of histidine-tryptophan-ketoglutarate solution and University of Wisconsin solution for organ preservation in clinical pancreas transplantation.</a> Transplantation. 77, 1304-1306 (2004).</li><li>Potdar, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Initial+experience+using+histidine-tryptophan-ketoglutarate+solution+in+clinical+pancreas+transplantation.">Initial experience using histidine-tryptophan-ketoglutarate solution in clinical pancreas transplantation.</a> Clin Transplant. 18, 661-665 (2004).</li><li>Salehi, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+islet+isolation+outcomes+from+pancreata+preserved+with+Histidine-Tryptophan+Ketoglutarate+versus+University+of+Wisconsin+solution.">Human islet isolation outcomes from pancreata preserved with Histidine-Tryptophan Ketoglutarate versus University of Wisconsin solution.</a> Transplantation. 82, 983-985 (2006).</li><li>Ricordi, C., Lacy, P. E., Scharp, D. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Automated+islet+isolation+from+human+pancreas.">Automated islet isolation from human pancreas.</a> Diabetes. 38 Suppl 1, 140-142 (1989).</li><li>Ricordi, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Islet+isolation+assessment+in+man+and+large+animals.">Islet isolation assessment in man and large animals.</a> Acta Diabetol Lat. 27, 185-195 (1990).</li></ol>

मानव आइलेट अलगाव की तकनीक में महत्वपूर्ण प्रगति के बावजूद, आइलेट उपज उच्च चर और अप्रत्याशित रहेगा. पचा अग्नाशय के ऊतकों के शोधन सफल enzymatic पाचन के बाद प्रत्यारोपण के लिए एक पर्याप्त टापू जन ठीक करने के लि?...

<!DOCTYPE html PUBLIC "-//W3C//DTD XHTML 1.0 Transitional//EN" "http://www.w3.org/TR/xhtml1/DTD/xhtml1-transitional.dtd">
<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>Centrifuge</td>
<td>equipment</td>
<td>Beckman Coulter</td>
<td>424803</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Cobe 2991 Cell Processor</td>
<td>equipment</td>
<td>Gambro. BCT</td>
<td>2556</td>
<td>islet purification</td>
</tr>
<tr>
<td>MZ6 Inverted Microscopy TLBD4.1</td>
<td>equipment</td>
<td>Leica Diagnostic Instrument Co</td>
<td>4103</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Cell Culture Dish with 2 mm Grid</td>
<td>equipment</td>
<td>Nunc Brand Products</td>
<td>174926</td>
<td>islet counting</td>
</tr>
<tr>
<td>Digital Sight DS L1</td>
<td>equipment</td>
<td>Nikon</td>
<td>217267</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>COBE bag</td>
<td>disposable equipment</td>
<td>O.R. Solution</td>
<td>66707003</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>T175 culture flask</td>
<td>disposable equipment</td>
<td>Sarstedt</td>
<td>83.1812.500</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>University of Wisconcin (UW) solution</td>
<td>reagent</td>
<td>DURAMED</td>
<td>1000-46-06</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Hank's Buffered Salt Solution (HBSS)</td>
<td>reagent</td>
<td>Mediatech Inc</td>
<td>99-597-CM</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Ficoll 1.100</td>
<td>reagent</td>
<td>Bichrom AG</td>
<td>L6155</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>M199 media (wash solution)</td>
<td>reagent</td>
<td>Mediatech Inc</td>
<td>99-784-CM</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Final wash/Culture Medium</td>
<td>reagent</td>
<td>Mediatech Inc</td>
<td>99-785-CV</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Dithizone</td>
<td>reagent</td>
<td>Sigma </td>
<td>D5130</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>

human pancreatic islet isolation: part ii: purification and culture of human islets

टाइप 1 मधुमेह के प्रबंधन को भारी है, दोनों व्यक्ति और समाज के लिए, 100 से अधिक अरब डॉलर सालाना लागत. ग्लूकोज की निगरानी और नए इंसुलिन योगों के व्यापक उपयोग के बावजूद, कई व्यक्तियों को अभी भी विनाशकारी माध्यमिक जटिलताओं के विकास. अग्नाशय आइलेट प्रत्यारोपण मधुमेह के रोगियों में सामान्य ग्लूकोज नियंत्रण के पास बहाल कर सकते हैं<sup&gt; 1</sup&gt; गंभीर hypoglycemic एपिसोड है कि इंसुलिन गहन चिकित्सा के साथ जुड़े रहे हैं के जोखिम के बिना. पर्याप्त आइलेट जन प्रदान सफल आइलेट प्रत्यारोपण के लिए महत्वपूर्ण है. हालांकि, दाता विशेषताओं, अंग खरीद और संरक्षण अलगाव परिणाम को प्रभावित<sup2&gt;</sup&gt;. शिकागो में इलिनोइस विश्वविद्यालय (यूआईसी) पर हम एक बेहतर शुद्धि ढाल के साथ एक सफल अलगाव प्रोटोकॉल विकसित<sup&gt; 3</sup&gt;. कार्यक्रम जनवरी 2004 में शुरू किया और 300 से अधिक isolations नवंबर 2008 के लिए प्रदर्शन किया गया. pancreata ठंड संरक्षण समाधान में भेजा गया था (UW, के विस्कॉन्सिन या HTK के विश्वविद्यालय, हिस्टडीन Tryptophan ketoglutarate)<sup4-7&gt;</sup&gt; सेल यूआईसी पर अलगाव प्रयोगशाला आइलेट अलगाव के लिए. अग्नाशय islets यूआईसी विधि है, जो मूल रूप से Ricordi द्वारा वर्णित विधि का एक संशोधित संस्करण है का उपयोग कर अलग किया गया<em&gt; एट अल</em&gt;<sup8&gt;</sup&gt;. पार्ट में वर्णित मैं: पाचन और अग्नाशय के ऊतक का संग्रह, मानव अग्न्याशय छंटनी था, cannulated, perfused, और पचता. संग्रह और UW समाधान में ऊष्मायन के कम से कम 30 मिनट के बाद, ऊतक सेल विभाजक में लोड किया गया था (COBE +२,९९१, Cobe, Lakewood, सीओ शुद्धि के लिए)<sup&gt; 3</sup&gt;. निम्नलिखित शुद्धि, आइलेट उपज (आइलेट समकक्ष, IEQ के रूप में व्यक्त), ऊतक की मात्रा, और पवित्रता मानक विधियों के अनुसार निर्धारित किया गया था<sup9&gt;</sup&gt;. पृथक islets CMRL-1066 (Mediatech, Herndon, VA) के मीडिया, 1.5% मानव albumin, 0.1% (आईटीएस) इंसुलिन transferrin - सेलेनियम, ciprofloxacin, 1M HEPES के 5 मिलीलीटर की 1 मिलीलीटर के साथ पूरक है, और 14.5 मिलीलीटर में सुसंस्कृत थे 37 में 7.5% T175 बोतल में सोडियम बिकारबोनिट डिग्री सेल्सियस रातोंरात संस्कृति पहले islets प्रतिरोपित थे या अनुसंधान के लिए इस्तेमाल किया.

Watch this Scientific Journal Video about Human Pancreatic Islet Isolation: Part II: Purification and Culture of Human Islets at JoVE.com

Human Pancreatic Islet Isolation: Part II: Purification and Culture of Human Islets

उच्च गुणवत्ता और मानव islets की उचित मात्रा में हासिल सफल आइलेट प्रत्यारोपण के लिए प्रमुख किसी और चीज की की है. इस वीडियो में, हम कदम से कदम का वर्णन एक संशोधित स्वचालित पद्धति का उपयोग मानव अग्नाशय आइलेट (भाग द्वितीय: और मानव islets की शुद्धि और संस्कृति) अलगाव के लिए प्रक्रियाओं.

मानव अग्नाशय आइलेट अलगाव: भाग द्वितीय: और मानव islets के शोधन और संस्कृति

Management of Type 1 diabetes is burdensome, both to the individual and society, costing over 100 billion dollars annually. Despite the widespread use of ...

Research

JoVE Journal

Biology

Murine Pancreatic Islet Isolation

Murine अग्नाशय आइलेट अलगाव

Human Pancreatic Islet Isolation: Part I: Digestion and Collection of Pancreatic Tissue

मानव अग्नाशय आइलेट अलगाव: भाग मैं: पाचन और अग्नाशय के ऊतक का संग्रह

Comprehensive Compositional Analysis of Plant Cell Walls (Lignocellulosic biomass) Part II: Carbohydrates

Comprehensive Compositional Analysis of Plant Cell Walls Lignocellulosic biomass Part II: Carbohydrates

संयंत्र सेल दीवारों के व्यापक compositional विश्लेषण (lignocellulosic बायोमास) भाग द्वितीय: कार्बोहाइड्रेट

The need for renewable, carbon neutral, and sustainable raw materials for industry and society has become one of the most pressing issues for the 21st ...

Isolation of Stem Cells from Human Pancreatic Cancer Xenografts

मानव अग्नाशय के कैंसर xenografts से स्टेम सेल के अलगाव

Cancer stem cells (CSCs) have been identified in a growing number of malignancies and are functionally defined by their ability to undergo self-renewal ...

Isolation and Culture of Adult Epithelial Stem Cells from Human Skin

और वयस्क मानव त्वचा से उपकला स्टेम सेल के अलगाव संस्कृति

The homeostasis of all self-renewing tissues is dependent on adult stem cells. As undifferentiated stem cells undergo asymmetric divisions, they generate ...

A Method for Mouse Pancreatic Islet Isolation and Intracellular cAMP Determination

माउस अग्नाशय आइलेट अलगाव और intracellular शिविर निर्धारण के लिए एक विधि

Uncontrolled glycemia is a hallmark of diabetes mellitus and promotes morbidities like neuropathy, nephropathy, and retinopathy. With the increasing ...

Isolation and Culture of Mouse Primary Pancreatic Acinar Cells

माउस प्राथमिक अग्नाशय कोष्ठकी कोशिकाओं के अलगाव और संस्कृति

This protocol permits rapid isolation (in less than 1 hr) of murine pancreatic acini, making it possible to maintain them in culture for more than one ...

Efficient Production and Purification of Recombinant Murine Kindlin-3 from Insect Cells for Biophysical Studies

के कुशल उत्पादन और शोधन संयोजक Murine Kindlin -3 की biophysical अध्ययन के लिए कीट कोशिकाओं से

Kindlins are essential coactivators, with talin, of the cell surface receptors&#160;integrins and also participate in integrin outside-in signalling, and ...

Ex vivo Culture of Mouse Embryonic Skin and Live-imaging of Melanoblast Migration

Ex vivo Culture of Mouse Embryonic Skin and Live-imaging of Melanoblast Migration

माउस भ्रूणीय त्वचा और Melanoblast प्रवासन के रहते इमेजिंग के पूर्व vivo संस्कृति

Melanoblasts are the neural crest derived precursors of melanocytes; the cells responsible for producing the pigment in skin and hair. Melanoblasts ...

A Simple High Efficiency Protocol for Pancreatic Islet Isolation from Mice

चूहे से अग्नाशयी आइलेट अलगाव के लिए एक सरल उच्च दक्षता प्रोटोकॉल

Pancreatic islets, also called the Islets of Langerhans, are a cluster of endocrine cells which produces hormones for glucose regulation and other ...