Name: an in vitro skin irritation test (sit) using the epiderm reconstructed human epidermal (rhe) model
Uploaded: 2009-07-13T21:00:00
Duration: 21 min 16 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about An In Vitro Skin Irritation Test SIT using the EpiDerm Reconstructed Human Epidermal RHE Model at JoVE.com

המחברים מבקשים להודות ל ZEBET בבית BFR (גרמניה), BASF SE (גרמניה), IIVS בע&quot;מ (ארה&quot;ב), מחנה הריכוז-LSL (אוסטריה) להשתתפות במחקר בינלאומי רב מרכזי אימות של EpiDerm השתנה SIT (5 ).

<ol>
	<li>Kand&#225;rov&#225;, H., Liebsch, M., Genschow, E., Gerner, I. n. g. r. i. d., Traue, D., Slawik, B., Spielmann, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optimization+of+the+EpiDerm+Test+Protocol+for+the+upcoming+ECVAM+Validation+Study+on+In+Vitro+Skin+Irritation+Tests.">Optimization of the EpiDerm Test Protocol for the upcoming ECVAM Validation Study on In Vitro Skin Irritation Tests.</a> ALTEX. 21, 107-114 (2004).</li><li>Kand&#225;rov&#225;, H., Liebsch, M., Gerner, I., Schmidt, E., Genschow, E., Traue, D., Spielmann, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=EpiDerm+Skin+Irritation+Test+Protocol+-+Assessment+of+the+performance+of+the+optimized+test.">EpiDerm Skin Irritation Test Protocol - Assessment of the performance of the optimized test.</a> ATLA. 33, 351-367 (2005).</li><li>Kand&#225;rov&#225;, H., Hayden, P., Klausner, M., Kubilus, J., Kearney, P., Sheasgreen, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+Vitro+Skin+Irritation+Test:+Improving+the+Sensitivity+of+the+EpiDerm+Skin+Irritation+Test+Protocol.Accepted+for+publication.">In Vitro Skin Irritation Test: Improving the Sensitivity of the EpiDerm Skin Irritation Test Protocol.Accepted for publication.</a> ATLA. , (2009).</li><li>Spielmann, H., Hoffmann, S., Liebsch, M., Botham, P., Fentem, J., Eskes, C., Roguet, R., Cotovi, J., Cole, T., Worth, A., Heylings, J., Jones, P., Robles, C., Kand&#225;rov&#225;, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+ECVAM+International+Validation+Study+on+In+Vitro+Tests+for+Acute+Skin+Irritation:+Report+on+the+Validity+of+the+EPISKIN+and+EpiDerm+Assays+and+on+the+Skin+Integrity+Function+Test.">The ECVAM International Validation Study on In Vitro Tests for Acute Skin Irritation: Report on the Validity of the EPISKIN and EpiDerm Assays and on the Skin Integrity Function Test.</a> ATLA. 35, 559-601 (2007).</li><li>Liebsch, M., Gamer, A., Curren, R., Frank, J., Genschow, E., Tharmann, J., Remmele, M., Bauer, B., Raabe, H., Barnes, N., Hilberer, A., Wilt, N., Lornejad-Sch&#228;fer, M. R., Sch&#228;fer, C., Spiller, E., Hayden, P., Kand&#225;rov&#225;, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Follow-up+validation+of+the+modified+EpiDerm+Skin+Irritation+Test+(SIT):+results+of+a+multicentre+study+of+twenty+reference+test+substances.">Follow-up validation of the modified EpiDerm Skin Irritation Test (SIT): results of a multicentre study of twenty reference test substances.</a> , (2008).</li><li>United Nations. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Globally Harmonized System of Classification and Labeling of Chemicals (GHS). , (2007).</li><li>ESAC. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Statement on the Scientific Validity of In-Vitro Tests for Skin Irritation Testing. , (2008).</li><li>Gupta, K., Rispin, A., Stitzel, K., Coecke, S., Harbell, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ensuring+quality+of+in+vitro+alternative+test+methods:+Issues+and+answers.">Ensuring quality of in vitro alternative test methods: Issues and answers.</a> Regul Toxicol Pharmacol. 43, 219-224 (2005).</li><li>Rispin, A., Stitzel, K., Harbell, J., Klausner, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ensuring+quality+of+in+vitro+alternative+test+methods:+Current+practice.">Ensuring quality of in vitro alternative test methods: Current practice.</a> Regul Toxicol Pharmacol. 45, 97-103 (2006).</li></ol>

The authors are employees of MatTek corporation which produce reagents and tools used in this article.

בסרטון הזה, אנחנו הדגימו את גירוי בעור EpiDerm הבדיקה (EpiDerm SIT) פיתחו ומאומתים עבור בדיקות עור במבחנה גירוי של כימיקלים, כולל מרכיבים קוסמטיים ותרופות. בעת ביצוע בשיטה זו, חשוב לעבוד בתנאים היגיינית להקפיד לעקוב אחר פרוטוקול תוקף, שכן סטייה בפרוטוקול עלול לגרום לתוצאות שונות. כמה שינויים של assay אפשריים, לעומת זאת, שינויים בפרוטוקול יש לדון ישירות עם המחברים. המגבלה היחידה של שיטה זו היא התערבות אפשרית של החומר למבחן עם הקצה MTT. חומר הבדיקה בצבע אחד או ישירות מפחית MTT (ובכך מחקה פעילות dehydrogenase של המיטוכונדריה הסלולר) עלולים להפריע הקצה MTT. עם זאת, אלה חומר הבדיקה הם בעיה רק ​​אם בעת הבדיקה MTT (כלומר 42 שעות לאחר החשיפה לחומר המבחן) כמות מספקת של חומר הבדיקה עדיין קיימות על (או) ברקמות. במקרה של אירוע זה סביר, הפחתת (נכון) MTT מטבוליות את התרומה על ידי חומר בדיקה או בצבע (שקר) הפחתה MTT ישירה של החומר למבחן ניתן לכמת באמצעות הליך תיאר בפרוטרוט את סדר assay תקן מבצע המסופקים על ידי MatTek קורפ

an in vitro skin irritation test (sit) using the epiderm reconstructed human epidermal (rhe) model

גירוי בעור EpiDerm הבדיקה (EpiDerm SIT) פותחה<sup&gt; (1,2,3)</sup&gt; ומאומתים<sup&gt; (4,5)</sup&gt; עבור<em&gt; במבחנה</em&gt; גירוי בעור בדיקות של כימיקלים, כולל מרכיבים קוסמטיים ותרופות. SIT EpiDerm מנצל את 3D<em&gt; במבחנה</em&gt; אדם משוחזר אפידרמיס (RHE) EpiDerm מודל. ההליך המתואר פרוטוקול זה מאפשר אפליה בין המגרים של קטגוריה 2 GHS ולא מגרים<sup&gt; (6)</sup&gt;. הבדיקה מבוצעת במהלך תקופת זמן 4 יום, בהיקף של דגירה מראש, 60 דקות חשיפה, 42 שעות ביממה שלאחר הדגירה ואת הכדאיות assay MTT. לאחר קבלת רקמות הדגירה מראש הלילה (יום 0), רקמות נחשפים מקומי כדי לבדוק את הכימיקלים (יום 1), אשר יכול להיות נוזל, חצי מוצקים, מוצקים או שעווה. שלוש רקמות משמשים כימיים כל מבחן, כמו גם שליטה חיובית (5% aq. פתרון SDS), וכן שליטה שלילית (DPBS). חשיפה כימית נמשך 60 דקות, 35 דקות של הרקמות אשר נשמרים באינקובטור ב 37 ° C. חומרים המבחן יוסרו מכן על ידי הליך כביסה נרחבים מפני השטח רקמות. מוסיף הרקמה הם מחק והועברו בינוני טרי. לאחר תקופת דגירה 24 שעות (יום 2), המדיום הוא החליף. המדיום ניתן לשמור לניתוח נוסף של ציטוקינים או נקודות הקצה השני של עניין. לאחר חילופי בינוני, רקמות מודגרת עבור 18 שעות נוספות. בסוף 42h כולו שלאחר הדגירה (יום 3), רקמות מועברים לתוך פתרון MTT צהוב מודגרות במשך 3 שעות. מלח כתוצאה סגול כחול formazan, נוצר בעיקר על ידי מטבוליזם המיטוכונדריה, מופק עבור 2 שעות באמצעות isopropanol. צפיפות אופטית של formazan המחולץ נקבעת באמצעות ספקטרופוטומטר. כימי מוגדר כאזור מגרים אם את הכדאיות היחסית רקמות לרקמות בקרה שלילית טיפול מופחת מתחת 50%. הליך זה יכול לשמש כתחליף מלא של במבחן vivo גירוי בעור ארנב לזיהוי סיכון וסימון של כימיקלים בקנה אחד עם תקנות האיחוד האירופי<sup&gt; (7)</sup&gt;.

Watch this Scientific Journal Video about An In Vitro Skin Irritation Test SIT using the EpiDerm Reconstructed Human Epidermal RHE Model at JoVE.com

An In Vitro Skin Irritation Test SIT using the EpiDerm Reconstructed Human Epidermal RHE Model

בסרטון הזה, אנחנו מדגימים את גירוי בעור EpiDerm הבדיקה (EpiDerm SIT) פיתחו ומאומתים עבור<em&gt; במבחנה</em&gt; גירוי בעור בדיקות של כימיקלים, כולל מרכיבים קוסמטיים ותרופות.

במבחנה גירוי בעור מבחן (SIT) באמצעות EpiDerm שחזור האדם עוריות (RHE) דגם

The EpiDerm Skin Irritation test (EpiDerm SIT) was developed (1,2,3) and validated (4,5) for in vitro skin irritation testing of chemicals, including ...

Research

JoVE Journal

Biology

An In Vitro Skin Irritation Test (SIT) using the EpiDerm Reconstructed Human Epidermal (RHE) Model

Christopher Hughes:  An in vitro model for the Study of Angiogenesis (Interview)

Christopher Hughes:  An in vitro model for the Study of Angiogenesis Interview

כריסטופר יוז: במודל חוץ גופית לחקר אנגיוגנזה (ראיון)

Christopher C.W. Hughes describes the utility of his culture system for studying angiogenesis in vitro.  He explains the importance of fibroblasts that ...

Mouse Epidermal Neural Crest Stem Cell (EPI-NCSC) Cultures

Mouse Epidermal Neural Crest Stem Cell EPI-NCSC Cultures

עכבר עוריות עצבית קרסט לתאי גזע (EPI-NCSC) תרבויות

EPI-NCSC are remnants of the embryonic neural crest in an adult location, the bulge of hair follicles. They are multipotent stem cells that have the ...

An Allele-specific Gene Expression Assay to Test the Functional Basis of Genetic Associations

אלל ספציפי Gene Expression Assay כדי לבדוק את בסיס פונקציונלי של אגודות גנטי

The number of significant genetic associations with common complex traits is constantly increasing. However, most of these associations have not been ...

Imaging C. elegans Embryos using an Epifluorescent Microscope and Open Source Software

Imaging C. elegans Embryos using an Epifluorescent Microscope and Open Source Software

הדמיה ג elegans עוברים באמצעות מיקרוסקופ Epifluorescent ותוכנות קוד פתוח

Cellular processes, such as chromosome assembly, segregation and cytokinesis,are inherently dynamic. Time-lapse imaging of living cells, using ...

Long-term Lethal Toxicity Test with the Crustacean Artemia franciscana

Long-term Lethal Toxicity Test with the Crustacean Artemia franciscana

לטווח ארוך רעילות מבחן קטלני עם לסרטן הארטמיה franciscana</em

Our research activities target the use of biological methods for the evaluation of environmental quality, with particular reference to saltwater/brackish ...

Differentiation of Newborn Mouse Skin Derived Stem Cells into Germ-like Cells In vitro

Differentiation of Newborn Mouse Skin Derived Stem Cells into Germ-like Cells In vitro

התמיינות של תאי העור של עכבר יילוד נגזר גזע לתאים דמוי נבט<em&gt; במבחנה</em

Studying  germ cell formation and differentiation has traditionally been very difficult  due to low cell numbers and their location deep within developing ...

Using Caenorhabditis elegans as a Model System to Study Protein Homeostasis in a Multicellular Organism

Using Caenorhabditis elegans as a Model System to Study Protein Homeostasis in a Multicellular Organism

The folding and assembly of proteins is essential for protein function, the long-term health of the cell, and longevity of the organism. Historically, the ...

An In Vitro Model for Studying Cellular Transformation by Kaposi Sarcoma Herpesvirus

An In Vitro Model for Studying Cellular Transformation by Kaposi Sarcoma Herpesvirus

מודל במבחנה עבור לימודי טרנספורמציה התאית על ידי ההרפס סרקומה קפוסי

Kaposi sarcoma (KS) is an unusual tumor composed of proliferating spindle cells that is initiated by infection of endothelial cells (EC) with KSHV, and ...

Isolation of Mouse Epidermal Keratinocytes and Their In Vitro Clonogenic Culture

בידוד של העכבר Keratinocytes באפידרמיס ושלהם בתרבות הclonogenic של מבחנה

The protocol described here is a reliable method of harvesting primary keratinocytes from adult female mice (54 &#177; 2 days old) yielding approximately ...

A Murine Model of a Burn Wound Reconstructed with an Allogeneic Skin Graft

מודל מורנה של פצע צריבה שוחזר עם שתל העור Allogeneic

Trivial superficial wounds heal without complications by primary intention. Deep wounds, such as full thickness burns, heal by secondary intention and ...