Name: generation of human cd40-activated b cells
Uploaded: 2009-10-16T23:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Generation of Human CD40-activated B cells Video at JoVE.com

<p class="jove_content" style=";text-align:right;direction:rtl"> وينقسم البروتوكول لتوليد خلايا B التي تنشط من CD40 PBMC إلى جزأين : الجزء A يدل على إعداد CD40 يجند NIH/3T3 معربا عن الخلايا ، والتي سوف تستخدم في الخلايا المغذية لوحة محدد. الجزء باء يصف الفعلية CD40 - B الثقافة. </p><p class="jove_title" style=";text-align:right;direction:rtl"> A. إعداد الخلايا المغذية (tCD40L NIH/3T3) ...

<ol>
	<li>Schultze, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CD40-activated+human+B+cells:+an+alternative+source+of+highly+efficient+antigen+presenting+cells+to+generate+autologous+antigen-specific+T+cells+for+adoptive+immunotherapy.">CD40-activated human B cells: an alternative source of highly efficient antigen presenting cells to generate autologous antigen-specific T cells for adoptive immunotherapy.</a> <em style='font-style: italic'>J Clin Invest</em>. <b>100</b>, 2757-2765 (1997).</li><li>Schultze, J. L., Grabbe, S., vonBergwelt-Baildon, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=DCs+and+CD40-activated+B+cells:+current+and+future+avenues+to+cellular+cancer+immunotherapy.">DCs and CD40-activated B cells: current and future avenues to cellular cancer immunotherapy.</a> <em style='font-style: italic'>Trends Immunol</em>. <b>25</b>, 659-664 (2004).</li><li>Bergwelt-Baildon, M. v. o. n. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CD40-activated+B+cells+express+full+lymph+node+homing+triad+and+induce+T-cell+chemotaxis:+potential+as+cellular+adjuvants.">CD40-activated B cells express full lymph node homing triad and induce T-cell chemotaxis: potential as cellular adjuvants.</a> <em style='font-style: italic'>Blood</em>. <b>107</b>, 2786-2789 (2006).</li><li>Wiesner, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Conditional+immortalization+of+human+B+cells+by+CD40+ligation.">Conditional immortalization of human B cells by CD40 ligation.</a> <em style='font-style: italic'>PLoS ONE</em>. <b>3</b>, 1464-14 (2008).</li><li>Urashima, M., Chauhan, D., Uchiyama, H., Freeman, G. J., Anderson, K. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CD40+ligand+triggered+interleukin-6+secretion+in+multiple+myeloma.">CD40 ligand triggered interleukin-6 secretion in multiple myeloma.</a> <em style='font-style: italic'>Blood</em>. <b>85</b>, 1903-1912 (1995).</li><li>Lapointe, R., Bellemare-Pelletier, A., Housseau, F., Thibodeau, J., Hwu, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CD40-stimulated+B+lymphocytes+pulsed+with+tumor+antigens+are+effective+antigen-presenting+cells+that+can+generate+specific+T+cells.">CD40-stimulated B lymphocytes pulsed with tumor antigens are effective antigen-presenting cells that can generate specific T cells.</a> <em style='font-style: italic'>Cancer Res</em>. <b>63</b>, 2836-2843 (2003).</li><li>von Bergwelt-Baildon, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+primary+and+memory+cytotoxic+T+lymphocyte+responses+are+efficiently+induced+by+means+of+CD40-activated+B+cells+as+antigen-presenting+cells:+potential+for+clinical+application.">Human primary and memory cytotoxic T lymphocyte responses are efficiently induced by means of CD40-activated B cells as antigen-presenting cells: potential for clinical application.</a> <em style='font-style: italic'>Blood</em>. <b>99</b>, 3319-3325 (2002).</li><li>Kondo, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CD40-activated+B+cells+can+be+generated+in+high+number+and+purity+in+cancer+patients:+analysis+of+immunogenicity+and+homing+potential.">CD40-activated B cells can be generated in high number and purity in cancer patients: analysis of immunogenicity and homing potential.</a> <em style='font-style: italic'>Clin Exp Immunol</em>. <b>155</b>, 249-256 (2009).</li><li>Mason, N. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=RNA-loaded+CD40-activated+B+cells+stimulate+antigen-specific+T-cell+responses+in+dogs+with+spontaneous+lymphoma.">RNA-loaded CD40-activated B cells stimulate antigen-specific T-cell responses in dogs with spontaneous lymphoma.</a> <em style='font-style: italic'>Gene Ther</em>. <b>15</b>, 955-965 (2008).</li></ol>

<p class="jove_title" style=";text-align:right;direction:rtl"> A. إعداد وسائل الإعلام : </p><table border="1"cellspacing="0" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td colspan="2"> <strong>التغذية المتوسطة الخلية نوع البرية</strong> </td><td colspan="2"> <strong>اختيار الخلية المتوسطة المغذية</strong> </td></tr><tr><td> <strong>الكاشف</strong> </td><td> <strong>تركيز</strong> </td><td> <strong>الكاشف</strong> </td><td> <strong>تركيز</strong> </td></tr><tr><td> DMEM - هام ل/ F12 </td><td></td><td> DMEM - هام ل/ F12 </td><td></td></tr><tr><td> L - الجلوتامين </td><td> 365 ميكروغرام / مل </td><td> L - الجلوتامين </td><td> 365 ميكروغرام / مل </td></tr><tr><td> FBS </td><td> 10 ٪ </td><td> FBS </td><td> 10 ٪ </td></tr><tr><td> HEPES </td><td> 10 ملي </td><td> HEPES </td><td> 10 ملي </td></tr><tr><td> الجنتاميسين </td><td> 15 ميكروغرام / مل </td><td> الجنتاميسين </td><td> 15 ميكروغرام / مل </td></tr><tr><td></td><td></td><td> G - 418 </td><td> 0.7 ملغ / مل </td></tr></table><table cellspacing="0" border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td colspan="2"> <strong>CD40 باء غسل المتوسطة</strong> </td><td colspan="2"> <strong>B - CD40 مستنبت</strong> </td></tr><tr><td> <strong>الكاشف</strong> </td><td> <strong>تركيز</strong> </td><td> <strong>الكاشف</strong> </td><td> <strong>تركيز</strong> </td></tr><tr></tr></tbody><tbody><tr><td> IMDM </td><td><br /></td><td> IMDM </td><td><br /></td></tr></tbody><tbody><tr><td> L - الجلوتامين </td><td> 584 ميكروغرام / مل </td><td> L - الجلوتامين </td><td> 584 ميكروغرام / مل </td></tr></tbody><tbody><tr><td> HEPES </td><td> 25 ملم </td><td> HEPES </td><td> 25 ملم </td></tr></tbody><tbody><tr><td> الجنتاميسين </td><td> 15 ميكروغرام / مل </td><td> الجنتاميسين </td><td> 15 ميكروغرام / مل </td></tr></tbody><tbody><tr><td><br /></td><td><br /></td><td> RH ترانسفيرين </td><td> 50 ميكروغرام / مل </td></tr></tbody><tbody><tr><td><br /></td><td><br /></td><td> RH الأنسولين </td><td> 5 ميكروغرام / مل </td></tr></tbody><tbody><tr><td><br /></td><td><br /></td><td> AB - Humanserum </td><td> 10 ٪ </td></tr></tbody></table><p class="jove_title" style=";text-align:right;direction:rtl"> B. متنوعة الكواشف : </p><table cellspacing="0" border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> <strong>الكاشف</strong> </td><td> <strong>شركة</strong> </td><td> <strong>لكي لا</strong> </td></tr><tr></tr><tr><td> DMEM / هام لF12 </td><td> PAA </td><td> لا القط : E15 - 813 </td></tr><tr><td> IMDM </td><td> Invitrogen Gibco ® </td><td> REF 21980-032 </td></tr><tr><td> Dulbecco في برنامج تلفزيوني (10X) </td><td> PAA </td><td> القط لا H15 - 011 </td></tr><tr><td> AB - مصل الإنسان </td><td> Invitrogen </td><td> القط لا 34005100 </td></tr><tr><td> هولو ، ترانسفيرين الإنسان </td><td> سيغما </td><td> القط لا T0665 </td></tr><tr><td> الأنسولين البشري </td><td> سيغما </td><td> القط لا I2643 </td></tr><tr><td> Gencin ® </td><td> حدد الدلتا </td><td> الفن لا يوجد 7395800 </td></tr><tr><td> الإنسان إينترليوكين - 4 المؤتلف </td><td> Immunotools </td><td> القط لا 11130045 </td></tr><tr><td> السيكلوسبورين A </td><td> شركة نوفارتيس </td><td> القط لا 0078-0109-01 NDC </td></tr><tr><td> FBS </td><td> LONZA </td><td> القط لا DE14 - 802C </td></tr><tr><td> HEPES العازلة </td><td> PAA </td><td> القط لا S11 - 001 </td></tr><tr><td> G - 418 كبريتات </td><td> PAA </td><td> القط لا P02 - 012 </td></tr><tr><td> التربسين / EDTA (10X) </td><td> Invitrogen Gibco ® </td><td> REF 15400-054 </td></tr></tbody></table><p class="jove_title" style=";text-align:right;direction:rtl"> جيم لوازم متنوعة : </p><table cellspacing="0" border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> <strong>الكاشف</strong> </td><td> <strong>شركة</strong> </td><td> <strong>لكي لا</strong> </td></tr><tr></tr><tr><td> ماصة معقمة نصائح </td><td> Sarstedt </td><td></td></tr><tr><td> 6 كذلك لوحة </td><td> نونك </td><td> القط لا 140675 </td></tr><tr><td> 50mL أنبوب مخروطي </td><td> دينار بحريني فالكون ™ </td><td> القط لا 352070 </td></tr><tr><td> نسيج الثقافة القارورة </td><td> SARSTEDT </td><td> القط لا 83.1813.002 </td></tr></tbody></table>

generation of human cd40-activated b cells

<p style=";text-align:right;direction:rtl"> وقد تم تحديد CD40 تنشيط خلايا B (CD40 - B الخلايا) كمصدر بديل للالمناعية تنشيطية مستضد تقديم الخلايا ، <sup>1-3</sup> (APC) لعلاج مناعي السرطان. بالمقارنة مع الخلايا الجذعية (DCS) ، وأفضل APC تتسم ، CD40 - B وخلايا عدة متميزة الخصائص البيولوجية والتقنية. مماثلة للبلدان النامية ، تظهر الخلايا B تعبير زيادة MHC وشارك في تنشيطية جزيئات (Fig.1b) ، المعرض قدرة قوية المهاجرة وتقديم العرض مستضد بكفاءة إلى خلايا T ، بعد التحفيز مع يجند انترلوكين 4 و CD40 (CD40L). لكن ، على النقيض من البلدان النامية غير ناضجة أو ناضجة ، CD40 - B الخلايا التعبير عن العقدة الليمفاوية ثالوث صاروخ موجه كامل يتكون من CD62L ، CCR7/CXCR4 وظيفة الكريات البيض مستضد - 1 (LFA1 ، CD11a/CD18) ، اللازمة لصاروخ موجه إلى الأجهزة اللمفاوية الثانوية (Fig.1a) <sup>3.</sup> يمكن أن تتولد CD40 - B الخلايا دون صعوبات من كميات صغيرة جدا من الدم المحيطي التي يمكن مزيد من التوسع <em>في المختبر</em> لكميات كبيرة جدا من درجة عالية من محض CD40 - B الخلايا السرطانية (&gt; 10 <sup>9</sup> خلايا لكل مريض) من المتبرعين الأصحاء وكذلك مرضى (Fig.1c ، د) <sup>1،4.</sup> </p><p style=";text-align:right;direction:rtl"> في هذا البروتوكول ونحن لشرح كيفية الحصول على تفعيلها بشكل كامل CD40 - B الخلايا من PBMC الإنسان. الجزيئات الأساسية للثقافة الخلية هي CD40 يجند ، انترلوكين 4 (IL - 4) ، والسيكلوسبورين A (CSA) ، والتي تتجدد في حلقة اليوم ثقافة 3-4 لأغراض المختبر قدمت CD40 - تحفيز الخلايا التي NIH/3T3 معربا عن المؤتلف الإنسان CD40 يجند (tCD40L NIH/3T3) <sup>5.</sup> لتجنب التلوث مع المنظمات غير transfected الخلايا ، والتعبير ليجند CD40 الإنسان على transfectants يجب أن يكون محددا بشكل منتظم (Fig.2). </p><p style=";text-align:right;direction:rtl"> بعد 14 يوما CD40 B - الثقافات الخلية تتكون من خلايا أكثر من 95 ٪ ب نقية وتوسيع CD40 - B الخلايا أكثر من 65 يوما هو ممكن في كثير من الأحيان من دون أي خسارة وظيفة <sup>1 و 4.</sup> CD40 - B الخلايا تأخذ بكفاءة أعلى ، و <sup>6</sup> مولدات المضادات العملية الحالية لخلايا تي. انهم لا naϊve فقط الوزراء ، وإنما أيضا توسيع الخلايا التائية الذاكرة <sup>7،8.</sup> ويمكن استخدام CD40 تنشيط خلايا B لدراسة الخلية B - التنشيط ، والتمايز وظيفة. وعلاوة على ذلك ، لأنها تمثل أداة واعدة للقاح علاجي أو وقائي ضد الأورام <sup>9.</sup> </p>

Watch this Scientific Journal Video about Generation of Human CD40-activated B cells Video at JoVE.com

Generation of Human CD40-activated B cells Video (Video) | JoVE

<p class="jove_content">في هذا الفيديو نقدم<em&gt; خارج الحي</em&gt; توليد والتوسع في خلايا B - CD40 تنشيط (CD40 - B) من خلايا الدم المحيطية وحيدات النوى (PBMC) عن طريق التحفيز مع CD40 يجند وانترلوكين 4.</p>

جيل من الخلايا البشرية باء تنشيط CD40

CD40-activated B cells (CD40-B cells) have been identified as an alternative source of immuno-stimulatory antigen-presenting cells (APC) for cancer ...

Research

JoVE Journal

Biology

Generation of Human CD40-activated B cells

Chromosomal Spread Preparation of Human Embryonic Stem Cells for Karyotyping

Chromosomal Spread Preparation of Human Embryonic Stem Cells for Karyotyping Video (Video) | JoVE

الكروموسومات التحضير انتشار الخلايا الجذعية الجنينية البشرية لKaryotyping

Although human embryonic stem cells (hESC) have been shown to present a stable diploid karyotype 1, many studies have reported that depending on culture ...

Generation of Induced Pluripotent Stem Cells by Reprogramming Human Fibroblasts with the Stemgent Human TF Lentivirus Set

Generation of Induced Pluripotent Stem Cells by Reprogramming Human Fibroblasts with the Stemgent Human TF Lentivirus Set Video (Video) | JoVE

تعيين جيل من الخلايا الجذعية المحفزة المستحثة عن طريق إعادة برمجة الخلايا الليفية الإنسان مع الإنسان الفيروسة البطيئة TF Stemgent

In 2006, Yamanaka and colleagues first demonstrated that retrovirus-mediated delivery and expression of Oct4, Sox2, c-Myc and Klf4 is capable of inducing ...

Robust Generation of Hepatocyte-like Cells from Human Embryonic Stem Cell Populations

Robust Generation of Hepatocyte-like Cells from Human Embryonic Stem Cell Populations Video (Video) | JoVE

قوية من الجيل الكبدية مثل خلايا الجنينية البشرية من السكان الخلايا الجذعية

Despite progress in modelling human drug toxicity, many compounds fail during clinical trials due to unpredicted side effects. The cost of clinical ...

Phenotypic and Functional Characterization of Endothelial Colony Forming Cells Derived from Human Umbilical Cord Blood

Phenotypic and Functional Characterization of Endothelial Colony Forming Cells Derived from Human Umbilical Cord Blood Video (Video) | JoVE

توصيف المظهري والوظيفي للخلايا غشائي مستعمرة تشكيل المستمدة من الإنسان دم الحبل السري

Longstanding views of new blood vessel formation via angiogenesis, vasculogenesis, and arteriogenesis have been recently reviewed1. The presence of ...

Rapid and Efficient Generation of Neurons from Human Pluripotent Stem Cells in a Multititre Plate Format

Rapid and Efficient Generation of Neurons from Human Pluripotent Stem Cells in a Multititre Plate Format Video (Video) | JoVE

بسرعة وكفاءة توليد الخلايا العصبية من الخلايا الجذعية المحفزة الإنسان في تنسيق اللوحة Multititre

Existing protocols for the generation of neurons from human pluripotent stem cells (hPSCs) are often tedious in that they are  multistep procedures ...

Generation of Dispersed Presomitic Mesoderm Cell Cultures for Imaging of the Zebrafish Segmentation Clock in Single Cells

Generation of Dispersed Presomitic Mesoderm Cell Cultures for Imaging of the Zebrafish Segmentation Clock in Single Cells Video (Video) | JoVE

جيل من تفرقوا Presomitic الأديم المتوسط ​​الثقافات خلية التصوير من اسماك الزرد الإنقسام على مدار الساعة في خلايا واحدة

Segmentation is a  periodic and sequential morphogenetic process in vertebrates. This rhythmic  formation of blocks of tissue called somites along the ...

Generation of Human Cardiomyocytes: A Differentiation Protocol from Feeder-free Human Induced Pluripotent Stem Cells

Generation of Human Cardiomyocytes: A Differentiation Protocol from Feeder-free Human Induced Pluripotent Stem Cells Video (Video) | JoVE

جيل من العضلية الإنسان: البروتوكول التمايز من خالية من الطاعم المستحثة الخلايا الجذعية المحفزة الإنسان

In order to investigate the events driving heart development and to determine the molecular mechanisms leading to myocardial diseases in humans, it is ...

Efficient Generation Human Induced Pluripotent Stem Cells from Human Somatic Cells with Sendai-virus

Efficient Generation Human Induced Pluripotent Stem Cells from Human Somatic Cells with Sendai-virus Video (Video) | JoVE

كفاءة الجيل المستحثة الإنسان افرة القوة الخلايا الجذعية من الخلايا الجسدية البشرية مع سينداي الفيروسات

A few years ago, the establishment of human induced pluripotent stem cells (iPSCs) ushered in a new era in biomedicine. Potential uses of human iPSCs ...

Generation and Culture of Blood Outgrowth Endothelial Cells from Human Peripheral Blood

Generation and Culture of Blood Outgrowth Endothelial Cells from Human Peripheral Blood Video (Video) | JoVE

جيل وثقافة الدم ثمرة غشائي خلايا من الدم المحيطي الإنسان

Historically, the limited availability of primary endothelial cells from patients with vascular disorders has hindered the study of the molecular ...

High-throughput CRISPR Vector Construction and Characterization of DNA Modifications by Generation of Tomato Hairy Roots

High-throughput CRISPR Vector Construction and Characterization of DNA Modifications by Generation of Tomato Hairy Roots Video (Video) | JoVE

الإنتاجية العالية كريسبر ناقل البناء وتوصيف التعديلات الحمض النووي عن طريق توليد جذور الطماطم مشعر

Targeted DNA mutations generated by vectors with clustered regularly interspaced short palindromic repeats (CRISPR)/Cas9 technology have proven useful for ...