Name: generation of human cd40-activated b cells
Uploaded: 2009-10-16T23:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Generation of Human CD40-activated B cells at JoVE.com

<p class="jove_content"> Протокол для поколения человеческие CD40 активированных В-клеток РВМС делится на две части: часть демонстрирует подготовку CD40 лиганд выражения NIH/3T3 клетки, которые будут использоваться в качестве пластинчатых связаны фидерные клетки. Часть В описывает фактические CD40-B культуры. </p><p class="...

<ol>
	<li>Schultze, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CD40-activated+human+B+cells:+an+alternative+source+of+highly+efficient+antigen+presenting+cells+to+generate+autologous+antigen-specific+T+cells+for+adoptive+immunotherapy.">CD40-activated human B cells: an alternative source of highly efficient antigen presenting cells to generate autologous antigen-specific T cells for adoptive immunotherapy.</a> <em style='font-style: italic'>J Clin Invest</em>. <b>100</b>, 2757-2765 (1997).</li><li>Schultze, J. L., Grabbe, S., vonBergwelt-Baildon, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=DCs+and+CD40-activated+B+cells:+current+and+future+avenues+to+cellular+cancer+immunotherapy.">DCs and CD40-activated B cells: current and future avenues to cellular cancer immunotherapy.</a> <em style='font-style: italic'>Trends Immunol</em>. <b>25</b>, 659-664 (2004).</li><li>Bergwelt-Baildon, M. v. o. n. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CD40-activated+B+cells+express+full+lymph+node+homing+triad+and+induce+T-cell+chemotaxis:+potential+as+cellular+adjuvants.">CD40-activated B cells express full lymph node homing triad and induce T-cell chemotaxis: potential as cellular adjuvants.</a> <em style='font-style: italic'>Blood</em>. <b>107</b>, 2786-2789 (2006).</li><li>Wiesner, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Conditional+immortalization+of+human+B+cells+by+CD40+ligation.">Conditional immortalization of human B cells by CD40 ligation.</a> <em style='font-style: italic'>PLoS ONE</em>. <b>3</b>, 1464-14 (2008).</li><li>Urashima, M., Chauhan, D., Uchiyama, H., Freeman, G. J., Anderson, K. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CD40+ligand+triggered+interleukin-6+secretion+in+multiple+myeloma.">CD40 ligand triggered interleukin-6 secretion in multiple myeloma.</a> <em style='font-style: italic'>Blood</em>. <b>85</b>, 1903-1912 (1995).</li><li>Lapointe, R., Bellemare-Pelletier, A., Housseau, F., Thibodeau, J., Hwu, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CD40-stimulated+B+lymphocytes+pulsed+with+tumor+antigens+are+effective+antigen-presenting+cells+that+can+generate+specific+T+cells.">CD40-stimulated B lymphocytes pulsed with tumor antigens are effective antigen-presenting cells that can generate specific T cells.</a> <em style='font-style: italic'>Cancer Res</em>. <b>63</b>, 2836-2843 (2003).</li><li>von Bergwelt-Baildon, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+primary+and+memory+cytotoxic+T+lymphocyte+responses+are+efficiently+induced+by+means+of+CD40-activated+B+cells+as+antigen-presenting+cells:+potential+for+clinical+application.">Human primary and memory cytotoxic T lymphocyte responses are efficiently induced by means of CD40-activated B cells as antigen-presenting cells: potential for clinical application.</a> <em style='font-style: italic'>Blood</em>. <b>99</b>, 3319-3325 (2002).</li><li>Kondo, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CD40-activated+B+cells+can+be+generated+in+high+number+and+purity+in+cancer+patients:+analysis+of+immunogenicity+and+homing+potential.">CD40-activated B cells can be generated in high number and purity in cancer patients: analysis of immunogenicity and homing potential.</a> <em style='font-style: italic'>Clin Exp Immunol</em>. <b>155</b>, 249-256 (2009).</li><li>Mason, N. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=RNA-loaded+CD40-activated+B+cells+stimulate+antigen-specific+T-cell+responses+in+dogs+with+spontaneous+lymphoma.">RNA-loaded CD40-activated B cells stimulate antigen-specific T-cell responses in dogs with spontaneous lymphoma.</a> <em style='font-style: italic'>Gene Ther</em>. <b>15</b>, 955-965 (2008).</li></ol>

<p class="jove_title"> А. Подготовка носителя: </p><table border="1"cellspacing="0"><tbody><tr><td colspan="2"> <strong>Устройство подачи ячейки диких среднего типа</strong> </td><td colspan="2"> <strong>Устройство подачи клеточной селекции средой</strong> </td></tr><tr><td> <strong>Реагент</strong> </td><td> <strong>Концентрация</strong> </td><td> <strong>Реагент</strong> </td><td> <strong>Концентрация</strong> </td></tr><tr><td> DMEM-Хэма / F12 </td><td></td><td> DMEM-Хэма / F12 </td><td></td></tr><tr><td> L-глютамин </td><td> 365 мкг / мл </td><td> L-глютамин </td><td> 365 мкг / мл </td></tr><tr><td> FBS </td><td> 10% </td><td> FBS </td><td> 10% </td></tr><tr><td> HEPES </td><td> 10 мМ </td><td> HEPES </td><td> 10 мМ </td></tr><tr><td> Гентамицин </td><td> 15 мкг / мл </td><td> Гентамицин </td><td> 15 мкг / мл </td></tr><tr><td></td><td></td><td> G-418 </td><td> 0,7 мг / мл </td></tr></table><table cellspacing="0" border="1"><tbody><tr><td colspan="2"> <strong>CD40-B промыванием</strong> </td><td colspan="2"> <strong>CD40-B культуральной среде</strong> </td></tr><tr><td> <strong>Реагент</strong> </td><td> <strong>Концентрация</strong> </td><td> <strong>Реагент</strong> </td><td> <strong>Концентрация</strong> </td></tr><tr></tr></tbody><tbody><tr><td> IMDM </td><td><br /></td><td> IMDM </td><td><br /></td></tr></tbody><tbody><tr><td> L-глютамин </td><td> 584 мкг / мл </td><td> L-глютамин </td><td> 584 мкг / мл </td></tr></tbody><tbody><tr><td> HEPES </td><td> 25 мМ </td><td> HEPES </td><td> 25 мМ </td></tr></tbody><tbody><tr><td> Гентамицин </td><td> 15 мкг / мл </td><td> Гентамицин </td><td> 15 мкг / мл </td></tr></tbody><tbody><tr><td><br /></td><td><br /></td><td> влажность трансферрина </td><td> 50 мкг / мл </td></tr></tbody><tbody><tr><td><br /></td><td><br /></td><td> влажность Инсулин </td><td> 5 мкг / мл </td></tr></tbody><tbody><tr><td><br /></td><td><br /></td><td> AB-Humanserum </td><td> 10% </td></tr></tbody></table><p class="jove_title"> Б. Разное Реагенты: </p><table cellspacing="0" border="1"><tbody><tr><td> <strong>Реагент</strong> </td><td> <strong>Компания</strong> </td><td> <strong>Приказ №</strong> </td></tr><tr></tr><tr><td> DMEM / Хэма F12 </td><td> ПАА </td><td> Cat No: E15-813 </td></tr><tr><td> IMDM </td><td> Invitrogen Gibco ® </td><td> REF 21980-032 </td></tr><tr><td> Дульбеко PBS (10x) </td><td> ПАА </td><td> Cat Нет H15-011 </td></tr><tr><td> AB-человеческой сыворотке </td><td> Invitrogen </td><td> Cat Нет 34005100 </td></tr><tr><td> Холо-трансферрина человека </td><td> Сигма </td><td> Кошка не T0665 </td></tr><tr><td> Инсулин человека </td><td> Сигма </td><td> Cat Нет I2643 </td></tr><tr><td> Gencin ® </td><td> Дельта Выберите </td><td> Нет искусства 7395800 </td></tr><tr><td> Рекомбинантного человеческого интерлейкина-4 </td><td> Immunotools </td><td> Cat Нет 11130045 </td></tr><tr><td> Циклоспорин </td><td> Novartis </td><td> Кошка не NDC 0078-0109-01 </td></tr><tr><td> FBS </td><td> Lonza </td><td> Кошка не DE14-802C </td></tr><tr><td> HEPES буфера </td><td> ПАА </td><td> Cat Нет S11-001 </td></tr><tr><td> G-418 Сульфат </td><td> ПАА </td><td> Cat Нет P02-012 </td></tr><tr><td> Трипсина / EDTA (10x) </td><td> Invitrogen Gibco ® </td><td> REF 15400-054 </td></tr></tbody></table><p class="jove_title"> С. Различные системы: </p><table cellspacing="0" border="1"><tbody><tr><td> <strong>Реагент</strong> </td><td> <strong>Компания</strong> </td><td> <strong>Приказ №</strong> </td></tr><tr></tr><tr><td> Стерильные наконечники </td><td> Sarstedt </td><td></td></tr><tr><td> 6-луночный планшет </td><td> Nunc </td><td> Cat Нет 140675 </td></tr><tr><td> 50 мл коническую трубку </td><td> BD Сокол ™ </td><td> Cat Нет 352070 </td></tr><tr><td> Колбу культуры ткани </td><td> Sarstedt </td><td> Кошка не 83.1813.002 </td></tr></tbody></table>

generation of human cd40-activated b cells

<p class="jove_content"> CD40 активированных В-клеток (CD40-лимфоцитов) были определены в качестве альтернативного источника иммуно-стимулирующего антиген-представляющих клеток (АПК) для иммунотерапии рака <sup>1-3.</sup> По сравнению с дендритные клетки (ДК), лучше всего характеризует APC, CD40-лимфоцитов иметь несколько различных биологических и технических свойств. Как и в DC, В-клетки показывают повышенную экспрессию МНС и костимулирующих молекул (рис.1б), проявляют сильный миграционный потенциал и настоящее презентации антигена эффективно Т-клетки, после стимуляции интерлейкина-4 и CD40 лиганда (CD40L). Однако, в отличие от незрелых или зрелых ДК, CD40-B клетки экспрессируют полный лимфатических узлов самонаведения триаду, состоящую из CD62L, CCR7/CXCR4 и лейкоцитов функции антиген-1 (LFA1, CD11a/CD18), необходимых для наведения на вторичных лимфоидных органах (рис. 1а) <sup>3.</sup> CD40-B клетки могут быть получены без трудностей от очень небольших количествах периферической крови, которая может быть расширена <em>в пробирке</em> до очень большого количества высоко-чистые CD40-лимфоцитов (&gt; 10 <sup>9 клеток</sup> на одного пациента) от здоровых доноров, а также рака пациентов (Fig.1c, г) <sup>1,4.</sup> </p><p class="jove_content"> В этом протоколе мы покажем, как получить полностью активирована CD40-В-клетки из человеческой РВМС. Основные молекулы, для культуры клеток являются CD40 лиганд, интерлейкин-4 (ИЛ-4) и циклоспорин (CSA), которые пополняются в 3-4 цикла культура день. Для лабораторных целей CD40 стимуляции обеспечивается NIH/3T3 клеток, экспрессирующих рекомбинантный человеческий CD40 лиганд (tCD40L NIH/3T3) <sup>5.</sup> Во избежание загрязнения с неправительственными организациями, трансфицированных клеток, экспрессию человеческого CD40 лиганда на трансфектантов должен регулярно проверяться (рис.2). </p><p class="jove_content"> После 14 дней CD40-B культурах клеток состоят из более чем 95% чистой клеток и расширение CD40-B клеток в течение 65 дней часто удается без потери функции <sup>1, 4.</sup> CD40-В-клеток эффективно заниматься, обработки и представления антигенов Т-клеток <sup>6.</sup> Они не только простые naϊve, но и расширяют ячеек памяти T <sup>7,8.</sup> CD40 активированных В-клеток может быть использована для изучения В-клеточной активации, дифференцировки и функции. Более того, они представляют собой перспективный инструмент для использования в терапевтических или профилактических прививок против опухолей <sup>9.</sup> </p>

Watch this Scientific Journal Video about Generation of Human CD40-activated B cells at JoVE.com

Generation of Human CD40-activated B cells (Video) | JoVE

<p class="jove_content">В этом видео мы представляем<em&gt; Исключая виво</em&gt; Поколения и расширение человеческой CD40-активированных В-клеток (CD40-B) из мононуклеарных клеток периферической крови (МКПК) путем стимуляции CD40 лиганд и интерлейкина-4.</p>

Поколение прав CD40 активированных В-клеток

CD40-activated B cells (CD40-B cells) have been identified as an alternative source of immuno-stimulatory antigen-presenting cells (APC) for cancer ...

Research

JoVE Journal

Biology

Generation of Human CD40-activated B cells

Chromosomal Spread Preparation of Human Embryonic Stem Cells for Karyotyping

Chromosomal Spread Preparation of Human Embryonic Stem Cells for Karyotyping (Video) | JoVE

Хромосомные Подготовка распространения человеческих эмбриональных стволовых клеток для Кариотипирование

Although human embryonic stem cells (hESC) have been shown to present a stable diploid karyotype 1, many studies have reported that depending on culture ...

Generation of Induced Pluripotent Stem Cells by Reprogramming Human Fibroblasts with the Stemgent Human TF Lentivirus Set

Generation of Induced Pluripotent Stem Cells by Reprogramming Human Fibroblasts with the Stemgent Human TF Lentivirus Set (Video) | JoVE

Генерация индуцированные плюрипотентные стволовые клетки путем перепрограммирования человеческих фибробластов с Stemgent правам лентивирус TF Установить

In 2006, Yamanaka and colleagues first demonstrated that retrovirus-mediated delivery and expression of Oct4, Sox2, c-Myc and Klf4 is capable of inducing ...

Robust Generation of Hepatocyte-like Cells from Human Embryonic Stem Cell Populations

Robust Generation of Hepatocyte-like Cells from Human Embryonic Stem Cell Populations (Video) | JoVE

Прочная Генерация гепатоцитов-подобных клеток из человеческих эмбриональных стволовых клеток населения

Despite progress in modelling human drug toxicity, many compounds fail during clinical trials due to unpredicted side effects. The cost of clinical ...

Phenotypic and Functional Characterization of Endothelial Colony Forming Cells Derived from Human Umbilical Cord Blood

Phenotypic and Functional Characterization of Endothelial Colony Forming Cells Derived from Human Umbilical Cord Blood (Video) | JoVE

Фенотипическая и функциональная характеристика эндотелиальных колониеобразующих клеток, полученных из человеческой пуповинной крови

Longstanding views of new blood vessel formation via angiogenesis, vasculogenesis, and arteriogenesis have been recently reviewed1. The presence of ...

Rapid and Efficient Generation of Neurons from Human Pluripotent Stem Cells in a Multititre Plate Format

Rapid and Efficient Generation of Neurons from Human Pluripotent Stem Cells in a Multititre Plate Format (Video) | JoVE

Быстрая и эффективная генерация нейронов из стволовых клеток человека плюрипотентных в Multititre Формат плиты

Existing protocols for the generation of neurons from human pluripotent stem cells (hPSCs) are often tedious in that they are  multistep procedures ...

Generation of Dispersed Presomitic Mesoderm Cell Cultures for Imaging of the Zebrafish Segmentation Clock in Single Cells

Generation of Dispersed Presomitic Mesoderm Cell Cultures for Imaging of the Zebrafish Segmentation Clock in Single Cells (Video) | JoVE

Генерация распределенные пресомитной мезодермы клеточных культур для работы с изображениями данио рерио Сегментация часы в одиночных камерах

Segmentation is a  periodic and sequential morphogenetic process in vertebrates. This rhythmic  formation of blocks of tissue called somites along the ...

Generation of Human Cardiomyocytes: A Differentiation Protocol from Feeder-free Human Induced Pluripotent Stem Cells

Generation of Human Cardiomyocytes: A Differentiation Protocol from Feeder-free Human Induced Pluripotent Stem Cells (Video) | JoVE

Поколению прав кардиомиоцитов: Дифференциация Протокол от Ф-свободной человеческой индуцированных плюрипотентных стволовых клеток

In order to investigate the events driving heart development and to determine the molecular mechanisms leading to myocardial diseases in humans, it is ...

Efficient Generation Human Induced Pluripotent Stem Cells from Human Somatic Cells with Sendai-virus

Efficient Generation Human Induced Pluripotent Stem Cells from Human Somatic Cells with Sendai-virus (Video) | JoVE

Эффективная генерация человека индуцированных плюрипотентных стволовых клеток из человеческих соматических клеток с Сендай-вируса

A few years ago, the establishment of human induced pluripotent stem cells (iPSCs) ushered in a new era in biomedicine. Potential uses of human iPSCs ...

Generation and Culture of Blood Outgrowth Endothelial Cells from Human Peripheral Blood

Generation and Culture of Blood Outgrowth Endothelial Cells from Human Peripheral Blood (Video) | JoVE

Поколение и культура крови вырост эндотелиальных клеток из периферической крови человека

Historically, the limited availability of primary endothelial cells from patients with vascular disorders has hindered the study of the molecular ...

High-throughput CRISPR Vector Construction and Characterization of DNA Modifications by Generation of Tomato Hairy Roots

High-throughput CRISPR Vector Construction and Characterization of DNA Modifications by Generation of Tomato Hairy Roots (Video) | JoVE

Высокая пропускная способность CRISPR Конструирование вектора и характеристика ДНК Модификации генерацией Томатный волосистых корней

Targeted DNA mutations generated by vectors with clustered regularly interspaced short palindromic repeats (CRISPR)/Cas9 technology have proven useful for ...