Name: tracking dynamics of muscle engraftment in small animals by in vivo fluorescent imaging
Uploaded: 2009-09-21T15:00:00
Duration: 8 min 15 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Tracking Dynamics of Muscle Engraftment in Small Animals by In Vivo Fluorescent Imaging at JoVE.com

Z Y Yang ve Wang çalışmaları NIAMS / NIH hibe K02 AR051181 Müsküler Distrofi Derneği ve Harvard Kök Hücre Enstitüsü Y Wang için hibe ile mümkün olmuştur. , Q Zeng ve X Xu iş Brigham ve Kadın Hastanesi Optik Görüntüleme Laboratuvarı verilen bir program hibe ile desteklenmektedir. Yazarlar hücre çalışmalarına teknik yardım için Anestezi Anabilim Dalı, BWH Wen Liu teşekkür etmek istiyorum.

Hücre hazırlık <ol><li> Uydu hücre izolasyonu <ol style="list-style-type:lower-alpha;"><li> Anestezi altında, GFP transgenik fareler (C57BL / Ka-βactin-EGFP) bacak kasları kaldırılır. Küçük parçalar halinde kestikten sonra, uydu hücreler 37 1 saat süreyle% 2 dispase kollajenaz çözümü ile kıyılmış doku kuluçka ° C enzimatik ayrışmış </li><li> Ham F-10 ve% 20 FBS içeren büyüme medya ile enzim sindirimi nötralize Pasteur pipeti ile tekrar triturating kas ayrıştırmaları. Hücreleri hücre süzgecinden geçirilerek süzülür (Ø70-100μm) ve ardından 37 az 1 saat kaplı olmayan bir yemek ° C kaplama </li><li> Kollajen kaplı bir çanak süpernatant ve plaka onları hafifçe kaldırın. Matür arındırmak için bu adımı daha sonra 1 saat tekrarlayın. (Ön plaka) </li><li> Zaman içinde medya ve plaka hücrelerin değiştirin. Son saflaştırılmış matür orta Ham F-10,% 20 FBS, 100 U / ml penisilin ve 37 ° C,% 5 CO2,% 95 hava az 100 mcg / ml streptomisin (besi) içeren kültür. </li></ol> </li><li> Kültür ve 10 ng / ml temel FGF ilavesi ile büyüme ortamında birincil matür genişletmek. </li><li> In vivo deneyler için, TA kas başına 5x10 5 hücre enjekte edilir. </li><li> Matür hasat,% 0.25 &#39;lik tripsin / EDTA kullanarak hücreleri ayırmak ve iki kez PBS ile yıkayın. Hücre sayıları bir hemasitometre sayılır ve hücreleri 5x10 4 hücre / ml &#39;lik bir konsantrasyon HBSS yeniden bekletildi. HBSS içinde buz üzerinde konsantre hücreleri yerleştirilir ve toplandıktan sonra 1 saat içinde enjekte edilir. </li></ol> Vivo Görüntüleme <ol><li> 4-6 haftalık yaşta Erkek mdx farelerin Jackson laboratuvarı satın alınan ve bir hayvan barınağı tesiste muhafaza edilir. </li><li> Çevre konaklama yaklaşık bir hafta sonra, farelerin kültür hücreleri ile implante olmaya hazır. </li><li> Hücre nakli öncesinde, fare karışımı Ketamin (100 mg / kg) ve Xylazine (10 mg / kg) intraperitoneal (ip) enjeksiyonu ile anestezi. Sonra TA kas alanı çevresinde saç bacak için Nair ve distile su ile silerek temizleyin uygulayarak 30 saniye bekliyor kaldırılır. </li><li> Fare anestezi altında iken, 5x10 5 hücre 10μl HBSS 30 gauge iğne kullanılarak 3 puan yavaş yavaş her TA kas içine enjekte edilir . </li><li> 4. adımı sonra, fare, in vivo floresan görüntüleme tarafından düzenli olarak görüntülü olabilir . Yüksek duyarlı şarj çiftli kamera ile donatılmış floresan görüntüleme istasyonu Nightowl LB981 (Berthold Technologies, Inc.), Farelerin engel bacak görüntüler elde etmek için kullanılır. </li><li> In vivo görüntüleme gününde, ilk olarak saç regrowth TA kas kontrol edin. Gerekirse, biz fareyi Ketamin ve Xylazine karışımı ile anestezi sonrası, yukarıda açıklandığı gibi saç kaldırmak için Nair yeniden uygulayın. </li><li> Fare anestezi altında iken, fare siyah floresan olmayan kağıt (Strathmore siyah Artagain kağıt) bir parçası üzerinde yüzükoyun pozisyonda yerleştirin. TA kas daha iyi görüntüleme için tam göstermek için, kağıt arka pençeleri bantlayın. </li><li> Biz görüntüleme odası ve konumu, kameranın görüş alanının merkezinde görüntülü arka bacak fare yer. Biz ilk 5 saniyelik bir pozlama süresi ile bacak geleneksel bir gri-ölçekli fotoğraf görüntü almak için emisyon filtresi anahtarı. Fare ve gerekirse kameranın odak konumunu yeniden ayarlayınız. Pozlama süresi (1250 ms), örnek yüksekliği (0.9 cm) vb de dahil olmak üzere görüntüleme parametreleri deneysel süreç içinde sabit tutulur. </li><li> Daha sonra yeşil flüoresan protein dalga boyu için uygun emisyon filtresi anahtarı. Biz 1.250 ms ve 1 binning maruz kalma süresi ile floresan görüntü alır. Görüntüleme sonra, fare toparlanma beklemek için bir kafes görüntüleme odasından çıkarılır. </li><li> Analizi için, saniyede fotonların açısından yoğunluğunu ölçmek için floresan sinyalleri üzerinde bir ilgi bölgesi (ROI) çizin. Biz de başka bir ölçüm değeri olarak piksel sayısı açısından yatırım getirisini ölçmek. Görüntüleme deneyler, boylamsal veri elde etmek için, gerekirse bir kaç ay içinde her hafta daha sık tekrarlanan ya da olabilir. </li></ol> Deney sonunda, fare ötenazi ve TA kas histolojisi analizi için hasat edilir.

<ol>
	<li>Ballou, B., Ernst, L. A., Waggoner, A. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fluorescence+imaging+of+tumors+in+vivo.">Fluorescence imaging of tumors in vivo.</a> Curr Med Chem. 12, 795-805 (2005).</li><li>Green, . <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=fluorescent+protein+as+a+marker+for+gene+expression.">fluorescent protein as a marker for gene expression.</a> Science. 263, 802-805 (1994).</li><li>Godavarty, A., Sevick-Muraca, E. M., Eppstein, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Three-dimensional+fluorescence+lifetime+tomography.">Three-dimensional fluorescence lifetime tomography.</a> Med Phys. 32, 992-1000 (2005).</li><li>Graves, E. E., Weissleder, R., Ntziachristos, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fluorescence+molecular+imaging+of+small+animal+tumor+models.">Fluorescence molecular imaging of small animal tumor models.</a> Curr Mol Med. 4, 419-430 (2004).</li><li>Graves, E. E., Yessayan, D., Turner, G., Weissleder, R., Ntziachristos, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Validation+of+in+vivo+fluorochrome+concentrations+measured+using+fluorescence+molecular+tomography.">Validation of in vivo fluorochrome concentrations measured using fluorescence molecular tomography.</a> J Biomed Opt. 10, 44019-44 (2005).</li><li>Gurfinkel, M., Ke, S., Wen, X., Li, C., Sevick-Muraca, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Near-infrared+fluorescence+optical+imaging+and+tomography.+Dis+Markers.">Near-infrared fluorescence optical imaging and tomography. Dis Markers.</a> , 107-121 .</li><li>Lee, J., Sevick-Muraca, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Three-dimensional+fluorescence+enhanced+optical+tomography+using+referenced+frequency-domain+photon+migration+measurements+at+emission+and+excitation+wavelengths.">Three-dimensional fluorescence enhanced optical tomography using referenced frequency-domain photon migration measurements at emission and excitation wavelengths.</a> J Opt Soc Am A Opt Image Sci Vis. 19, 759-771 (2002).</li><li>Xu, X., Yang, Z., Liu, Q., Wang, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+fluorescence+imaging+of+muscle+regeneration+by+transplanted+eGFP-labeled+myoblasts.">In vivo fluorescence imaging of muscle regeneration by transplanted eGFP-labeled myoblasts.</a> , (1985).</li><li>Hoffman, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+cell+biology+of+cancer+cells+visualized+with+fluorescent+proteins.">In vivo cell biology of cancer cells visualized with fluorescent proteins.</a> Curr Top Dev Biol. 70, 121-144 (2005).</li><li>Coulton, G. R., Morgan, J. E., Partridge, T. A., Sloper, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+mdx+mouse+skeletal+muscle+myopathy:+I.+A+histological,+morphometric+and+biochemical+investigation.">The mdx mouse skeletal muscle myopathy: I. A histological, morphometric and biochemical investigation.</a> Neuropathol Appl Neurobiol. 14, 53-70 (1988).</li><li>Morgan, J. E., Partridge, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Muscle+satellite+cells.">Muscle satellite cells.</a> Int J Biochem Cell Biol. 35, 1151-116 (2003).</li><li>Mendell, J. R., Kissel, J. T., Amato, A. A., King, W., Signore, L., Prior, T. W., Sahenk, Z., Benson, S., McAndrew, P. E., Rice, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Myoblast+transfer+in+the+treatment+of+Duchenne's+muscular+dystrophy.">Myoblast transfer in the treatment of Duchenne's muscular dystrophy.</a> N Engl J Med. 333, 832-838 (1995).</li><li>Bogdanovich, S., Perkins, K. J., Krag, T. O., Khurana, T. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Therapeutics+for+Duchenne+muscular+dystrophy:+current+approaches+and+future+directions.">Therapeutics for Duchenne muscular dystrophy: current approaches and future directions.</a> J Mol Med. 82, 102-115 (2004).</li><li>Morgan, J. E., Coulton, G. R., Partridge, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mdx+muscle+grafts+retain+the+mdx+phenotype+in+normal+hosts.">Mdx muscle grafts retain the mdx phenotype in normal hosts.</a> Muscle Nerve. 12, 401-409 (1989).</li><li>Sherwood, R. I., Christensen, J. L., Weissman, I. L., Wagers, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Determinants+of+skeletal+muscle+contributions+from+circulating+cells,+bone+marrow+cells,+and+hematopoietic+stem+cells.">Determinants of skeletal muscle contributions from circulating cells, bone marrow cells, and hematopoietic stem cells.</a> Stem Cells. 22, 1292-1304 (2004).</li><li>Cerletti, M., Jurga, S., Witczak, C. A., Hirshman, M. F., Shadrach, J. L., Goodyear, L. J., Wagers, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Highly+efficient,+functional+engraftment+of+skeletal+muscle+stem+cells+in+dystrophic+muscles.">Highly efficient, functional engraftment of skeletal muscle stem cells in dystrophic muscles.</a> Cell. 134, 37-47 (2008).</li></ol>

Biz bu çalışmada ana iskelet kası floresan etiketli nakledilen hücrelerin izlemek için güvenilir ve istikrarlı bir görüntüleme platformu kurdu. GFP transgenik fare GFP etiketli matür yetişkin kök hücreler gelecekte hücre tedavisi için aday olacak bir tür için duruyor. Hücre sayısı, hücre enjeksiyonu, açık arka plan, görüntüleme konumunu ve makine parametresi de dahil olmak üzere sürekli bir manipülasyon, yüksek kalitede görüntü elde ve özellikle kantitatif analiz için önemlidir. Floresans görüntüleme non-invaziv, kolay olduğu gibi biyomedikal araştırmalarda birçok uygulamalar vardır ve yüksek kapasiteli. Buna ek olarak floresan görüntüleme, saçılma, zayıflama ve emilimi sayesinde de olsa, foton sayımı, dayanan kantitatif bir ölçüm sağlayabilir, ışık, doku büyük bir mesafe, bir teknik eksiklik nüfuz edemez. Kırmızı ya da yakın-kızılötesi ışık penetrasyon derinliğini artırmak için muhabir kullanmak için çalışmalar devam etmekte. Floresan görüntüleme diğer bir avantajı, insan kullanımı için özel floresan muhabiri onaylanmıştır eğer klinikler çevrilebilir. Pahalı donanım ve görüntüleme ajanları gerektirmez, MR, CT, ve PET ile karşılaştırıldığında, floresan görüntüleme yüksek esnekliğe sahiptir. Bir örnek kliniklerde kullanılan floresan tabanlı endoskop ve mikro-endoskop. Floresan görüntüleme yöntemleri ile birleştirerek, biz altta yatan biyolojik süreçler ile ilgili anatomik ve fonksiyonel bilgi elde etme yeteneği elde etmek için bekliyoruz.

<!DOCTYPE html PUBLIC "-//W3C//DTD XHTML 1.0 Transitional//EN" "http://www.w3.org/TR/xhtml1/DTD/xhtml1-transitional.dtd">
<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>NightOwl LB981</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Berthold Technologies</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>

tracking dynamics of muscle engraftment in small animals by in vivo fluorescent imaging

Musküler distrofiler kontraktil kas hücrelerinin progresif kaybı ile karakterize dejeneratif kas hastalıklarının bir grup. Şu anda herhangi bir iyileştirici bir tedavi yoktur. Kök hücre biyolojisi son gelişmeler bu hastalıkları tedavi etmek için etkili bir hücre bazlı tedavilerin geliştirilmesi için yeni umutlar yarattı. Distrofik hayvan modelleri kas içine floresan proteinleri ile etiketlenmiş kök hücrelerin çeşitli türleri Nakli alanında geniş anlamda kullanılmıştır. Nakledilen hücre kaderi takip etmek yeteneğine sahip bir non-invaziv bir tekniktir boyuna, daha doğru ve verimli bir şekilde nakledilen hücrelerin kas engraftman değerlendirmek için yetenek daha. Bu çalışmada, in vivo floresan görüntüleme nakledilen GFP (Yeşil Floresan Protein) etiketli fare iskelet kaslarında hücre izlemek için duyarlı ve güvenilir bir yöntem olduğunu göstermektedir. Floresan protein uyarma için gerekli harici bir ışık kullanımı nedeniyle geçmişi hakkında endişe rağmen, çıplak ya da fareyi kullanarak ya da epilasyon reaktifler saç ortadan kaldırarak çok bu sorunun ortadan olduğu bulundu. CCD kamera kullanarak, floresan sinyal GFP transgenik fareler veya eGFP transduced myoblast kültür ya da 5 x 10 5 hücre enjeksiyonu sonra tibialis anterior kas (TA) tespit edilebilir. Ekstansör digitorum longus (EDL), daha az hücre enjeksiyonu gibi daha yüzeysel kasları için saptanabilir bir sinyal üretir. Sinyal yoğunluğu ölçülür ve ilgi (ROI) bir bölgede saniyede fotonların sayısı olarak sayılabilir olabilir. Edinilen görüntüleri engrafted alan net sınırlarının çizilmesi, ROI boyutu olarak ölçülebilir. Bacaklarda sürekli her zaman konumda iseniz, kas ve ROI boyutu başına saniyede fotonların toplam sayısı değişiklikler engrafted hücrelerinin sayısında değişiklikler ve engrafted alanının boyutunu yansıtmaktadır. Bu nedenle zaman içinde aynı kas değişiklikleri ölçülebilir. In vivo floresan görüntüleme tekniği tumorogenic hücrelerinin büyümesini izlemek için öncelikle kullanılan olmuştur, bizim çalışmamızda, nakledilen kök hücrelerin kaderi takip etmek için bize sağlayan güçlü bir araç olduğunu göstermektedir.

Watch this Scientific Journal Video about Tracking Dynamics of Muscle Engraftment in Small Animals by In Vivo Fluorescent Imaging at JoVE.com

Tracking Dynamics of Muscle Engraftment in Small Animals by In Vivo Fluorescent Imaging

Biz bir tarif<em&gt; In vivo</em&gt; Floresan görüntüleme protokolü, hem sağlıklı ve distrofik farelerin iskelet kas içine transplantasyonu sonrası GFP-etiketli matür kas yenilenme izlemek. Bu protokol, diğer tip hücre nakli ve diğer kaslı koşulların yanı sıra kas yenilenme çalışma adapte edilebilir.

Küçük Hayvan Kas Aşı dinamiği ile Takip In Vivo Floresan Görüntüleme

Muscular dystrophies are a group of degenerative muscle diseases characterized by progressive loss of contractile muscle cells. Currently, there is no ...

Research

JoVE Journal

Biology

Tracking Dynamics of Muscle Engraftment in Small Animals by In Vivo Fluorescent Imaging

In vivo Micro-circulation Measurement in Skeletal Muscle by Intra-vital Microscopy

İskelet kas-içi hayati Mikroskopi in vivo Mikro sirkülasyon Ölçümü

BACKGROUND: Regulatory factors and detailed physiology of in vivo microcirculation have remained not fully clarified after many different modalities of ...

Labeling hESCs and hMSCs with Iron Oxide Nanoparticles for Non-Invasive in vivo Tracking with MR Imaging

Demir Oksit hESC ve hMSCs Etiketleme MR Görüntüleme in vivo Takip Non-Invasive Nanopartiküller

In recent years, stem cell research has led to a better understanding of developmental biology, various diseases and its potential impact on regenerative ...

Live Cell Imaging of F-actin Dynamics via Fluorescent Speckle Microscopy (FSM)

Live Cell Imaging of F-actin Dynamics via Fluorescent Speckle Microscopy FSM

Floresan üzerinden F-aktin Dynamics Canlı Hücre Görüntüleme speckle Mikroskopi (FSM)

In this protocol we describe the use of Fluorescent Speckle Microscopy (FSM) to capture high-resolution images of actin dynamics in PtK1 cells. A unique ...

Evaluation of Muscle Function of the Extensor Digitorum Longus Muscle Ex vivo and Tibialis Anterior Muscle In situ in Mice

Evaluation of Muscle Function of the Extensor Digitorum Longus Muscle Ex vivo and Tibialis Anterior Muscle In situ in Mice

Ekstansör digitorum longus kas ve kas Fonksiyonunun Değerlendirilmesi<em&gt; Ex vivo</em&gt; Ve tibialis anterior kas<em&gt; Yerinde</em&gt; Farelerde

Body  movements are mainly provided by mechanical function of skeletal muscle. Skeletal  muscle is composed of numerous bundles of myofibers that are ...

In vivo Clonal Tracking of Hematopoietic Stem and Progenitor Cells Marked by Five Fluorescent Proteins using Confocal and Multiphoton Microscopy

In vivo Clonal Tracking of Hematopoietic Stem and Progenitor Cells Marked by Five Fluorescent Proteins using Confocal and Multiphoton Microscopy

Eşodaklı ve multiphoton Mikroskopi kullanarak beş Floresan Proteinleri ile işaretlenmiş Hematopoetik kök hücrelerin in vivo klonal Takip

We developed and validated a fluorescent marking methodology for clonal tracking of hematopoietic stem and progenitor cells (HSPCs) with high spatial and ...

In Vivo 4-Dimensional Tracking of Hematopoietic Stem and Progenitor Cells in Adult Mouse Calvarial Bone Marrow

In Vivo 4-Dimensional Tracking of Hematopoietic Stem and Progenitor Cells in Adult Mouse Calvarial Bone Marrow

Yetişkin Fare Kalvaryal Kemik İliği içinde Hematopoietik kök hücrelerin Vivo 4-Boyutlu Takip

Through a delicate balance between quiescence and proliferation, self renewal and production of differentiated progeny, hematopoietic stem cells (HSCs) ...

High-resolution Time-lapse Imaging and Automated Analysis of Microtubule Dynamics in Living Human Umbilical Vein Endothelial Cells

Yüksek çözünürlüklü Time-lapse Görüntüleme ve Yaşayan İnsan Umbilikal Ven Endotelyal Hücrelerinde Mikrotubul Dinamiği Otomatik Analizi

The physiological process by which new vasculature forms from existing vasculature requires specific signaling events that trigger morphological changes ...

A Graphical User Interface for Software-assisted Tracking of Protein Concentration in Dynamic Cellular Protrusions

Dinamik Hücresel Protrüzyonlarda Protein Konsantrasyonunun Yazılım Destekli Takibi için Grafiksel Bir Kullanıcı Arayüzü

Filopodia are dynamic, finger-like cellular protrusions associated with migration and cell-cell communication. In order to better understand the complex ...

Real Time In Vivo Tracking of Thymocytes in the Anterior Chamber of the Eye by Laser Scanning Microscopy

Real Time In Vivo Tracking of Thymocytes in the Anterior Chamber of the Eye by Laser Scanning Microscopy

Gerçek zamanlı timositleri mikroskobu tarama lazer göz ön odasında Vivo içinde Takibi

The purpose of the method being presented is to show, for the first time, the transplant of newborn thymi into the anterior eye chamber of isogenic adult ...

Examination of Mitotic and Meiotic Fission Yeast Nuclear Dynamics by Fluorescence Live-cell Microscopy

Floresans canlı hücre mikroskobu ile mitotik ve meiotic Fission Maya nükleer dinamiklerinin incelenmesi

Live-cell imaging is a microscopy technique used to examine cell and protein dynamics in living cells. This imaging method is not toxic, generally does ...