Name: a high-throughput method for zebrafish sperm cryopreservation and <em>in vitro</em> fertilization
Uploaded: 2009-07-06T19:03:00
Duration: 11 min 1 s
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<p class="jove_content"> इस काम R01 एनआईएच HG002995 द्वारा समर्थित किया गया था &quot;Zebrafish जीनोम tilling: एक रिवर्स आनुवंशिकी दृष्टिकोण&quot; सीबीएम के लिए. </p>

<ol>
	<li>Ginsburg, A. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sperm-egg+association+and+its+relationship+to+activation+of+the+egg+in+salmonid+fishes.">Sperm-egg association and its relationship to activation of the egg in salmonid fishes.</a> <em style='font-style: italic'>J. Embryol. Exp. Morphol</em>. <b>11</b>, 13-33 (1963).</li><li>Harvey, B., Kelley, R. N., Ashwood-Smith, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cryopreservation+of+zebra+fish+spermatozoa+using+methanol.">Cryopreservation of zebra fish spermatozoa using methanol.</a> <em style='font-style: italic'>Can. J. Zoology</em>. <b>60</b>, 1867-1870 (1982).</li></ol>

<p class="jove_content"> अन्य जांचकर्ताओं की एक संख्या अब अपनी प्रयोगशालाओं में कर रहे हैं इस शुक्राणु ठंड प्रोटोकॉल का उपयोग. कुछ इसी तरह की प्रजनन और एक ही नमूना नमूना परिवर्तनशीलता है कि हम देखा है की सूचना दी है. दूसरों को कथित तौर पर इस प्रोटोकॉल को अपने हाथों में काम करने में विफल रहा है. हम मानते हैं कि समस्याओं की संभावना स्रोत हैं: </p><ol><li> विफलता सटीक cryovials या शंक्वाकार ट्यूबों हम प्रोटोकॉल में सुझाव दिया है का उपयोग करें, ठंडा जब सूखी बर्फ में एक अलग दर के लिए अग्रणी; </li><li> विफलता पाउडर सूखी बर्फ का उपयोग करने के लिए, एक ठंडा उप इष्टतम दर करने के लिए अग्रणी; </li><li> गरीब प्रजनन के साथ पुरुष मछली का प्रयोग: आप एक एकल पुरुष से शुक्राणु के कम से कम 1 μl मिलना चाहिए. तुम भी ताजा शुक्राणु के साथ इन विट्रो निषेचन में कर रही द्वारा पुरुष प्रजनन क्षमता का परीक्षण कर सकते हैं, लेकिन यह गुमराह किया जा है, क्योंकि यह बहुत कम ताजा शुक्राणु लेता 100% की उर्वरता के पास मिल कर सकते हैं. बड़े, अधिक robustly रंग पुरुषों को आमतौर पर और अधिक उच्च गुणवत्ता शुक्राणु दे. </li><li> में इन विट्रो निषेचन में उप मानक गुणवत्ता वाले अंडे का उपयोग करना. लेकिन कुछ भी सही चंगुल का उपयोग हमेशा 0% की उर्वरता के पास से भी शुक्राणु के नमूने है कि वास्तव में अच्छा प्रजनन क्षमता (डुप्लिकेट शीशी की उर्वरता के आधार पर) की ओर जाता है. </li></ol>

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<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>10 &mu;l disposable pipettes</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fisher</td>
<td>22-358697</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Watch glasses</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Pyrex</td>
<td>9985-75</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>2 ml cryogenic vials</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Corning</td>
<td>430488</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>10 x 10 cryoboxes</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Nalgene</td>
<td>03-337-7AA</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>15 ml conical tubes</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Falcon</td>
<td>352099</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Tongs</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fisher Health Care</td>
<td>10-316B</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Cryofreezer</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Taylor-Warton</td>
<td>K-series</td>
<td>For example</td>
</tr>		</tbody>
		</table>
		</div>
	

a high-throughput method for zebrafish sperm cryopreservation and <em>in vitro</em> fertilization

<p class="jove_content">इस zebrafish शुक्राणु cryopreservation के लिए एक तरीका है कि हार्वे विधि (हार्वे एट अल., 1982) का एक रूपांतर है. हम मूल प्रोटोकॉल के लिए दो बदलाव शुरू की है कि दोनों प्रक्रिया को कारगर बनाने और बढ़ाने के नमूना एकरूपता. सबसे पहले, हम सभी शुक्राणु ठंड मीडिया है कि cryoprotectant शामिल नहीं करता है का उपयोग मात्रा मानक के अनुसार. दूसरा, cryopreserved शुक्राणु केशिका ट्यूब की बजाय cryovials में संग्रहीत हैं. ठंड और विगलन (δ ° समय / सी) शुक्राणु की दर शायद दो सबसे महत्वपूर्ण चर करने के लिए इस प्रक्रिया में नियंत्रण कर रहे हैं. इस कारण से, विभिन्न ट्यूबों निर्दिष्ट उन के लिए विकल्प नहीं है. यह 2 की टीमों में कार्य करना संभव है ~ 2 घंटे में टीम के प्रति 100 पुरुषों के शुक्राणु फ्रीज. शुक्राणु cryopreserved इस प्रोटोकॉल का उपयोग कर 25% की प्रजनन क्षमता का एक औसत है (इन विट्रो निषेचन में एक निषेचित अंडे की कुल संख्या से विभाजित में उत्पन्न व्यवहार्य भ्रूण की संख्या के रूप में मापा) और इस प्रतिशत प्रजनन क्षमता कई वर्षों से स्थिर है.</p>

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A High-Throughput Method For Zebrafish Sperm Cryopreservation and In Vitro Fertilization

<p class="jove_content">इस zebrafish उच्च throughput के लिए एक शुक्राणु cryopreservation प्रोटोकॉल है. शुक्राणु cryopreserved इस प्रोटोकॉल का उपयोग कर बाद में इन विट्रो निषेचन में 25% की प्रजनन क्षमता का एक औसत है और कई वर्षों से स्थिर है.</p>

Zebrafish शुक्राणु cryopreservation के लिए एक उच्च throughput और विधि<em> इन विट्रो में</em> निषेचन

This is a method for zebrafish sperm cryopreservation that is an adaptation of the Harvey method (Harvey et al., 1982).  We have introduced two changes to ...

Research

JoVE Journal

Biology

A High-Throughput Method For Zebrafish Sperm Cryopreservation and <em>In Vitro</em> Fertilization

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आइस कैप: बढ़ते के लिए एक विधि<em> Arabidopsis</em> और उच्च throughput जीनोटाइपिंग के लिए 96 अच्छी तरह से प्लेट्स में टमाटर संयंत्रों

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अगुणित Zebrafish भ्रूण के उत्पादन से<em&gt; इन विट्रो</em&gt; निषेचन

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