Name: a high-throughput method for zebrafish sperm cryopreservation and <em>in vitro</em> fertilization
Uploaded: 2009-07-06T19:03:00
Duration: 11 min 1 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about A High-Throughput Method For Zebrafish Sperm Cryopreservation and In Vitro Fertilization at JoVE.com

<p class="jove_content"> Эта работа была поддержана NIH R01 HG002995 &quot;Тиллинг данио рерио Геном: Обратный подход Генетика&quot; в МД. </p>

<ol>
	<li>Ginsburg, A. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sperm-egg+association+and+its+relationship+to+activation+of+the+egg+in+salmonid+fishes.">Sperm-egg association and its relationship to activation of the egg in salmonid fishes.</a> <em style='font-style: italic'>J. Embryol. Exp. Morphol</em>. <b>11</b>, 13-33 (1963).</li><li>Harvey, B., Kelley, R. N., Ashwood-Smith, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cryopreservation+of+zebra+fish+spermatozoa+using+methanol.">Cryopreservation of zebra fish spermatozoa using methanol.</a> <em style='font-style: italic'>Can. J. Zoology</em>. <b>60</b>, 1867-1870 (1982).</li></ol>

<p class="jove_content"> Ряд других исследователей в настоящее время используют этот протокол замораживания спермы в своих лабораториях. Некоторые из них сообщали о подобных плодородия и того же образца к образцу изменчивости, которые мы наблюдали. Другие, как сообщается, не в состоянии сделать этого протокола работы в их руках. Мы считаем, что вероятными источниками проблем являются: </p><ol><li> Отказ от использования точной криопробирки или конических труб мы предложили в протоколе, что приводит к различной скорости охлаждения, когда в сухой лед; </li><li> Отказ от использования порошкового сухого льда, что приводит к неоптимальной скорости охлаждения; </li><li> Использование самец с плохой рождаемости: вы должны получить не менее 1 мкл спермы от одного мужчины. Вы также можете проверить мужскую фертильность, делая искусственное оплодотворение свежей спермы, однако это может ввести в заблуждение, потому что она занимает очень мало свежей спермы, чтобы получить около 100% плодородия. Большие, более надежно цветные мужчины обычно дают более высокое качество спермы. </li><li> Использование нестандартных яйца качества экстракорпоральное оплодотворение. Использование ничего, но совершенная муфты всегда приводит к около 0% рождаемости, даже с образцами спермы, которые фактически имеют хорошую рождаемости (на основе плодородия дублировать флакон). </li></ol>

<!DOCTYPE html PUBLIC "-//W3C//DTD XHTML 1.0 Transitional//EN" "http://www.w3.org/TR/xhtml1/DTD/xhtml1-transitional.dtd">
<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>10 &mu;l disposable pipettes</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fisher</td>
<td>22-358697</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Watch glasses</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Pyrex</td>
<td>9985-75</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>2 ml cryogenic vials</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Corning</td>
<td>430488</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>10 x 10 cryoboxes</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Nalgene</td>
<td>03-337-7AA</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>15 ml conical tubes</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Falcon</td>
<td>352099</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Tongs</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fisher Health Care</td>
<td>10-316B</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Cryofreezer</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Taylor-Warton</td>
<td>K-series</td>
<td>For example</td>
</tr>		</tbody>
		</table>
		</div>
	

a high-throughput method for zebrafish sperm cryopreservation and <em>in vitro</em> fertilization

<p class="jove_content">Это метод для криоконсервации спермы данио рерио, что является адаптацией метода Харви (Harvey и соавт., 1982). Мы ввели два изменения в первоначальный протокол, как упростить процедуру увеличения и однородность выборки. Во-первых, мы нормализовать все спермы тома с использованием замораживания средств массовой информации, не содержащей криопротекторов. Во-вторых, криоконсервированных спермы хранятся в криопробирки вместо капилляров. Темпы спермы замораживания и оттаивания (δ ° C / время), вероятно, два наиболее важных переменных для управления в этой процедуре. По этой причине, не заменяют различные трубы для указанных. Работа в группах из 2 можно заморозить сперму 100 мужчин за команду в ~ 2 часа. Сперма криоконсервированных использовании этого протокола в среднем на 25% рождаемости (измеряется как количество жизнеспособных эмбрионов генерируется в экстракорпорального оплодотворения, деленное на общее количество яиц, оплодотворенных) и этот процент рождаемости остается стабильной на протяжении многих лет.</p>

Watch this Scientific Journal Video about A High-Throughput Method For Zebrafish Sperm Cryopreservation and In Vitro Fertilization at JoVE.com

A High-Throughput Method For Zebrafish Sperm Cryopreservation and In Vitro Fertilization

<p class="jove_content">Это высокой пропускной способностью спермы криоконсервация протокол для рыбок данио. Сперма криоконсервированных использовании этого протокола в среднем на 25% рождаемости в последующие экстракорпорального оплодотворения и остается стабильной на протяжении многих лет.</p>

Высокая пропускная метод для криоконсервации спермы и данио рерио<em> In Vitro</em> Оплодотворение

This is a method for zebrafish sperm cryopreservation that is an adaptation of the Harvey method (Harvey et al., 1982).  We have introduced two changes to ...

Research

JoVE Journal

Biology

A High-Throughput Method For Zebrafish Sperm Cryopreservation and <em>In Vitro</em> Fertilization

A high-throughput method to globally study the organelle morphology in S. cerevisiae

Высокой пропускной метод глобально исследования морфологии органелл в CEREVISIAE С.

High-throughput methods to examine protein localization or organelle morphology is an effective tool for studying protein interactions and can help ...

A Rapid High-throughput Method for Mapping Ribonucleoproteins (RNPs) on Human pre-mRNA

A Rapid High-throughput Method for Mapping Ribonucleoproteins RNPs on Human pre-mRNA

Быстрое высокой пропускной метод картирования рибонуклеопротеиды (мяРНП) по правам пре-мРНК

Sequencing RNAs that co-immunoprecipitate (co-IP) with RNA binding proteins has increased our understanding of splicing by demonstrating that binding ...

Isolation and <em>In vitro</em> Activation of <em>Caenorhabditis elegans</em> Sperm

Isolation and In vitro Activation of Caenorhabditis elegans Sperm

Выделение и<em> В пробирке</em> Активация<em> Caenorhabditis Элеганс</em> Сперма

Males and hermaphrodites are the two naturally found sexual forms in the nematode C. elegans. The amoeboid sperm are produced by both males and ...

Ice-Cap: A Method for Growing <em>Arabidopsis</em> and Tomato Plants in 96-well Plates for High-Throughput Genotyping

Ice-Cap: A Method for Growing Arabidopsis and Tomato Plants in 96-well Plates for High-Throughput Genotyping

Ice-Кап: метод выращивания<em> Arabidopsis</em> И томатов в 96-луночных планшетах для высокопроизводительного генотипирования

It is becoming common for plant scientists to develop projects that require the genotyping of large numbers of plants. The first step in any genotyping ...

High-throughput Crystallization of Membrane Proteins Using the Lipidic Bicelle Method

Высокая пропускная способность кристаллизации мембранных белков, используя метод липидный Bicelle

Membrane proteins (MPs) play a critical role in many physiological processes such as pumping specific molecules across the otherwise impermeable membrane ...

Mouse Sperm Cryopreservation and Recovery using the I&middot;Cryo Kit

Mouse Sperm Cryopreservation and Recovery using the IÃƒâ€šÃ‚Â·Cryo Kit

Мышь Криоконсервация спермы и восстановление использованием I · Cryo Kit

Thousands of new genetically modified (GM) strains of mice have been created since the advent of transgenesis and knockout technologies.  Many of these ...

A High-throughput Method for Measurement of Glomerular Filtration Rate in Conscious Mice

Высокая пропускная метод измерения скорости клубочковой фильтрации в сознании Мыши

The measurement of  glomerular filtration rate (GFR) is the gold standard in kidney function  assessment. Currently, investigators determine GFR by ...

Production of Haploid Zebrafish Embryos by <em>In Vitro</em> Fertilization

Production of Haploid Zebrafish Embryos by In Vitro Fertilization

Производство гаплоидных эмбрионов данио по<em&gt; Экстракорпоральное</em&gt; Оплодотворение

The zebrafish has become a mainstream vertebrate model that is relevant for many disciplines of scientific study. Zebrafish are especially well suited for ...

A Manual Small Molecule Screen Approaching High-throughput Using Zebrafish Embryos

Руководство маленькая молекула экрана Подойдя высокой пропускной Использование эмбрионов данио

Zebrafish have become a widely used model organism to investigate the mechanisms that underlie developmental biology and to study human disease pathology ...

Recovery of Adult Zebrafish Hearts for High-throughput Applications

Восстановление взрослых данио сердца для высокой пропускной приложений

Use of the zebrafish model system for studying development, regeneration, and disease is expanding toward use of adult hearts for cell dissociation and ...

Высокая пропускная метод для криоконсервации спермы и данио рерио In Vitro Оплодотворение