Name: making gynogenetic diploid zebrafish by early pressure
Uploaded: 2009-06-30T00:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Making Gynogenetic Diploid Zebrafish by Early Pressure at JoVE.com

שיטות הפריה חוץ גופית ו diploids gynogenetic פותחו על ידי דג הזברה Charline ווקר במעבדה של ג&#39;ורג&#39; Streisinger באוניברסיטת אורגון ב -1970 ו -1980. השיטה המתוארת כאן היא ללא שינוי לעומת פרוטוקולים של Charline אשר זמינים במלואם בספר דג הזברה 3. שיטות הפריה חוץ גופית ו diploids gynogenetic פותחו על ידי דג הזברה Charline ווקר במעבדה של ג&#39;ורג&#39; Streisinger באוניברסיטת אורגון ב -1970 ו -1980. השיטה המתוארת כאן היא ללא שינוי לעומת פרוטוקולים של Charline אשר זמינים במלואם בספר דג הזברה 3.

סקירה כללית של לחץ מוקדם הערה: מתכונים רבים של חומרים כימיים המשמשים פרוטוקול זה כמו tricaine מים, דגים מלוחים הנקס זמינים באופן מקוון בפרק 10 של הספר דג הזברה 3 ( <a href="http://zfin.org/zf_info/zfbook/zfbk.html">http://zfin.org/zf_info/zfbook/zfbk.html</a> ) <ol style=";text-align...

<ol>
	<li>Streisinger, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Segregation+analyses+and+gene-centromere+distances+in+zebrafish.">Segregation analyses and gene-centromere distances in zebrafish.</a> Genetics. 112 (2), 311-311 (1986).</li><li>Streisinger, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Production+of+clones+of+homozygous+diploid+zebra+fish+(Brachydanio+rerio).">Production of clones of homozygous diploid zebra fish (Brachydanio rerio).</a> Nature. 291 (5813), 293-293 (1981).</li><li>Westerfield, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> The Zebrafish Book: A guide for the laboratory use of zebrafish (Danio rerio). , (2000).</li><li>Johnson, S. L., Africa, D., Horne, S., Postlethwait, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Half-tetrad+analysis+in+zebrafish:+mapping+the+ros+mutation+and+the+centromere+of+linkage+group+I.">Half-tetrad analysis in zebrafish: mapping the ros mutation and the centromere of linkage group I.</a> Genetics. 139 (4), 1727-1727 (1995).</li><li>Beattie, C. E., Raible, D. W., Henion, P. D., Eisen, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Early+pressure+screens.">Early pressure screens.</a> Methods Cell Biol. 237 (71), 2575-25 (1999).</li><li>Johnson, S. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Centromere-linkage+analysis+and+consolidation+of+the+zebrafish+genetic+map.">Centromere-linkage analysis and consolidation of the zebrafish genetic map.</a> Genetics. 142 (4), 1277-1277 (1996).</li><li>Trede, N. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Zebrafish+mutants+with+disrupted+early+T-cell+and+thymus+development+identified+in+early+pressure+screen.">Zebrafish mutants with disrupted early T-cell and thymus development identified in early pressure screen.</a> Dev Dyn. 237 (9), 2575-2575 (1999).</li></ol>

חשוב לוודא כי עוברי המיוצר על ידי שיטה זו diploids gynogenetic נכון. כמו שולטת, ליצור מקבץ הביצים דיפלואידי נורמלי (על ידי שמירה על הצידה כמה זרע ללא איון-UV) ואת המצמד של עוברים הפלואידים (על ידי שמירה בצד מקבץ של ביציות מופרות עם זרע UV מבלי לעבור דרך ההליך EP). ב 1 הודעה יום עוברים ?...

<!DOCTYPE html PUBLIC "-//W3C//DTD XHTML 1.0 Transitional//EN" "http://www.w3.org/TR/xhtml1/DTD/xhtml1-transitional.dtd">
<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>Tricaine</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Watch glass</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>French Press</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Pressure cylinder</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Instant ocean</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Pasteur pipettes</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Cut off the narrow end, fire polish</td>
</tr>
<tr>
<td>UV cross-linker</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>microcapillaries</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>

making gynogenetic diploid zebrafish by early pressure

Heterozygosity אאוקריוטים דיפלואידי לעתים קרובות גורם מחקרים גנטיים מסורבלת. שיטות המייצרים דיפלואידי קיימא צאצאים הומוזיגוטים ישירות מן הנקבות הטרוזיגוטיים לאפשר לנשים mutagenized F1 כדי להיות מוקרן ישירות למסך גנטי קדימה מואצת מוטציות מזיקות. Streisinger et al.<sup&gt; 1,2</sup&gt; תיאר שיטות להכנת gynogenetic (הומוזיגוטים) דג הזברה דיפלואידי ידי הפעלת ביצי דג הזברה עם זרע אור אולטרה סגול מומת ומניעת גם את meiotic השני או הדיוויזיה הראשונה תא zygotic באמצעות טיפולים פיזיים (חום או לחץ) כי microtubules deploymerize. &quot;הלחץ מוקדם&quot; (EP) בלוקים השיטה השנייה המיוזה, אשר מתרחשת זמן קצר לאחר ההפריה. השיטה EP מייצרת אחוז גבוה של עוברים קיימא שיכול להתפתח למבוגרים פורה משני המינים. השיטה יוצרת בעוברים שהם הומוזיגוטים בכל לוקוסים למעט אלה הופרדו centromere שלהם על ידי רקומבינציה במהלך המיוזה הראשונה מוטציות הומוזיגוטים מזוהים ב מצמדים EP בבית בין 50% ל לוקוסים centromeric ופחות מ -1% עבור לוקוסים telomeric. שיטה זו היא להעתיק מילה במילה מתוך הספר דג הזברה<sup&gt; 3</sup&gt;.

Watch this Scientific Journal Video about Making Gynogenetic Diploid Zebrafish by Early Pressure at JoVE.com

Making Gynogenetic Diploid Zebrafish by Early Pressure

זוהי שיטה להפקת דיפלואידי gynogenetic עוברי דג הזברה (אשר עוברים רק תרומה גנטית מגיע מהאם) על ידי חסימת חלוקת meiotic מחרה מחזיק אחריה מיד לאחר ההפריה עם זרע אור אולטרה סגול מומת. עוברים EP אינם הומוזיגוטים במלואה עקב רקומבינציה במהלך החלוקה meiotic הראשון, אולם הם הומוזיגוטים בכלל לוקוסים שלא היה מופרד centromere שלהם על ידי רקומבינציה.

ביצוע דיפלואידי דג הזברה Gynogenetic על ידי לחץ מוקדמת

Heterozygosity in diploid eukaryotes often makes genetic studies cumbersome. Methods that produce viable homozygous diploid offspring directly from ...

Research

JoVE Journal

Biology

Live Imaging of the Zebrafish Embryonic Brain by Confocal Microscopy

חיים הדמיה של המוח על ידי עוברי דג הזברה מיקרוסקופיה confocal

In this video, we demonstrate the method our lab has developed to analyze the cell shape changes and rearrangements required to bend and fold the ...

Brain Banking: Making the Most of your Research Specimens

בנקאות המוח: הפיכת רוב דוגמאות המחקר שלך

Unbiased stereology is a method for accurately and efficiently estimating the total neuron number (or other cell type) in a given area of interest1.  To ...

Measuring Blood Pressure in Mice using Volume Pressure Recording, a Tail-cuff Method

מדידת לחץ דם בעכברים באמצעות לחץ נפח הקלטה, שיטת זנב השרוול

The CODA 8-Channel High Throughput Non-Invasive Blood Pressure system measures the blood pressure in up to 8 mice or rats simultaneously. The CODA ...

Making MR Imaging Child's Play - Pediatric Neuroimaging Protocol, Guidelines and Procedure

ביצוע לשחק MR הילד הדמיה - פרוטוקול הדמייה ילדים, הנחיות נוהל

Within the last decade there has been an increase in the use of structural and functional magnetic resonance imaging (fMRI) to investigate the neural ...

Generating Chimeric Zebrafish Embryos by Transplantation

יצירת עוברים דג הזברה chimeric על ידי השתלה

One of the most powerful tools used to gain insight into complex developmental processes is the analysis of chimeric embryos. A chimera is defined as an ...

Atmospheric-pressure Molecular Imaging of Biological Tissues and Biofilms by LAESI Mass Spectrometry

בלחץ אטמוספרי מולקולרית והדמיה של רקמות ביולוגיות באמצעות Biofilms LAESI המוניים ספקטרומטריית

Ambient ionization methods in mass spectrometry allow analytical investigations to be performed directly on a tissue or biofilm under native-like ...

Direct Analysis of Single Cells by Mass Spectrometry at Atmospheric Pressure

ניתוח ישיר של תאים בודדים באמצעות ספקטרומטריית מסה בלחץ אטמוספרי

Analysis of biochemicals in single cells is important for understanding cell metabolism, cell cycle, adaptation, disease states, etc. Even the same cell ...

In vivo Electroporation of Morpholinos into the Adult Zebrafish Retina

In vivo Electroporation of Morpholinos into the Adult Zebrafish Retina

ב electroporation vivo של Morpholinos לתוך הרשתית דג הזברה למבוגרים

Many devastating inherited eye diseases result in progressive and irreversible blindness because humans cannot regenerate dying or diseased retinal ...

In Vivo 4-Dimensional Tracking of Hematopoietic Stem and Progenitor Cells in Adult Mouse Calvarial Bone Marrow

In Vivo 4-Dimensional Tracking of Hematopoietic Stem and Progenitor Cells in Adult Mouse Calvarial Bone Marrow

במעקב 4 ממדי Vivo של תאי גזע ואבות היווצרות דם במבוגרי עכבר calvarial מח עצם

Through a delicate balance between quiescence and proliferation, self renewal and production of differentiated progeny, hematopoietic stem cells (HSCs) ...

Production of Haploid Zebrafish Embryos by In Vitro Fertilization

Production of Haploid Zebrafish Embryos by In Vitro Fertilization

ייצור של הפלואידים עוברי דג הזברה על ידי<em&gt; במבחנה</em&gt; הפריה

The zebrafish has become a mainstream vertebrate model that is relevant for many disciplines of scientific study. Zebrafish are especially well suited for ...