Name: making gynogenetic diploid zebrafish by early pressure
Uploaded: 2009-06-30T00:00:00
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Métodos de fertilização in vitro e diplóides gynogenetic foram desenvolvidos para zebrafish por Charline Walker no laboratório de George Streisinger na Universidade de Oregon nos anos 1970 e 1980. O método descrito aqui não é alterado a partir de protocolos Charline, que estão disponíveis na íntegra em O Livro Zebrafish 3. Métodos de fertilização in vitro e diplóides gynogenetic foram desenvolvidos para zebrafish por Charline Walker no laboratório de George Streisinger na Universidade de Oregon nos anos 1970 e 1980. O método descrito aqui não é alterado a partir de protocolos Charline, que estão disponíveis na íntegra em O Livro Zebrafish 3.

Visão geral da pressão inicial Nota: receitas para muitos dos reagentes utilizados neste protocolo, como tricaina, peixes de água salina e Hanks estão disponíveis online no capítulo 10 do Livro Zebrafish 3 ( <a href="http://zfin.org/zf_info/zfbook/zfbk.html">http://zfin.org/zf_info/zfbook/zfbk.html</a> ) <ol><li> Produzir embriões por fertilização in vitro com esperma inativado UV. </li><li> Transferir imediatamente os ovos fertilizados em um frasco de vidro (com uma ta...

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	<li>Streisinger, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Segregation+analyses+and+gene-centromere+distances+in+zebrafish.">Segregation analyses and gene-centromere distances in zebrafish.</a> Genetics. 112 (2), 311-311 (1986).</li><li>Streisinger, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Production+of+clones+of+homozygous+diploid+zebra+fish+(Brachydanio+rerio).">Production of clones of homozygous diploid zebra fish (Brachydanio rerio).</a> Nature. 291 (5813), 293-293 (1981).</li><li>Westerfield, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> The Zebrafish Book: A guide for the laboratory use of zebrafish (Danio rerio). , (2000).</li><li>Johnson, S. L., Africa, D., Horne, S., Postlethwait, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Half-tetrad+analysis+in+zebrafish:+mapping+the+ros+mutation+and+the+centromere+of+linkage+group+I.">Half-tetrad analysis in zebrafish: mapping the ros mutation and the centromere of linkage group I.</a> Genetics. 139 (4), 1727-1727 (1995).</li><li>Beattie, C. E., Raible, D. W., Henion, P. D., Eisen, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Early+pressure+screens.">Early pressure screens.</a> Methods Cell Biol. 237 (71), 2575-25 (1999).</li><li>Johnson, S. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Centromere-linkage+analysis+and+consolidation+of+the+zebrafish+genetic+map.">Centromere-linkage analysis and consolidation of the zebrafish genetic map.</a> Genetics. 142 (4), 1277-1277 (1996).</li><li>Trede, N. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Zebrafish+mutants+with+disrupted+early+T-cell+and+thymus+development+identified+in+early+pressure+screen.">Zebrafish mutants with disrupted early T-cell and thymus development identified in early pressure screen.</a> Dev Dyn. 237 (9), 2575-2575 (1999).</li></ol>

É importante certificar-se que os embriões produzidos por este método são diplóides gynogenetic verdade. Como controles, gerar uma ninhada de ovos diplóides normal (mantendo de lado algum do esperma sem UV inativação) e uma embreagem de embriões haplóides (mantendo de lado uma ninhada de ovos fertilizados com esperma UV sem passar pelo procedimento EP). Menos 1 dia após a fertilização de embriões haplóides têm um eixo de corpo curto, cérebro e morfologia irregular somito. Haplóides não são viáveis ?...

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<td>Tricaine</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma</td>
<td>&nbsp;</td>
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<tr>
<td>Watch glass</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>French Press</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Pressure cylinder</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Instant ocean</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Pasteur pipettes</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Cut off the narrow end, fire polish</td>
</tr>
<tr>
<td>UV cross-linker</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>microcapillaries</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
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making gynogenetic diploid zebrafish by early pressure

Heterozigosidade em eucariotos diplóides muitas vezes faz estudos genéticos pesado. Métodos que produzir descendentes viáveis ​​diplóide homozigoto diretamente de mulheres heterozigotas permitir que as fêmeas F1 mutagenizados para ser exibido diretamente para mutações deletérias em uma tela acelerado para frente genética. Streisinger et al.<sup&gt; 1,2</sup&gt; Descritos métodos para fazer gynogenetic zebrafish diplóide (homozigoto), ativando os ovos zebrafish com o esperma de luz ultravioleta e inativada prevenção, quer meiótica a segunda ou a primeira divisão celular zigóticos usando tratamentos físicos (calor ou pressão) que os microtúbulos deploymerize. A &quot;pressão inicial&quot; (EP) método bloqueia a meiose II, que ocorre logo após a fertilização. O método EP produz uma alta porcentagem de embriões viáveis ​​que podem se desenvolver para adultos fértil de ambos os sexos. O método gera embriões que são homozigotos em todos os loci, exceto aqueles que foram separados de suas centrômero por recombinação durante a meiose I. homozigótica mutações são detectadas em embreagens PE, entre 50% para loci centromérica e menos de 1% para loci telomérica. Este método é reproduzida na íntegra do livro Zebrafish<sup&gt; 3</sup&gt;.

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Making Gynogenetic Diploid Zebrafish by Early Pressure

Este é um método para a geração de embriões diplóides gynogenetic zebrafish (embriões cuja única contribuição genética vem da mãe), bloqueando a segunda divisão meiótica imediatamente após a fertilização com esperma de luz ultravioleta inativado. EP embriões não são totalmente homozigótica devido à recombinação durante a primeira divisão meiótica, porém eles são homozigotos em todos os loci que não foram separadas de suas centrômero por recombinação.

Fazendo Zebrafish Diplóide Gynogenetic por pressão inicial

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Research

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Biology

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In vivo Electroporation of Morpholinos into the Adult Zebrafish Retina

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Production of Haploid Zebrafish Embryos by In Vitro Fertilization

Production of Haploid Zebrafish Embryos by In Vitro Fertilization

Produção de Haplóide embriões Zebrafish por<em&gt; In Vitro</em&gt; Fertilização

The zebrafish has become a mainstream vertebrate model that is relevant for many disciplines of scientific study. Zebrafish are especially well suited for ...