Name: making gynogenetic diploid zebrafish by early pressure
Uploaded: 2009-06-30T00:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Making Gynogenetic Diploid Zebrafish by Early Pressure at JoVE.com

Metoder för provrörsbefruktning och diploider gynogenetic utvecklades för zebrafisk av Charline Walker i George Streisinger labb vid University of Oregon i 1970-talet och 1980-talet. Metoden som beskrivs här är oförändrat jämfört med Charline s protokoll som finns tillgängliga i sin helhet i Zebrafish Book 3. Metoder för provrörsbefruktning och diploider gynogenetic utvecklades för zebrafisk av Charline Walker i George Streisinger labb vid University of Oregon i 1970-talet och 1980-talet. Metoden som beskrivs här är oförändrat jämfört med Charline s protokoll som finns tillgängliga i sin helhet i Zebrafish Book 3.

Översikt över tidiga trycket Obs: recept för många av de reagenser som används i detta protokoll som tricaine, fisk vatten och Hanks saltlösning finns tillgängliga online i kapitel 10 i Zebrafish Bok 3 ( <a href="http://zfin.org/zf_info/zfbook/zfbk.html">http://zfin.org/zf_info/zfbook/zfbk.html</a> ) <ol><li> Producera embryon genom befruktning in vitro med UV-inaktiverat spermier. </li><li> Överför omedelbart de befruktade äggen till en injektionsflaska av glas (med e...

<ol>
	<li>Streisinger, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Segregation+analyses+and+gene-centromere+distances+in+zebrafish.">Segregation analyses and gene-centromere distances in zebrafish.</a> Genetics. 112 (2), 311-311 (1986).</li><li>Streisinger, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Production+of+clones+of+homozygous+diploid+zebra+fish+(Brachydanio+rerio).">Production of clones of homozygous diploid zebra fish (Brachydanio rerio).</a> Nature. 291 (5813), 293-293 (1981).</li><li>Westerfield, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> The Zebrafish Book: A guide for the laboratory use of zebrafish (Danio rerio). , (2000).</li><li>Johnson, S. L., Africa, D., Horne, S., Postlethwait, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Half-tetrad+analysis+in+zebrafish:+mapping+the+ros+mutation+and+the+centromere+of+linkage+group+I.">Half-tetrad analysis in zebrafish: mapping the ros mutation and the centromere of linkage group I.</a> Genetics. 139 (4), 1727-1727 (1995).</li><li>Beattie, C. E., Raible, D. W., Henion, P. D., Eisen, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Early+pressure+screens.">Early pressure screens.</a> Methods Cell Biol. 237 (71), 2575-25 (1999).</li><li>Johnson, S. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Centromere-linkage+analysis+and+consolidation+of+the+zebrafish+genetic+map.">Centromere-linkage analysis and consolidation of the zebrafish genetic map.</a> Genetics. 142 (4), 1277-1277 (1996).</li><li>Trede, N. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Zebrafish+mutants+with+disrupted+early+T-cell+and+thymus+development+identified+in+early+pressure+screen.">Zebrafish mutants with disrupted early T-cell and thymus development identified in early pressure screen.</a> Dev Dyn. 237 (9), 2575-2575 (1999).</li></ol>

Det är viktigt att se till att embryon produceras av denna metod är sant gynogenetic diploider. Som kontroller generera en koppling av normala diploida ägg (genom att hålla undan en del av spermierna utan UV-inaktivering) och en klunga haploida embryon (genom att hålla undan en hög med ägg befruktas med UV spermier utan att gå via Europaparlamentets förfarande). Vid en befruktning dag efter haploida embryon har en kort kropp axel, oregelbundna hjärnan och somit morfologi. Haploids inte är livskraftiga efter 2...

<!DOCTYPE html PUBLIC "-//W3C//DTD XHTML 1.0 Transitional//EN" "http://www.w3.org/TR/xhtml1/DTD/xhtml1-transitional.dtd">
<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>Tricaine</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Watch glass</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>French Press</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Pressure cylinder</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Instant ocean</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Pasteur pipettes</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Cut off the narrow end, fire polish</td>
</tr>
<tr>
<td>UV cross-linker</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>microcapillaries</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>

making gynogenetic diploid zebrafish by early pressure

Heterozygositet i diploid eukaryoter gör ofta genetiska studier besvärligt. Metoder som ger livskraftiga homozygot diploida avkomma direkt från heterozygota honor gör F1 mutagenized kvinnor att vara skärmade direkt skadliga mutationer i en snabbare framåt genetiska skärmen. Streisinger et al.<sup&gt; 1,2</sup&gt; Beskrivna metoder för att göra gynogenetic (homozygot) diploid zebrafisk genom att aktivera zebrafisk ägg med ultraviolett ljus-inaktiverat spermier och förhindra både det andra meiotiska eller första zygotic celldelningen med hjälp av fysiska behandlingar (värme eller tryck) som deploymerize mikrotubuli. Den &quot;tidiga press&quot; (EP)-metoden blockerar meios II, som inträffar strax efter befruktningen. Europaparlamentet metoden ger en hög andel av livskraftiga embryon som kan utvecklas till fertila vuxna av båda könen. Metoden genererar embryon som är homozygot alls loci utom de som var separerade från sina centromer genom rekombination under meios I. Homozygot mutationer upptäckts i EP kopplingar till mellan 50% för centromeric lokus och mindre än 1% för telomeric loci. Denna metod återges ordagrant från Zebrafish Bok<sup&gt; 3</sup&gt;.

Watch this Scientific Journal Video about Making Gynogenetic Diploid Zebrafish by Early Pressure at JoVE.com

Making Gynogenetic Diploid Zebrafish by Early Pressure

Detta är en metod för att generera gynogenetic embryon diploida sebrafisk (embryon vars enda genetiska bidrag kommer från mamman) genom att blockera den andra meiotiska divisionen omedelbart efter befruktningen med ultraviolett ljus-inaktiverat spermier. EP embryon är inte helt homozygot på grund av rekombination under första meiotiska divisionen, men de är homozygota alls loci som inte har skilts från sina centromer genom rekombination.

Göra Zebrafish Gynogenetic diploida i början av Pressure

Heterozygosity in diploid eukaryotes often makes genetic studies cumbersome. Methods that produce viable homozygous diploid offspring directly from ...

Research

JoVE Journal

Biology

Live Imaging of the Zebrafish Embryonic Brain by Confocal Microscopy

Live avbildning av Zebrafish embryonal hjärna av konfokalmikroskopi

In this video, we demonstrate the method our lab has developed to analyze the cell shape changes and rearrangements required to bend and fold the ...

Brain Banking: Making the Most of your Research Specimens

Brain Bank: Göra det bästa av din forskning Prover

Unbiased stereology is a method for accurately and efficiently estimating the total neuron number (or other cell type) in a given area of interest1.  To ...

Measuring Blood Pressure in Mice using Volume Pressure Recording, a Tail-cuff Method

Mätning av blodtryck hos möss med Inspelningsvolym Pressure, en Tail-manschetten metod

The CODA 8-Channel High Throughput Non-Invasive Blood Pressure system measures the blood pressure in up to 8 mice or rats simultaneously. The CODA ...

Making MR Imaging Child's Play - Pediatric Neuroimaging Protocol, Guidelines and Procedure

Göra MR Barnets Play - Pediatric Neuroimaging protokoll, riktlinjer och arbetsordning

Within the last decade there has been an increase in the use of structural and functional magnetic resonance imaging (fMRI) to investigate the neural ...

Generating Chimeric Zebrafish Embryos by Transplantation

Generera chimär Zebrafish embryon genom transplantation

One of the most powerful tools used to gain insight into complex developmental processes is the analysis of chimeric embryos. A chimera is defined as an ...

Atmospheric-pressure Molecular Imaging of Biological Tissues and Biofilms by LAESI Mass Spectrometry

Atmosfäriskt tryck Molecular Imaging av biologisk vävnad och Biofilmer av LAESI masspektrometri

Ambient ionization methods in mass spectrometry allow analytical investigations to be performed directly on a tissue or biofilm under native-like ...

Direct Analysis of Single Cells by Mass Spectrometry at Atmospheric Pressure

Direkt analys av enskilda celler med masspektrometri vid atmosfärstryck

Analysis of biochemicals in single cells is important for understanding cell metabolism, cell cycle, adaptation, disease states, etc. Even the same cell ...

In vivo Electroporation of Morpholinos into the Adult Zebrafish Retina

In vivo Electroporation of Morpholinos into the Adult Zebrafish Retina

In vivo elektroporering av Morpholinos i Adult Zebrafish Retina

Many devastating inherited eye diseases result in progressive and irreversible blindness because humans cannot regenerate dying or diseased retinal ...

In Vivo 4-Dimensional Tracking of Hematopoietic Stem and Progenitor Cells in Adult Mouse Calvarial Bone Marrow

In Vivo 4-Dimensional Tracking of Hematopoietic Stem and Progenitor Cells in Adult Mouse Calvarial Bone Marrow

In Vivo 4-Dimensional Spårning av Hematopoietic Stem och stamceller i vuxen mus calvarial Benmärg

Through a delicate balance between quiescence and proliferation, self renewal and production of differentiated progeny, hematopoietic stem cells (HSCs) ...

Production of Haploid Zebrafish Embryos by In Vitro Fertilization

Production of Haploid Zebrafish Embryos by In Vitro Fertilization

Produktion av Haploid Zebrafish embryon från<em&gt; In Vitro</em&gt; Befruktning

The zebrafish has become a mainstream vertebrate model that is relevant for many disciplines of scientific study. Zebrafish are especially well suited for ...