Name: fluorescence in situ hybridization (fish) protocol in human sperm
Uploaded: 2009-09-01T11:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Fluorescence in situ hybridization FISH Protocol in Human Sperm at JoVE.com

Diese Arbeit wurde von der Generalitat de Catalunya (2005-SGR00437) unterstützt. Die Autoren danken J. Blanco und F. Vidal für ihre Überwachung und Ermutigung, und J. Lucas für seine technische Unterstützung.

I. Aufbereitung der Probe und Zellfixierung <ol><li> Verlassen Sie die Samenprobe in sterilen Behältern bei Raumtemperatur für 20 Minuten, bis Verflüssigung. </li><li> Übertragen Sie die Probe in ein Zentrifugenröhrchen und spinnen sie bei 1000g für 5 Minuten. </li><li> Entfernen Sie vorsichtig und den Überstand verwerfen mit einer Pasteurpipette. </li><li> Add hypotonischen Lösung (KCl, 0,075 M) vorgewärmt auf 37 ° C, Tropfen für Tropfen, beim Mischen auf einem Vortex auf ein Endvolumen von 10 ml zu erhalt...

<ol>
	<li>Blanco, J., Egozcue, J., Vidal, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Incidence+of+chromosome+21+disomy+in+human+spermatozoa+as+determined+by+fluorescent+in-situ+hybridization.">Incidence of chromosome 21 disomy in human spermatozoa as determined by fluorescent in-situ hybridization.</a> Hum. Reprod. 11, 722-726 (1996).</li></ol>

Dieses Protokoll beschreibt, wie die menschliche Samenproben für den Erhalt von Spermien FISH Präparate Prozess. Mit diesem Protokoll ist es möglich, chromosomale Anomalien bei männlichen Keimzellen zu analysieren. Spermatozoen Aneuploidietestung hat Anwendungen entweder im Rahmen der Grundlagenforschung und in der reproduktiven Beratung der unfruchtbaren Männer. Obwohl in der klinischen Diagnostik der am häufigsten untersuchten Chromosomen X, Y, 13, 18 und 21, andere kommerzielle Sonden für eine breite Palette v...

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		<div>
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		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>1,4-Dithiothreitol (DTT)</td>
<td>Material</td>
<td>Roche</td>
<td>10197777001</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>2-Amino-2-(hydroxymethyl)-1,3-propanediol</td>
<td>Material</td>
<td>Roche</td>
<td>10708976001</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Acetic acid</td>
<td>Material</td>
<td>Merck</td>
<td>100.063</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>AneuVysion&reg; Multicolor DNA Probe Kit<ul style="padding:2px;"><li>20xSaline-Sodium Citrate</li><li>4,6-diamidino-2-phenylindole (DAPI II)</li><li>CEP 18/X/Y DNA probe</li><li>NP-40</li><li>LSI 13/21 DNA probe</li></ul></td>
<td>Material</td>
<td>Vysis Inc.</td>
<td>32-161075 <ul style="padding:2px;"><li>30-805850</li><li>30-804941 </li><li>30-171077</li><li>30-804820</li><li>30-171078</li></ul></td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Centrifuge 5804R</td>
<td>Tool</td>
<td>Eppendorf</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Centrifuge tube</td>
<td>Material</td>
<td>Nunc</td>
<td>347856</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Coplin jar (glass)</td>
<td>Material</td>
<td>Barloworld Scientific</td>
<td>Hellendahl (ZCT278)</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Coplin jar (plastic)</td>
<td>Material</td>
<td>Deltalab</td>
<td>191087</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Cover slips (15x15)</td>
<td>Material</td>
<td>Knittel gl&auml;ser</td>
<td>4600115</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Cover slips (18x18)</td>
<td>Material</td>
<td>Knittel gl&auml;ser</td>
<td>4600118</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Diamond pencil</td>
<td>Material</td>
<td>Hammacher</td>
<td>335117010</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Ethanol</td>
<td>Material</td>
<td>Merck</td>
<td>100.983</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Formamide</td>
<td>Material</td>
<td>Roche</td>
<td>11814320001</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Freezer</td>
<td>Tool</td>
<td>Zanussi</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Gloves</td>
<td>Material</td>
<td>Sanyc</td>
<td>101/3300</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>HYBrite&trade;</td>
<td>Tool</td>
<td>Vysis Inc.</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Immersion Oil</td>
<td>Material</td>
<td>Olympus</td>
<td>35505</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Incubator</td>
<td>Tool</td>
<td>Heraeus</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Methanol</td>
<td>Material</td>
<td>Merck</td>
<td>106.009</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Micropipette</td>
<td>Material</td>
<td>Labsystems</td>
<td>Finnpipette (4500000)</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Micropipette replacement tip</td>
<td>Material</td>
<td>Daslab</td>
<td>16-2001</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Nail varnish</td>
<td>Material</td>
<td>Quo-cosmetics</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Olympus BX60 epifluorescence microscope</td>
<td>Tool</td>
<td>Olympus</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Equipped with a triple-band filter for DAPI/Texas Red/FITC and single-band filters for Aqua, FITC and Texas Red.</td>
</tr>
<tr>
<td>Pasteur Pipette</td>
<td>Material</td>
<td>Rubilabor</td>
<td>211.0230</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Phase contrast microscope</td>
<td>Tool</td>
<td>Nikon Diaphot</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Plastic pipette (3ml)</td>
<td>Material</td>
<td>Deltalab</td>
<td>200007</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Potassium chloride (KCl)</td>
<td>Material</td>
<td>Fluka</td>
<td>60128</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Rubber cement</td>
<td>Material</td>
<td>Best-test</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Slides</td>
<td>Material</td>
<td>Knittel gl&auml;ser</td>
<td>4520022</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Slide Saver Boxes</td>
<td>Material</td>
<td>Deltalab</td>
<td>19276.1</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Sterile container</td>
<td>Material</td>
<td>Deltalab</td>
<td>409726</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Syringe</td>
<td>Material</td>
<td>PentaFerte</td>
<td>002022300</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Thermometer</td>
<td>Material</td>
<td>Comark Instruments, Inc</td>
<td>KM12</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Tri-distilled water</td>
<td>Material</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Triton X-100</td>
<td>Material</td>
<td>Sigma</td>
<td>9002-93-1</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Tweezers</td>
<td>Material</td>
<td>B/Braun</td>
<td>Aesculap (BD224R)</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Vertical laminar flow hood</td>
<td>Tool</td>
<td>Burdinola</td>
<td>OR-ST 1500</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Vortex mixer</td>
<td>Tool</td>
<td>Fisher Scientific</td>
<td>FB15012</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Water bath</td>
<td>Tool</td>
<td>Raypa&reg;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>

fluorescence in situ hybridization (fish) protocol in human sperm

Aneuploidien sind die häufigsten Chromosomenstörungen beim Menschen. Die meisten dieser Veränderungen ergeben sich aus meiotischen Fehler bei der gametogenic Prozess bei den Eltern. In der menschlichen Männchen, können diese Fehler auf die Produktion von Spermien mit numerischen Chromosomenanomalien, die eine erhöhte Gefahr der Übertragung dieser Anomalien auf die Nachkommen vertreten führen. Aus diesem Grund hat die Technik der Fluoreszenz in situ Hybridisierung (FISH) auf Spermakerne zu einem Protokoll weithin im Zusammenhang mit der klinischen Diagnose integriert. Diese Praxis liefert eine Schätzung der Frequenzen von numerischen Chromosomenanomalien in den Keimzellen der Patienten, die zur genetischen Reproduktion Rat zu suchen. Bis heute sind die Chromosomen am häufigsten in Spermien FISH Analyse mit einbezogen Chromosomen X, Y, 13, 18 und 21. Dieses Video-Artikel beschreibt Schritt für Schritt, wie zu verarbeiten und zu befestigen ein menschliches Sperma Probe, wie man decondense und denaturieren die Spermien Chromatin, wie es weitergehen soll, um Spermien FISH Präparate zu erhalten, und wie die Ergebnisse am Mikroskop sichtbar zu machen. Besondere Hinweise über die wichtigsten Schritte gegeben werden, um optimale Ergebnisse zu erzielen.

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Fluorescence in situ hybridization FISH Protocol in Human Sperm

Dieses Video-Artikel beschreibt Schritt für Schritt, wie man eine Samenprobe Prozess zu einer qualitativ hochwertigen Fluoreszenz zu erreichen<em&gt; In situ</em&gt; Hybridisierung auf menschliche Spermien. Die Vorbereitungen erhalten können Aneuploidietestung im Zusammenhang mit der klinischen Diagnose verwendet werden.

Fluoreszenz In situ Hybridisierung (FISH)-Protokoll in menschlichen Spermien

Aneuploidies are the most frequent chromosomal abnormalities in humans. Most of these abnormalities result from meiotic errors during the gametogenic ...

Research

JoVE Journal

Biology

Fluorescence in situ hybridization (FISH) Protocol in Human Sperm

Non-radioactive in situ Hybridization Protocol Applicable for Norway Spruce and a Range of Plant Species

Non-radioactive in situ Hybridization Protocol Applicable for Norway Spruce and a Range of Plant Species

Nicht radioaktiv In situ Hybridisierung Protocol Einsetzbar für Fichte und einer Reihe von Pflanzenarten

The high-throughput expression analysis technologies available today give scientists an overflow of expression profiles but their resolution in terms of ...

Forschung

Biologie

Techniques for Imaging Ca2+ Signaling in Human Sperm

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Fluorescence microscopy of cells loaded with fluorescent, Ca2+-sensitive dyes is used for measurement of spatial and temporal aspects of Ca2+ signaling in ...

Detection of Viral RNA by Fluorescence in situ Hybridization (FISH)

Detection of Viral RNA by Fluorescence in situ Hybridization FISH

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Analysis of Single-cell Gene Transcription by RNA Fluorescent In Situ Hybridization FISH

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Adhesion of Plasmodium falciparum infected erythrocytes (IE) to human endothelial receptors during malaria infections is mediated by expression of PfEMP1 ...

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Schnell Fluorescent<em&gt; In-situ-</em&gt; Hybridisierung Protokoll für Xist-RNA in Kombination mit Immunfluoreszenz von Histonmodifikationen in X-Chromosom-Inaktivierung

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Observation and Quantification of Telomere and Repetitive Sequences Using Fluorescence In Situ Hybridization (FISH) with PNA Probes in Caenorhabditis elegans

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Beobachtung und Quantifizierung der Telomere und repetitiver Sequenzen mittels Fluoreszenz<em&gt; In Situ</em&gt; Die Hybridisierung (FISH) mit PNA-Sonden in<em&gt; Caenorhabditis elegans</em

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Methode zur Kennzeichnung Transkripte in einzelnen Escherichia coli Zellen für Einzelmolekül-Fluoreszenz In Situ Hybridisierung Experimente

A method is described for labeling individual messenger RNA (mRNA) transcripts in fixed bacteria for use in single-molecule fluorescence in situ ...