Name: fluorescence in situ hybridization (fish) protocol in human sperm
Uploaded: 2009-09-01T11:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Fluorescence in situ hybridization FISH Protocol in Human Sperm at JoVE.com

עבודה זו נתמכה על ידי Generalitat דה קטלוניה (2005-SGR00437). המחברים מודים ל י פ ו בלאנקו וידאל לפיקוח שלהם עידוד, ג&#39;לוקאס לקבלת סיוע טכני שלו.

I. עיבוד המדגם קיבוע התא <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השאירו את מדגם הזרע במכלים סטריליים בטמפרטורת החדר למשך 20 דקות עד עיבוי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מעבירים את המדגם כדי צינור צנטריפוגות ספין אותו 1000g במשך 5 דקות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הו...

<ol>
	<li>Blanco, J., Egozcue, J., Vidal, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Incidence+of+chromosome+21+disomy+in+human+spermatozoa+as+determined+by+fluorescent+in-situ+hybridization.">Incidence of chromosome 21 disomy in human spermatozoa as determined by fluorescent in-situ hybridization.</a> Hum. Reprod. 11, 722-726 (1996).</li></ol>

פרוטוקול זה מתאר כיצד תהליך דגימות זרע אנושי להשגת FISH ההכנות הזרע. באמצעות פרוטוקול זה ניתן לנתח פגמים בכרומוזומים של גמטות זכריות. ההקרנה זרע aneuploidy יש יישומים גם בהקשר של מחקר בסיסי בייעוץ הרבייה שניתנה זכרים עקרים. למרות האבחנה הקלינית הכרומוזומים ביותר למד נרחב ה...

<!DOCTYPE html PUBLIC "-//W3C//DTD XHTML 1.0 Transitional//EN" "http://www.w3.org/TR/xhtml1/DTD/xhtml1-transitional.dtd">
<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>1,4-Dithiothreitol (DTT)</td>
<td>Material</td>
<td>Roche</td>
<td>10197777001</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>2-Amino-2-(hydroxymethyl)-1,3-propanediol</td>
<td>Material</td>
<td>Roche</td>
<td>10708976001</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Acetic acid</td>
<td>Material</td>
<td>Merck</td>
<td>100.063</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>AneuVysion&reg; Multicolor DNA Probe Kit<ul style="padding:2px;"><li>20xSaline-Sodium Citrate</li><li>4,6-diamidino-2-phenylindole (DAPI II)</li><li>CEP 18/X/Y DNA probe</li><li>NP-40</li><li>LSI 13/21 DNA probe</li></ul></td>
<td>Material</td>
<td>Vysis Inc.</td>
<td>32-161075 <ul style="padding:2px;"><li>30-805850</li><li>30-804941 </li><li>30-171077</li><li>30-804820</li><li>30-171078</li></ul></td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Centrifuge 5804R</td>
<td>Tool</td>
<td>Eppendorf</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Centrifuge tube</td>
<td>Material</td>
<td>Nunc</td>
<td>347856</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Coplin jar (glass)</td>
<td>Material</td>
<td>Barloworld Scientific</td>
<td>Hellendahl (ZCT278)</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Coplin jar (plastic)</td>
<td>Material</td>
<td>Deltalab</td>
<td>191087</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Cover slips (15x15)</td>
<td>Material</td>
<td>Knittel gl&auml;ser</td>
<td>4600115</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Cover slips (18x18)</td>
<td>Material</td>
<td>Knittel gl&auml;ser</td>
<td>4600118</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Diamond pencil</td>
<td>Material</td>
<td>Hammacher</td>
<td>335117010</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Ethanol</td>
<td>Material</td>
<td>Merck</td>
<td>100.983</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Formamide</td>
<td>Material</td>
<td>Roche</td>
<td>11814320001</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Freezer</td>
<td>Tool</td>
<td>Zanussi</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Gloves</td>
<td>Material</td>
<td>Sanyc</td>
<td>101/3300</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>HYBrite&trade;</td>
<td>Tool</td>
<td>Vysis Inc.</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Immersion Oil</td>
<td>Material</td>
<td>Olympus</td>
<td>35505</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Incubator</td>
<td>Tool</td>
<td>Heraeus</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Methanol</td>
<td>Material</td>
<td>Merck</td>
<td>106.009</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Micropipette</td>
<td>Material</td>
<td>Labsystems</td>
<td>Finnpipette (4500000)</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Micropipette replacement tip</td>
<td>Material</td>
<td>Daslab</td>
<td>16-2001</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Nail varnish</td>
<td>Material</td>
<td>Quo-cosmetics</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Olympus BX60 epifluorescence microscope</td>
<td>Tool</td>
<td>Olympus</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Equipped with a triple-band filter for DAPI/Texas Red/FITC and single-band filters for Aqua, FITC and Texas Red.</td>
</tr>
<tr>
<td>Pasteur Pipette</td>
<td>Material</td>
<td>Rubilabor</td>
<td>211.0230</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Phase contrast microscope</td>
<td>Tool</td>
<td>Nikon Diaphot</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Plastic pipette (3ml)</td>
<td>Material</td>
<td>Deltalab</td>
<td>200007</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Potassium chloride (KCl)</td>
<td>Material</td>
<td>Fluka</td>
<td>60128</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Rubber cement</td>
<td>Material</td>
<td>Best-test</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Slides</td>
<td>Material</td>
<td>Knittel gl&auml;ser</td>
<td>4520022</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Slide Saver Boxes</td>
<td>Material</td>
<td>Deltalab</td>
<td>19276.1</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Sterile container</td>
<td>Material</td>
<td>Deltalab</td>
<td>409726</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Syringe</td>
<td>Material</td>
<td>PentaFerte</td>
<td>002022300</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Thermometer</td>
<td>Material</td>
<td>Comark Instruments, Inc</td>
<td>KM12</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Tri-distilled water</td>
<td>Material</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Triton X-100</td>
<td>Material</td>
<td>Sigma</td>
<td>9002-93-1</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Tweezers</td>
<td>Material</td>
<td>B/Braun</td>
<td>Aesculap (BD224R)</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Vertical laminar flow hood</td>
<td>Tool</td>
<td>Burdinola</td>
<td>OR-ST 1500</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Vortex mixer</td>
<td>Tool</td>
<td>Fisher Scientific</td>
<td>FB15012</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Water bath</td>
<td>Tool</td>
<td>Raypa&reg;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>

fluorescence in situ hybridization (fish) protocol in human sperm

Aneuploidies הם פגמים בכרומוזומים השכיח ביותר בבני אדם. רוב הפרעות אלו נובעות שגיאות meiotic בתהליך gametogenic אצל ההורים. אצל גברים אנושיים, שגיאות אלה יכולים להוביל לייצור של זרע עם הפרעות כרומוזום מספריים המייצגים סיכון מוגבר להעברת אנומליות אלה לצאצאים. מסיבה זו, את הטכניקה של הקרינה הכלאה באתרו (FISH) על גרעין הזרע הפך פרוטוקול שולבו נרחב בהקשר של אבחנה קלינית. בפועל זה מספק אומדן של תדרים של הפרעות כרומוזום מספריים הגמטות של המטופלים המבקשים ייעוץ גנטי הרבייה. עד כה, את הכרומוזומים כללו לרוב בניתוח FISH הזרע הם כרומוזומי X, Y, 13, 18 ו - 21. זה וידאו מאמר זה מתאר, צעד אחר צעד, איך לעבד ולתקן דגימת זרע אנושי, איך decondense ו לפגל הכרומטין זרע, כיצד להמשיך לקבל ההכנות FISH הזרע, וכיצד לחזות את התוצאות במיקרוסקופ. הערות מיוחדות הצעדים המשמעותיים ביותר ניתנים על מנת להשיג את התוצאות הטובות ביותר.

Watch this Scientific Journal Video about Fluorescence in situ hybridization FISH Protocol in Human Sperm at JoVE.com

Fluorescence in situ hybridization FISH Protocol in Human Sperm

זה וידאו מאמר זה מתאר, צעד אחר צעד, כיצד תהליך דגימת זרע כדי להשיג באיכות טובה פלואורסצנטי<em&gt; באתרו</em&gt; הכלאה על בזרע אנושי. ההכנות שהושגו ניתן להשתמש להקרנה aneuploidy בהקשר של אבחנה קלינית.

פלואורסצנציה באתרו הכלאה (FISH) פרוטוקול של זרע אדם

Aneuploidies are the most frequent chromosomal abnormalities in humans. Most of these abnormalities result from meiotic errors during the gametogenic ...

Research

JoVE Journal

Biology

Fluorescence in situ hybridization (FISH) Protocol in Human Sperm

Non-radioactive in situ Hybridization Protocol Applicable for Norway Spruce and a Range of Plant Species

Non-radioactive in situ Hybridization Protocol Applicable for Norway Spruce and a Range of Plant Species

Non-רדיואקטיבי באתרו הכלאה פרוטוקול ישים עבור נורווגיה Spruce ומגוון של מיני צמחים

The high-throughput expression analysis technologies available today give scientists an overflow of expression profiles but their resolution in terms of ...

Techniques for Imaging Ca2+ Signaling in Human Sperm

Techniques for Imaging Ca2+ Signaling in Human Sperm

טכניקות הדמיה Ca 2 + איתות זרע אנושי

Fluorescence microscopy of cells loaded with fluorescent, Ca2+-sensitive dyes is used for measurement of spatial and temporal aspects of Ca2+ signaling in ...

Detection of Viral RNA by Fluorescence in situ Hybridization (FISH)

Detection of Viral RNA by Fluorescence in situ Hybridization FISH

זיהוי של רנ&quot;א נגיפי על ידי הקרינה<em&gt; באתרו</em&gt; הכלאה (דגים)

Viruses  that infect cells elicit specific changes to normal cell functions which serve  to divert energy and resources for viral replication. Many ...

Analysis of Single-cell Gene Transcription by RNA Fluorescent In Situ Hybridization (FISH)

Analysis of Single-cell Gene Transcription by RNA Fluorescent In Situ Hybridization FISH

ניתוח של שעתוק גנים מהתא הבודד על ידי RNA פלורסנט<em&gt; באתר</em&gt; הכלאה (דגים)

Adhesion of Plasmodium falciparum infected erythrocytes (IE) to human endothelial receptors during malaria infections is mediated by expression of PfEMP1 ...

Visualization and Analysis of mRNA Molecules Using Fluorescence In Situ Hybridization in Saccharomyces cerevisiae

Visualization and Analysis of mRNA Molecules Using Fluorescence In Situ Hybridization in Saccharomyces cerevisiae

הדמיה וניתוח של מולקולות ה-mRNA באמצעות הקרינה<em&gt; באתרו</em&gt; הכלאה ב<em&gt; Cerevisiae Saccharomyces</em

The Fluorescence in situ Hybridization (FISH) method allows one to detect nucleic acids in the native cellular environment. Here we provide a protocol for ...

Combined DNA-RNA Fluorescent In situ Hybridization (FISH) to Study X Chromosome Inactivation in Differentiated Female Mouse Embryonic Stem Cells

Combined DNA-RNA Fluorescent In situ Hybridization FISH to Study X Chromosome Inactivation in Differentiated Female Mouse Embryonic Stem Cells

DNA-RNA בשילוב פלורסנט<em&gt; באתרו</em&gt; הכלאה (דגים) לחקר איון כרומוזום X בתאי גזע הבדיל נקבה עכבר עוברי

Fluorescent in situ hybridization (FISH) is a molecular technique which enables the detection of nucleic acids in cells. DNA FISH is often used in ...

Quick Fluorescent In Situ Hybridization Protocol for Xist RNA Combined with Immunofluorescence of Histone Modification in X-chromosome Inactivation

Quick Fluorescent In Situ Hybridization Protocol for Xist RNA Combined with Immunofluorescence of Histone Modification in X-chromosome Inactivation

המהיר פלורסנט<em&gt; באתר</em&gt; הכלאת פרוטוקול לXist RNA משולב עם Immunofluorescence של היסטון שינוי באיון כרומוזום X

Combining RNA fluorescent in situ hybridization (FISH) with immunofluorescence (immuno-FISH) creates a technique that can be employed at the single cell ...

Simple Method for Fluorescence DNA In Situ Hybridization to Squashed Chromosomes

Simple Method for Fluorescence DNA In Situ Hybridization to Squashed Chromosomes

שיטה פשוטה DNA הקרינה<em&gt; באתר</em&gt; הכלאה לכרומוזומים &quot;סתמת

DNA in situ hybridization (DNA ISH) is a commonly used method for mapping sequences to specific chromosome regions. This approach is particularly ...

Observation and Quantification of Telomere and Repetitive Sequences Using Fluorescence In Situ Hybridization (FISH) with PNA Probes in Caenorhabditis elegans

Observation and Quantification of Telomere and Repetitive Sequences Using Fluorescence In Situ Hybridization FISH with PNA Probes in Caenorhabditis elegans

תצפית כימות הטלומרים ו רצפים חוזרים קרינה באמצעות<em&gt; באתרו</em&gt; הכלאה (דגים) עם PNA בדיקות ב<em&gt; Elegans Caenorhabditis</em

Telomere is a ribonucleoprotein structure that protects chromosomal ends from aberrant fusion and degradation. Telomere length is maintained by telomerase ...

Method for Labeling Transcripts in Individual Escherichia coli Cells for Single-molecule Fluorescence In Situ Hybridization Experiments

Method for Labeling Transcripts in Individual Escherichia coli Cells for Single-molecule Fluorescence In Situ Hybridization Experiments

שיטת תיוג תעתיקים בתאים בודדים Escherichia coli לניסויים מולקולה בודדת פלורסצנטיות בחיי עיר הכלאה

A method is described for labeling individual messenger RNA (mRNA) transcripts in fixed bacteria for use in single-molecule fluorescence in situ ...