Name: fluorescence in situ hybridization (fish) protocol in human sperm
Uploaded: 2009-09-01T11:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Fluorescence in situ hybridization FISH Protocol in Human Sperm at JoVE.com

이 작품은 Generalitat 드 Catalunya (2005 - SGR00437)에 의해 지원되었다. 저자는 그들의 자신의 기술 지원에 대한 감독과 격려, 그리고 J. 루카스에 대한 J. 블랑코와 F. 비달에 감사드립니다.

I. 샘플 처리 및 세포 고정 <ol><li> 액화까지 20 분 실온에서 멸균 용기에 정액 샘플을 둡니다. </li><li> 원심 분리기 튜브에 샘플을 전송하고 5 분 1천그램에 그것을 돌린다. </li><li> 부드럽게 파스퇴르 피펫을 사용하여 표면에 뜨는를 제거하고 폐기. </li><li> hypotonic 솔루션을 추가 (KCl, 0.075M) 미리 가열 10 ML의 최종 볼륨을 얻기 위해 소용돌이에 혼합하는 동안, 37 ° C 드롭에 의해 드롭. </li><li> 37 물 목?...

<ol>
	<li>Blanco, J., Egozcue, J., Vidal, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Incidence+of+chromosome+21+disomy+in+human+spermatozoa+as+determined+by+fluorescent+in-situ+hybridization.">Incidence of chromosome 21 disomy in human spermatozoa as determined by fluorescent in-situ hybridization.</a> Hum. Reprod. 11, 722-726 (1996).</li></ol>

이 프로토콜은 정자 물고기 준비를위한 인간의 정액 샘플을 처리하는 방법에 대해 설명합니다. 이 프로토콜을 사용하면 남성의 염색체 이상 gametes를 분석하는 것이 가능합니다. 마리의 정자 수야 aneuploidy 심사는 기초 연구의 맥락과 불임 남성에게 주어진 생식 조언에 두 응용 프로그램이 있습니다. 임상 진단에 가장 널리 연구 염색체는 X, Y, 13, 18 및 21 염색체와 loci 광범위한 다른 상용 프로브은 ?...

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		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>1,4-Dithiothreitol (DTT)</td>
<td>Material</td>
<td>Roche</td>
<td>10197777001</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>2-Amino-2-(hydroxymethyl)-1,3-propanediol</td>
<td>Material</td>
<td>Roche</td>
<td>10708976001</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Acetic acid</td>
<td>Material</td>
<td>Merck</td>
<td>100.063</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>AneuVysion&reg; Multicolor DNA Probe Kit<ul style="padding:2px;"><li>20xSaline-Sodium Citrate</li><li>4,6-diamidino-2-phenylindole (DAPI II)</li><li>CEP 18/X/Y DNA probe</li><li>NP-40</li><li>LSI 13/21 DNA probe</li></ul></td>
<td>Material</td>
<td>Vysis Inc.</td>
<td>32-161075 <ul style="padding:2px;"><li>30-805850</li><li>30-804941 </li><li>30-171077</li><li>30-804820</li><li>30-171078</li></ul></td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Centrifuge 5804R</td>
<td>Tool</td>
<td>Eppendorf</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Centrifuge tube</td>
<td>Material</td>
<td>Nunc</td>
<td>347856</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Coplin jar (glass)</td>
<td>Material</td>
<td>Barloworld Scientific</td>
<td>Hellendahl (ZCT278)</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Coplin jar (plastic)</td>
<td>Material</td>
<td>Deltalab</td>
<td>191087</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Cover slips (15x15)</td>
<td>Material</td>
<td>Knittel gl&auml;ser</td>
<td>4600115</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Cover slips (18x18)</td>
<td>Material</td>
<td>Knittel gl&auml;ser</td>
<td>4600118</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Diamond pencil</td>
<td>Material</td>
<td>Hammacher</td>
<td>335117010</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Ethanol</td>
<td>Material</td>
<td>Merck</td>
<td>100.983</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Formamide</td>
<td>Material</td>
<td>Roche</td>
<td>11814320001</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Freezer</td>
<td>Tool</td>
<td>Zanussi</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Gloves</td>
<td>Material</td>
<td>Sanyc</td>
<td>101/3300</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>HYBrite&trade;</td>
<td>Tool</td>
<td>Vysis Inc.</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Immersion Oil</td>
<td>Material</td>
<td>Olympus</td>
<td>35505</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Incubator</td>
<td>Tool</td>
<td>Heraeus</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Methanol</td>
<td>Material</td>
<td>Merck</td>
<td>106.009</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Micropipette</td>
<td>Material</td>
<td>Labsystems</td>
<td>Finnpipette (4500000)</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Micropipette replacement tip</td>
<td>Material</td>
<td>Daslab</td>
<td>16-2001</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Nail varnish</td>
<td>Material</td>
<td>Quo-cosmetics</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Olympus BX60 epifluorescence microscope</td>
<td>Tool</td>
<td>Olympus</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Equipped with a triple-band filter for DAPI/Texas Red/FITC and single-band filters for Aqua, FITC and Texas Red.</td>
</tr>
<tr>
<td>Pasteur Pipette</td>
<td>Material</td>
<td>Rubilabor</td>
<td>211.0230</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Phase contrast microscope</td>
<td>Tool</td>
<td>Nikon Diaphot</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Plastic pipette (3ml)</td>
<td>Material</td>
<td>Deltalab</td>
<td>200007</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Potassium chloride (KCl)</td>
<td>Material</td>
<td>Fluka</td>
<td>60128</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Rubber cement</td>
<td>Material</td>
<td>Best-test</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Slides</td>
<td>Material</td>
<td>Knittel gl&auml;ser</td>
<td>4520022</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Slide Saver Boxes</td>
<td>Material</td>
<td>Deltalab</td>
<td>19276.1</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Sterile container</td>
<td>Material</td>
<td>Deltalab</td>
<td>409726</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Syringe</td>
<td>Material</td>
<td>PentaFerte</td>
<td>002022300</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Thermometer</td>
<td>Material</td>
<td>Comark Instruments, Inc</td>
<td>KM12</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Tri-distilled water</td>
<td>Material</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Triton X-100</td>
<td>Material</td>
<td>Sigma</td>
<td>9002-93-1</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Tweezers</td>
<td>Material</td>
<td>B/Braun</td>
<td>Aesculap (BD224R)</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Vertical laminar flow hood</td>
<td>Tool</td>
<td>Burdinola</td>
<td>OR-ST 1500</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Vortex mixer</td>
<td>Tool</td>
<td>Fisher Scientific</td>
<td>FB15012</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Water bath</td>
<td>Tool</td>
<td>Raypa&reg;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>

fluorescence in situ hybridization (fish) protocol in human sperm

Aneuploidies은 인간에서 가장 자주 염색체 이상입니다. 이러한 이상의 대부분은 부모의 gametogenic 과정 meiotic 오류로 인한. 인간의 남성에서 이러한 오류가 자손에게 이러한 이례적인 전송의 증가 위험을 나타내는 수치 염색체 이상과 마리의 정자 수야의 생산으로 이어질 수 있습니다. 이러한 이유로, 정자의 핵에 원위치 하이브리드화 (물고기)의 형광의 기술은 광범위하게 임상 진단의 맥락에 통합 프로토콜되고있다. 이러한 행위는 유전자의 생식 조언을 추구 환자의 gametes의 수치 염색체 이상의 주파수의 예측을 제공합니다. 지금까지 대부분의 자주 정자 생선 분석에 포함된 염색체는 염색체 X, Y, 13, 18과 21입니다. 이 비디오 문서에서는 어떻게 현미경의 결과를 시각화하는 방법에 정자 물고기 준비를 얻기 위해 진행 정자 염색질을 decondense 및 변성하는 방법, 인간의 정액 샘플을 처리하고 해결하는 방법을 단계적으로, 그리고 설명합니다. 가장 관련성이 높은 단계의 특별 연설은 최상의 결과를 달성하기 위해 주어집니다.

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Fluorescence in situ hybridization FISH Protocol in Human Sperm

이 비디오 기사는 양질의 형광을 달성하기 위해 정액 샘플을 처리하는 방법을 단계적으로, 설명<em&gt; 현장에서</em인간 마리의 정자 수야에&gt; 하이브 리다이 제이션. 얻은 준비는 임상 진단의 맥락에서 aneuploidy 심사 사용할 수 있습니다.

형광 현장에서</em인간의 정자에서> 하이브리드화 (물고기) 프로토콜

Aneuploidies are the most frequent chromosomal abnormalities in humans. Most of these abnormalities result from meiotic errors during the gametogenic ...

Research

JoVE Journal

Biology

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