Name: purification of mitochondria from yeast cells
Uploaded: 2009-08-24T16:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Purification of Mitochondria from Yeast Cells at JoVE.com

Dit werk werd ondersteund door subsidies van de CIHR en de NSERC van Canada. VIT is een CIHR nieuwe onderzoeker en de Concordia University Research Chair in Genomics, Celbiologie en veroudering.

Materialen en methoden Giststammen en groei-omstandigheden De wild-type stam BY4742 (MATα his3Δ1 leu2Δ0 lys2Δ0 ura3Δ0) werd gekweekt in een rijke YEPD medium (1% gistextract, 2% pepton, 2% glucose). Cellen werden gekweekt bij 30 ° C met een rotatie schudden bij 200 rpm in erlenmeyers op een &#39;fles volume / medium volume &quot;ratio van 5:1. Isolatie van ruwe mitochondriale fractie <ol><li> Grow een L van de wild-type st...

<ol>
	<li>Voet, D., Voet, J. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biochemistry.">Biochemistry.</a> , (2004).</li><li>Suen, D. -. F., Norris, K. L., Youle, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mitochondrial+dynamics+and+apoptosis.">Mitochondrial dynamics and apoptosis.</a> Genes Dev. 22, 1577-1590 (2008).</li><li>Cheng, W. C., Berman, S. B., Ivanovska, I., Jonas, E. A., Lee, S. J., Chen, Y., Kaczmarek, L. K., Pineda, F. &. a. m. p. ;. a. m. p., Hardwick, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mitochondrial+factors+with+dual+roles+in+death+and+survival.">Mitochondrial factors with dual roles in death and survival.</a> Oncogene. 25, 4697-4705 (2006).</li><li>Detmer, S. A., Chan, D. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functions+and+dysfunctions+of+mitochondrial+dynamics.">Functions and dysfunctions of mitochondrial dynamics.</a> Nat. Rev. Mol. Cell Biol. 8, 870-879 (2007).</li><li>McBride, H. M., Neuspiel, M., Wasiak, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mitochondria:+more+than+just+a+powerhouse.">Mitochondria: more than just a powerhouse.</a> Curr. Biol. 16, R551-R560 (2006).</li><li>Balaban, R. S., Nemoto, S., Finkel, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mitochondria,+oxidants,+and+aging.">Mitochondria, oxidants, and aging.</a> Cell. 120, 483-495 (2005).</li></ol>

Deze methode maakt het mogelijk hoog rendement isolatie van pure mitochondria uit gistcellen. Mitochondria gezuiverd door middel van deze methode zijn in wezen vrij is van besmetting door andere organellen en behouden hun structurele en functionele integriteit na de zuivering. De beschreven methode levert mitochondriën die geschikt zijn voor cel-vrije reconstructie van essentiële mitochondriale processen. Deze zeer zuivere mitochondriën kan ook worden gebruikt voor de analyse van mitochondriale structuur en functies,...

purification of mitochondria from yeast cells

Mitochondriën zijn de belangrijkste site van ATP productie tijdens aërobe metabolisme in eukaryote niet-fotosynthetische cellen<sup&gt; 1</sup&gt;. Deze complexe organellen spelen ook een essentiële rol in apoptotische celdood<sup&gt; 2</sup&gt;, Overleving van de cel<sup&gt; 3</sup&gt;, Zoogdieren ontwikkeling<sup&gt; 4</sup&gt;, Neuronale ontwikkeling en functie<sup&gt; 4</sup&gt;, Intracellulaire signalisatie<sup&gt; 5</sup&gt;, En een lange levensduur regelgeving<sup&gt; 6</sup&gt;. Ons inzicht in deze complexe biologische processen gecontroleerd door mitochondria is gebaseerd op robuuste methoden voor de beoordeling van hun morfologie, hun eiwitten en lipiden, de integriteit van hun DNA, en hun talrijke vitale functies. De gist<em&gt; Saccharomyces cerevisiae</em&gt;, Een genetisch en biochemisch manipuleerbare eencellige eukaryote met geannoteerde genoom en goed gedefinieerde proteoom, is een waardevol model voor het bestuderen van de moleculaire en cellulaire mechanismen die ten grondslag liggen aan essentiële biologische functies van de mitochondriën. Voor dit soort studies, is het cruciaal om zeer zuiver mitochondriën hebben. Hier presenteren we een gedetailleerde beschrijving van een snelle en effectieve methode voor het zuiveren van gist mitochondriën. Deze methode kan de isolatie van zeer zuivere mitochondriën die in wezen vrij is van besmetting door andere organellen en behouden hun structurele en functionele integriteit na de zuivering. Mitochondria gezuiverd door middel van deze methode zijn geschikt voor celvrij reconstructie van essentiële mitochondriale processen en kan worden gebruikt voor de analyse van mitochondriale structuur en functies, mitochondriale proteoom en lipidome, en mitochondriale DNA.

Watch this Scientific Journal Video about Purification of Mitochondria from Yeast Cells at JoVE.com

Purification of Mitochondria from Yeast Cells

Beschrijven we een snelle en effectieve methode voor de zuivering van mitochondriën van de gist<em&gt; Saccharomyces cerevisiae</em&gt;. Deze methode maakt het mogelijk hoog rendement isolatie van pure mitochondriën die in wezen vrij is van besmetting door andere organellen en behouden hun structurele en functionele integriteit na de zuivering.

Zuivering van Mitochondriën uit gistcellen

Mitochondria are the main site of ATP production during aerobic metabolism in eukaryotic non-photosynthetic cells1. These complex organelles also play ...

Research

JoVE Journal

Biology

Isolation of CD4+ T cells from Mouse Lymph Nodes Using Miltenyi MACS Purification

Isolatie van CD4 + T-cellen van de muis lymfeknopen Met behulp van Miltenyi MACS Zuivering

Isolation of cells from the primary source is a necessary step in many more complex protocols. Miltenyi offers kits to isolate cells from several ...

Staining of Proteins in Gels with Coomassie G-250 without Organic Solvent and Acetic Acid

Kleuring van eiwitten in Gels met Coomassie G-250 zonder organisch oplosmiddel en azijnzuur

In classical protein staining protocols using Coomassie Brilliant Blue (CBB), solutions with high contents of toxic and flammable organic solvents ...

Purification of Progenitors from Skeletal Muscle

Zuivering van voorlopercellen uit Skeletal Muscle

Skeletal muscle contains multiple progenitor populations of distinct embryonic origins and developmental potential. Myogenic progenitors, usually residing ...

Chromatographic Purification of Highly Active Yeast Ribosomes

Chromatografische zuivering van sterk actieve gist Ribosomen

Eukaryotic ribosomes are much more labile as compared to their eubacterial and archael counterparts, thus posing a significant challenge to researchers.  ...

Confocal Imaging of Single Mitochondrial Superoxide Flashes in Intact Heart or In Vivo

Confocal Imaging of Single Mitochondrial Superoxide Flashes in Intact Heart or In Vivo

Confocale beeldvorming van Single mitochondriaal superoxide Knippert Intact Heart of<em&gt; In Vivo</em

Mitochondrion is a critical intracellular organelle responsible for energy production and intracellular signaling in eukaryotic systems. Mitochondrial ...

Isolation of mRNAs Associated with Yeast Mitochondria to Study Mechanisms of Localized Translation

Isolatie van mRNA&#39;s geassocieerd met Gist Mitochondriën Mechanismen van Gelokaliseerde Vertaling Studie

Most of mitochondrial proteins are encoded in the nucleus and need to be imported into the organelle. Import may occur while the protein is synthesized ...

Rapid Isolation And Purification Of Mitochondria For Transplantation By Tissue Dissociation And Differential Filtration

Rapid isolatie en zuivering van Mitochondriën voor transplantatie Door Tissue Dissociatie en differentiële Filtratie

Previously described mitochondrial isolation methods using differential centrifugation and/or Ficoll gradient centrifugation require 60 to 100 min to ...

Isolation and Functional Analysis of Mitochondria from Cultured Cells and Mouse Tissue

Isolatie en functionele analyse van Mitochondriën uit gekweekte cellen en muis Tissue

Comparison between two or more distinct groups, such as healthy vs. disease, is necessary to determine cellular status. Mitochondria are at the nexus of ...

Genome-wide Purification of Extrachromosomal Circular DNA from Eukaryotic Cells

Genoom-brede Zuivering van extrachromosomale circulaire DNA van eukaryote cellen

Extrachromosomal circular DNAs (eccDNAs) are common genetic elements in Saccharomyces cerevisiae and are reported in other eukaryotes as well. EccDNAs ...

MitoCeption: Transferring Isolated Human MSC Mitochondria to Glioblastoma Stem Cells

MitoCeption: overbrengen geïsoleerde menselijke MSC Mitochondriën aan glioblastoma Stamcellen

Mitochondria play a central role for cell metabolism, energy production and control of apoptosis. Inadequate mitochondrial function has been found ...