Name: purification of mitochondria from yeast cells
Uploaded: 2009-08-24T16:00:00
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Ce travail a été soutenu par des subventions des IRSC et le CRSNG du Canada. VIT est une nouvelle chercheuse des IRSC et président de Concordia recherche universitaire en génomique, biologie cellulaire et le vieillissement.

Matériel et méthodes Les souches de levures et de conditions de croissance La souche de type sauvage BY4742 (MATa his3Δ1 leu2Δ0 lys2Δ0 ura3Δ0) a été cultivé en milieu riche YEPD (extrait de levure 1%, 2% de peptone, glucose 2%). Les cellules ont été cultivées à 30 ° C avec rotation agitation à 200 rpm dans des erlenmeyers à un &quot;flacon de volume / moyen volume&quot; ratio de 5:1. Isolement de la fraction mitochon...

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	<li>Voet, D., Voet, J. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biochemistry.">Biochemistry.</a> , (2004).</li><li>Suen, D. -. F., Norris, K. L., Youle, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mitochondrial+dynamics+and+apoptosis.">Mitochondrial dynamics and apoptosis.</a> Genes Dev. 22, 1577-1590 (2008).</li><li>Cheng, W. C., Berman, S. B., Ivanovska, I., Jonas, E. A., Lee, S. J., Chen, Y., Kaczmarek, L. K., Pineda, F. &. a. m. p. ;. a. m. p., Hardwick, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mitochondrial+factors+with+dual+roles+in+death+and+survival.">Mitochondrial factors with dual roles in death and survival.</a> Oncogene. 25, 4697-4705 (2006).</li><li>Detmer, S. A., Chan, D. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functions+and+dysfunctions+of+mitochondrial+dynamics.">Functions and dysfunctions of mitochondrial dynamics.</a> Nat. Rev. Mol. Cell Biol. 8, 870-879 (2007).</li><li>McBride, H. M., Neuspiel, M., Wasiak, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mitochondria:+more+than+just+a+powerhouse.">Mitochondria: more than just a powerhouse.</a> Curr. Biol. 16, R551-R560 (2006).</li><li>Balaban, R. S., Nemoto, S., Finkel, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mitochondria,+oxidants,+and+aging.">Mitochondria, oxidants, and aging.</a> Cell. 120, 483-495 (2005).</li></ol>

Cette méthode permet l&#39;isolement à haut rendement des mitochondries pur à partir de cellules de levure. Les mitochondries purifiées par cette méthode sont essentiellement libres de contamination par d&#39;autres organites et conservent leur intégrité structurale et fonctionnelle après leur purification. Les rendements méthode décrite mitochondries qui sont adaptés à la cellule sans reconstitution des processus essentiels mitochondriale. Ces mitochondries très purs peuvent aussi être utilisées pour l&#...

purification of mitochondria from yeast cells

Les mitochondries sont le site principal de production d&#39;ATP au cours du métabolisme aérobie dans eucaryotes non photosynthétiques cellules<sup&gt; 1</sup&gt;. Ces organites complexes jouent également un rôle essentiel dans la mort cellulaire par apoptose<sup&gt; 2</sup&gt; La survie cellulaire,<sup&gt; 3</sup&gt;, Le développement des mammifères<sup&gt; 4</sup&gt;, Le développement neuronal et la fonction<sup&gt; 4</sup&gt;, Signalisation intracellulaire<sup&gt; 5</sup&gt;, La réglementation et la longévité<sup&gt; 6</sup&gt;. Notre compréhension de ces processus biologiques complexes contrôlés par les mitochondries s&#39;appuie sur des méthodes robustes pour évaluer leur morphologie, leurs protéines et la composition lipidique, de l&#39;intégrité de leur ADN, et leurs nombreuses fonctions vitales. La levure bourgeonnante<em&gt; Saccharomyces cerevisiae</em&gt;, Un eucaryote génétiquement et biochimiquement manipulable avec des unicellulaires génome annoté et bien définies protéome, est un précieux modèle pour étudier les mécanismes moléculaires et cellulaires impliqués dans des fonctions biologiques essentielles des mitochondries. Pour ces types d&#39;études, il est crucial d&#39;avoir des mitochondries très pure. Nous présentons ici une description détaillée d&#39;une méthode rapide et efficace pour la purification des mitochondries de levure. Cette méthode permet l&#39;isolement des mitochondries très pures qui sont essentiellement exempt de contamination par d&#39;autres organites et conservent leur intégrité structurale et fonctionnelle après leur purification. Les mitochondries purifiées par cette méthode sont adaptés à la cellule sans reconstitution des processus essentiels mitochondriale et peut être utilisé pour l&#39;analyse de la structure et les fonctions mitochondriales, mitochondriale protéome et lipidome, et l&#39;ADN mitochondrial.

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Purification of Mitochondria from Yeast Cells

Nous décrivons une méthode rapide et efficace pour la purification des mitochondries de la levure<em&gt; Saccharomyces cerevisiae</em&gt;. Cette méthode permet l&#39;isolement à haut rendement des mitochondries pures qui sont essentiellement exempt de contamination par d&#39;autres organites et conservent leur intégrité structurale et fonctionnelle après leur purification.

Purification des mitochondries de cellules de levure

Mitochondria are the main site of ATP production during aerobic metabolism in eukaryotic non-photosynthetic cells1. These complex organelles also play ...

Research

JoVE Journal

Biology

Isolation of CD4+ T cells from Mouse Lymph Nodes Using Miltenyi MACS Purification

Isolement des cellules T CD4 + des ganglions lymphatiques de souris en utilisant Miltenyi MACS Purification

Isolation of cells from the primary source is a necessary step in many more complex protocols. Miltenyi offers kits to isolate cells from several ...

Recherche

Biologie

Staining of Proteins in Gels with Coomassie G-250 without Organic Solvent and Acetic Acid

Coloration des protéines dans les gels de Coomassie G-250, sans solvant et l&#39;acide acétique organique

In classical protein staining protocols using Coomassie Brilliant Blue (CBB), solutions with high contents of toxic and flammable organic solvents ...

Purification of Progenitors from Skeletal Muscle

Purification des progéniteurs du muscle squelettique

Skeletal muscle contains multiple progenitor populations of distinct embryonic origins and developmental potential. Myogenic progenitors, usually residing ...

Chromatographic Purification of Highly Active Yeast Ribosomes

Purification chromatographique des ribosomes de levure hautement active

Eukaryotic ribosomes are much more labile as compared to their eubacterial and archael counterparts, thus posing a significant challenge to researchers.  ...

Confocal Imaging of Single Mitochondrial Superoxide Flashes in Intact Heart or In Vivo

Confocal Imaging of Single Mitochondrial Superoxide Flashes in Intact Heart or In Vivo

Imagerie confocale de simples mitochondriales superoxyde Flashs à coeur Intact ou<em&gt; In Vivo</em

Mitochondrion is a critical intracellular organelle responsible for energy production and intracellular signaling in eukaryotic systems. Mitochondrial ...

Isolation of mRNAs Associated with Yeast Mitochondria to Study Mechanisms of Localized Translation

Isolement des ARNm associés aux mitochondries de levure pour étudier les mécanismes de traduction localisée

Most of mitochondrial proteins are encoded in the nucleus and need to be imported into the organelle. Import may occur while the protein is synthesized ...

Rapid Isolation And Purification Of Mitochondria For Transplantation By Tissue Dissociation And Differential Filtration

Isolement rapide et la purification des mitochondries pour la transplantation par la dissociation des tissus et différencié Filtration

Previously described mitochondrial isolation methods using differential centrifugation and/or Ficoll gradient centrifugation require 60 to 100 min to ...

Isolation and Functional Analysis of Mitochondria from Cultured Cells and Mouse Tissue

Isolement et analyse fonctionnelle des mitochondries de cellules cultivées et de tissus de souris

Comparison between two or more distinct groups, such as healthy vs. disease, is necessary to determine cellular status. Mitochondria are at the nexus of ...

Genome-wide Purification of Extrachromosomal Circular DNA from Eukaryotic Cells

Purification de l&#39;ensemble du génome de l&#39;ADN extrachromosomique circulaire à partir de cellules eucaryotes

Extrachromosomal circular DNAs (eccDNAs) are common genetic elements in Saccharomyces cerevisiae and are reported in other eukaryotes as well. EccDNAs ...

MitoCeption: Transferring Isolated Human MSC Mitochondria to Glioblastoma Stem Cells

MitoCeption: Transfert humain isolé MSC mitochondries à glioblastome cellules souches

Mitochondria play a central role for cell metabolism, energy production and control of apoptosis. Inadequate mitochondrial function has been found ...