Name: purification of mitochondria from yeast cells
Uploaded: 2009-08-24T16:00:00
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Questo lavoro è stato sostenuto dalle concessioni dal CIHR e la NSERC del Canada. VIT è un investigatore CIHR New Research Chair e Concordia University di Genomica, Biologia Cellulare e invecchiamento.

Materiali e metodi Ceppi di lievito e le condizioni di crescita Il ceppo selvatico BY4742 (MATα his3Δ1 leu2Δ0 lys2Δ0 ura3Δ0) era cresciuto in media ricca YEPD (1 estratto di lievito%, 2% peptone, 2% di glucosio). Le cellule sono state coltivate a 30 ° C con agitazione di rotazione a 200 rpm in beute con un rapporto &quot;fiasco volume / medio volume&quot; di 5:1. Isolamento del greggio frazione mitocondriale <ol><li> Cresc...

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	<li>Voet, D., Voet, J. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biochemistry.">Biochemistry.</a> , (2004).</li><li>Suen, D. -. F., Norris, K. L., Youle, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mitochondrial+dynamics+and+apoptosis.">Mitochondrial dynamics and apoptosis.</a> Genes Dev. 22, 1577-1590 (2008).</li><li>Cheng, W. C., Berman, S. B., Ivanovska, I., Jonas, E. A., Lee, S. J., Chen, Y., Kaczmarek, L. K., Pineda, F. &. a. m. p. ;. a. m. p., Hardwick, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mitochondrial+factors+with+dual+roles+in+death+and+survival.">Mitochondrial factors with dual roles in death and survival.</a> Oncogene. 25, 4697-4705 (2006).</li><li>Detmer, S. A., Chan, D. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functions+and+dysfunctions+of+mitochondrial+dynamics.">Functions and dysfunctions of mitochondrial dynamics.</a> Nat. Rev. Mol. Cell Biol. 8, 870-879 (2007).</li><li>McBride, H. M., Neuspiel, M., Wasiak, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mitochondria:+more+than+just+a+powerhouse.">Mitochondria: more than just a powerhouse.</a> Curr. Biol. 16, R551-R560 (2006).</li><li>Balaban, R. S., Nemoto, S., Finkel, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mitochondria,+oxidants,+and+aging.">Mitochondria, oxidants, and aging.</a> Cell. 120, 483-495 (2005).</li></ol>

Questo metodo consente ad alto rendimento puro isolamento dei mitocondri da cellule di lievito. I mitocondri purificati con questo metodo sono essenzialmente priva di contaminazione da parte di altri organuli e mantengono la loro integrità strutturale e funzionale dopo la loro purificazione. I rendimenti metodo descritto mitocondri che sono adatti per cell-free ricostituzione di processi essenziali mitocondriale. Questi mitocondri elevata purezza può essere utilizzato anche per l&#39;analisi della struttura e delle fu...

purification of mitochondria from yeast cells

I mitocondri sono la sede principale della produzione di ATP durante il metabolismo aerobico in eucarioti fotosintetici non-cellule<sup&gt; 1</sup&gt;. Questi organelli complessi giocano un ruolo essenziale anche nella morte cellulare per apoptosi<sup&gt; 2</sup&gt;, Cellula di sopravvivenza<sup&gt; 3</sup&gt;, Lo sviluppo dei mammiferi<sup&gt; 4</sup&gt;, Lo sviluppo e la funzione neuronale<sup&gt; 4</sup&gt;, Di segnalazione intracellulare<sup&gt; 5</sup&gt;, E la longevità regolamento<sup&gt; 6</sup&gt;. La nostra comprensione di questi complessi processi biologici controllati dai mitocondri si basa su metodi affidabili per valutare la loro morfologia, la loro composizione proteica e lipidica, l&#39;integrità del loro DNA, e le loro numerose funzioni vitali. Il lievito in erba<em&gt; Saccharomyces cerevisiae</em&gt;, Un organismo geneticamente e biochimicamente eucarioti unicellulari manipolabili con genoma annotati e ben definite proteoma, è un modello valido per lo studio dei meccanismi molecolari e cellulari alla base essenziali funzioni biologiche dei mitocondri. Per questi tipi di studi, è fondamentale avere mitocondri altamente puro. Presentiamo qui una descrizione dettagliata di un metodo rapido ed efficace per la depurazione di lievito mitocondri. Questo metodo consente l&#39;isolamento di mitocondri altamente puri, che sono essenzialmente priva di contaminazione da parte di altri organuli e mantengono la loro integrità strutturale e funzionale dopo la loro purificazione. I mitocondri purificati con questo metodo sono adatti per cell-free ricostituzione di processi essenziali mitocondriale e può essere utilizzato per l&#39;analisi della struttura e delle funzioni mitocondriali, proteoma mitocondriale e lipidome, e del DNA mitocondriale.

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Purification of Mitochondria from Yeast Cells

Descriviamo un metodo rapido ed efficace per la purificazione dei mitocondri dal lievito<em&gt; Saccharomyces cerevisiae</em&gt;. Questo metodo consente ad alto rendimento puro isolamento di mitocondri che sono essenzialmente privo di contaminazione da parte di altri organuli e mantengono la loro integrità strutturale e funzionale dopo la loro purificazione.

Purificazione dei mitocondri da cellule di lievito

Mitochondria are the main site of ATP production during aerobic metabolism in eukaryotic non-photosynthetic cells1. These complex organelles also play ...

Research

JoVE Journal

Biology

Isolation of CD4+ T cells from Mouse Lymph Nodes Using Miltenyi MACS Purification

Isolamento di cellule T CD4 + da Linfonodi mouse utilizzando Miltenyi Purificazione MACS

Isolation of cells from the primary source is a necessary step in many more complex protocols. Miltenyi offers kits to isolate cells from several ...

Ricerca

Biologia

Staining of Proteins in Gels with Coomassie G-250 without Organic Solvent and Acetic Acid

La colorazione delle proteine ​​in gel con Coomassie G-250, senza solventi organici acido acetico e

In classical protein staining protocols using Coomassie Brilliant Blue (CBB), solutions with high contents of toxic and flammable organic solvents ...

Purification of Progenitors from Skeletal Muscle

Purificazione di progenitori dal muscolo scheletrico

Skeletal muscle contains multiple progenitor populations of distinct embryonic origins and developmental potential. Myogenic progenitors, usually residing ...

Chromatographic Purification of Highly Active Yeast Ribosomes

Purificazione cromatografica dei ribosomi di lievito Highly Active

Eukaryotic ribosomes are much more labile as compared to their eubacterial and archael counterparts, thus posing a significant challenge to researchers.  ...

Confocal Imaging of Single Mitochondrial Superoxide Flashes in Intact Heart or In Vivo

Confocal Imaging of Single Mitochondrial Superoxide Flashes in Intact Heart or In Vivo

Imaging confocale delle singole mitocondriali superossido illumina di cuore intatto o<em&gt; In Vivo</em

Mitochondrion is a critical intracellular organelle responsible for energy production and intracellular signaling in eukaryotic systems. Mitochondrial ...

Isolation of mRNAs Associated with Yeast Mitochondria to Study Mechanisms of Localized Translation

Isolamento di mRNA associati con mitocondri di lievito per studiare i meccanismi di traduzione localizzata

Most of mitochondrial proteins are encoded in the nucleus and need to be imported into the organelle. Import may occur while the protein is synthesized ...

Rapid Isolation And Purification Of Mitochondria For Transplantation By Tissue Dissociation And Differential Filtration

Isolamento rapida e purificazione di mitocondri per il trapianto da tessuto Dissociazione e Filtrazione Differenziale

Previously described mitochondrial isolation methods using differential centrifugation and/or Ficoll gradient centrifugation require 60 to 100 min to ...

Isolation and Functional Analysis of Mitochondria from Cultured Cells and Mouse Tissue

Isolamento e analisi funzionale dei mitocondri da cellule in coltura e Tissue mouse

Comparison between two or more distinct groups, such as healthy vs. disease, is necessary to determine cellular status. Mitochondria are at the nexus of ...

Genome-wide Purification of Extrachromosomal Circular DNA from Eukaryotic Cells

Purificazione genoma a livello di extrachromosomal circolare DNA dalle cellule eucariotiche

Extrachromosomal circular DNAs (eccDNAs) are common genetic elements in Saccharomyces cerevisiae and are reported in other eukaryotes as well. EccDNAs ...

MitoCeption: Transferring Isolated Human MSC Mitochondria to Glioblastoma Stem Cells

MitoCeption: Trasferimento isolato umana MSC mitocondri di Glioblastoma cellule staminali

Mitochondria play a central role for cell metabolism, energy production and control of apoptosis. Inadequate mitochondrial function has been found ...