Name: purification of mitochondria from yeast cells
Uploaded: 2009-08-24T16:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Purification of Mitochondria from Yeast Cells at JoVE.com

Detta arbete har finansierats med bidrag från CIHR och NSERC av Kanada. VIT är en CIHR ny undersökare och Concordia University forskning ordförande i genomik, cellbiologi och åldrande.

Material och metoder Jäststammar och villkor tillväxt Den vildtyp stam BY4742 (MATα his3Δ1 leu2Δ0 lys2Δ0 ura3Δ0) odlades i rika YEPD medelhög (1% jästextrakt, 2% pepton, 2% glukos). Cellerna odlades vid 30 ° C med roterande skaka vid 200 rpm i E-kolvar på en &quot;kolv volym / medelhög volym&quot; förhållandet 5:1. Isolering av råolja mitokondriella fraktionen <ol><li> Odla ett L i vildtyp stam BY4742 kultur för ...

<ol>
	<li>Voet, D., Voet, J. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biochemistry.">Biochemistry.</a> , (2004).</li><li>Suen, D. -. F., Norris, K. L., Youle, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mitochondrial+dynamics+and+apoptosis.">Mitochondrial dynamics and apoptosis.</a> Genes Dev. 22, 1577-1590 (2008).</li><li>Cheng, W. C., Berman, S. B., Ivanovska, I., Jonas, E. A., Lee, S. J., Chen, Y., Kaczmarek, L. K., Pineda, F. &. a. m. p. ;. a. m. p., Hardwick, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mitochondrial+factors+with+dual+roles+in+death+and+survival.">Mitochondrial factors with dual roles in death and survival.</a> Oncogene. 25, 4697-4705 (2006).</li><li>Detmer, S. A., Chan, D. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functions+and+dysfunctions+of+mitochondrial+dynamics.">Functions and dysfunctions of mitochondrial dynamics.</a> Nat. Rev. Mol. Cell Biol. 8, 870-879 (2007).</li><li>McBride, H. M., Neuspiel, M., Wasiak, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mitochondria:+more+than+just+a+powerhouse.">Mitochondria: more than just a powerhouse.</a> Curr. Biol. 16, R551-R560 (2006).</li><li>Balaban, R. S., Nemoto, S., Finkel, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mitochondria,+oxidants,+and+aging.">Mitochondria, oxidants, and aging.</a> Cell. 120, 483-495 (2005).</li></ol>

Denna metod gör att den högavkastande isolering av rena mitokondrier från jästceller. Mitokondrier renas genom denna metod är i huvudsak fri från föroreningar av andra organeller och behålla sina strukturella och funktionella integritet efter rening. Den beskrivna metoden ger mitokondrier som är lämpliga för cellfria beredning av viktiga mitokondriella processer. Dessa mycket rena mitokondrier kan också användas för analys av mitokondrie-struktur och funktioner, mitokondrie Proteome och lipidome, och mitok...

purification of mitochondria from yeast cells

Mitokondrierna är den största anläggningen av ATP produktion under aerob metabolism i eukaryota icke-fotosyntetiserande celler<sup&gt; 1</sup&gt;. Dessa komplexa organeller spelar också viktiga roller i apoptotiska celldöd<sup&gt; 2</sup&gt;, Cellöverlevnad<sup&gt; 3</sup&gt;, Däggdjur utveckling<sup&gt; 4</sup&gt;, Neuronal utveckling och funktion<sup&gt; 4</sup&gt;, Intracellulär signalering<sup&gt; 5</sup&gt;, Och livslängd reglering<sup&gt; 6</sup&gt;. Vår förståelse av dessa komplexa biologiska processer styrs av mitokondrier bygger på robusta metoder för att bedöma deras morfologi, deras protein och fett sammansättning, integriteten i deras DNA, och deras många vitala funktioner. Den spirande jäst<em&gt; Saccharomyces cerevisiae</em&gt;, Är en genetiskt och biokemiskt bökbart encelliga eukaryota med kommenterade genomet och väldefinierade Proteome, en värdefull modell för att studera molekylära och cellulära mekanismer som ligger bakom viktiga biologiska funktioner i mitokondrier. För dessa typer av studier är det viktigt att ha mycket rena mitokondrier. Här presenterar vi en detaljerad beskrivning av en snabb och effektiv metod för rening av jäst mitokondrier. Denna metod möjliggör isolering av mycket rena mitokondrier som är väsentligen fri från föroreningar av andra organeller och behålla sina strukturella och funktionella integritet efter rening. Mitokondrier renas genom denna metod är lämpliga för cellfria beredning av viktiga mitokondrie-processer och kan användas för analys av mitokondrie-struktur och funktioner, mitokondrie Proteome och lipidome, och mitokondrie-DNA.

Watch this Scientific Journal Video about Purification of Mitochondria from Yeast Cells at JoVE.com

Purification of Mitochondria from Yeast Cells

Vi beskriver en snabb och effektiv metod för rening av mitokondrier från jästen<em&gt; Saccharomyces cerevisiae</em&gt;. Denna metod gör att den högavkastande isolering av ren mitokondrier som är väsentligen fri från föroreningar av andra organeller och behålla sina strukturella och funktionella integritet efter rening.

Rening av mitokondrier från jästceller

Mitochondria are the main site of ATP production during aerobic metabolism in eukaryotic non-photosynthetic cells1. These complex organelles also play ...

Research

JoVE Journal

Biology

Isolation of CD4+ T cells from Mouse Lymph Nodes Using Miltenyi MACS Purification

Isolering av CD4 + T-celler från Noder Mus Lymph Använda Miltenyi MACS Rening

Isolation of cells from the primary source is a necessary step in many more complex protocols. Miltenyi offers kits to isolate cells from several ...

Staining of Proteins in Gels with Coomassie G-250 without Organic Solvent and Acetic Acid

Färgning av proteinerna i geler med Coomassie G-250 utan organiska lösningsmedel och ättiksyra

In classical protein staining protocols using Coomassie Brilliant Blue (CBB), solutions with high contents of toxic and flammable organic solvents ...

Purification of Progenitors from Skeletal Muscle

Rening av stamceller från skelettmuskulatur

Skeletal muscle contains multiple progenitor populations of distinct embryonic origins and developmental potential. Myogenic progenitors, usually residing ...

Chromatographic Purification of Highly Active Yeast Ribosomes

Kromatografiska Rening av högaktiv Jäst Ribosomer

Eukaryotic ribosomes are much more labile as compared to their eubacterial and archael counterparts, thus posing a significant challenge to researchers.  ...

Confocal Imaging of Single Mitochondrial Superoxide Flashes in Intact Heart or In Vivo

Confocal Imaging of Single Mitochondrial Superoxide Flashes in Intact Heart or In Vivo

Confocal avbildning av Single Mitochondrial Superoxid Blinkar i intakt hjärta eller<em&gt; In Vivo</em

Mitochondrion is a critical intracellular organelle responsible for energy production and intracellular signaling in eukaryotic systems. Mitochondrial ...

Isolation of mRNAs Associated with Yeast Mitochondria to Study Mechanisms of Localized Translation

Isolering av mRNA associerad med jäst Mitokondrier att studera mekanismer för lokal Översättning

Most of mitochondrial proteins are encoded in the nucleus and need to be imported into the organelle. Import may occur while the protein is synthesized ...

Rapid Isolation And Purification Of Mitochondria For Transplantation By Tissue Dissociation And Differential Filtration

Snabb Isolering och rening av Mitokondrier För Transplantation Av vävnadsdissociering Och Differential Filtration

Previously described mitochondrial isolation methods using differential centrifugation and/or Ficoll gradient centrifugation require 60 to 100 min to ...

Isolation and Functional Analysis of Mitochondria from Cultured Cells and Mouse Tissue

Isolering och Funktionell analys av mitokondrier från odlade celler och mus Tissue

Comparison between two or more distinct groups, such as healthy vs. disease, is necessary to determine cellular status. Mitochondria are at the nexus of ...

Genome-wide Purification of Extrachromosomal Circular DNA from Eukaryotic Cells

Genomvid Rening av extrakromosomala cirkulär DNA från eukaryota celler

Extrachromosomal circular DNAs (eccDNAs) are common genetic elements in Saccharomyces cerevisiae and are reported in other eukaryotes as well. EccDNAs ...

MitoCeption: Transferring Isolated Human MSC Mitochondria to Glioblastoma Stem Cells

MitoCeption: Överföra isolerat humant MSC Mitokondrier till Glioblastoma stamceller

Mitochondria play a central role for cell metabolism, energy production and control of apoptosis. Inadequate mitochondrial function has been found ...