Name: tissue targeted embryonic chimeras: zebrafish gastrula cell transplantation
Uploaded: 2009-09-11T16:30:00
Duration: 18 min 57 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Tissue Targeted Embryonic Chimeras: Zebrafish Gastrula Cell Transplantation at JoVE.com

Мы хотели бы поблагодарить членов Barresi Лаборатории за поддержку и полезные замечания по этой рукописи. Мы благодарим Александра рабочего за постоянную техническую помощь, а также персонал по уходу за животными за помощь в поддержании Smith College данио рерио колонии. Мы также благодарим Майк Hallacy Руди Rottenfusser и Carl Zeiss Microimaging для кредитования некоторых микроскопия оборудование для filmin этого протокола. Эта работа была поддержана NSF финансируемых исследовательский грант, 0615594.

<ol>
	<li>Westerfield, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+guide+for+the+laboratory+use+of+zebrafish+(Danio.">A guide for the laboratory use of zebrafish (Danio.</a> The Zebrafish Book. , (2007).</li><li>N&#252;sslein-Volhard, C., Dahm, R. e. d. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Zebrafish+A+Practical+Approach.">Zebrafish A Practical Approach.</a> , (2002).</li><li>Graeden, E., Sive, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Live+imaging+of+the+zebrafish+embryonic+brain+by+confocal+microscopy.">Live imaging of the zebrafish embryonic brain by confocal microscopy.</a> J Vis Exp. (26), (2009).</li><li>Gilmour, D. T., Jessen, J. R., Lin, S., N&#252;sslein-Volhard, C., Dahm, R. e. d. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Zebrafish,+a+practical+approach.">Zebrafish, a practical approach.</a> 1, 121-121 (2002).</li><li>Woo, K., Shih, J., Fraser, S. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fate+maps+of+the+zebrafish+embryo.">Fate maps of the zebrafish embryo.</a> Curr Opin Genet Dev. 5 (4), 439-439 (1995).</li><li>Barresi, M. J., Hutson, L. D., Chien, C. B., Karlstrom, R. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hedgehog+regulated+Slit+expression+determines+commissure+and+glial+cell+position+in+the+zebrafish+forebrain.">Hedgehog regulated Slit expression determines commissure and glial cell position in the zebrafish forebrain.</a> Development. 132 (16), 3643-3643 (2005).</li><li>Kozlowski, D. J., Murakami, T., Ho, R. K., Weinberg, E. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regional+cell+movement+and+tissue+patterning+in+the+zebrafish+embryo+revealed+by+fate+mapping+with+caged+fluorescein.">Regional cell movement and tissue patterning in the zebrafish embryo revealed by fate mapping with caged fluorescein.</a> Biochem Cell Biol. 75 (5), 551-551 (1997).</li><li>Halloran, M. C., Murakami, T., Ho, R. K., Weinberg, E. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Laser-induced+gene+expression+in+specific+cells+of+transgenic+zebrafish.">Laser-induced gene expression in specific cells of transgenic zebrafish.</a> Development. 127 (9), 1953-1953 (2000).</li><li>Hardy, M. E., Ross, L. V., Chien, C. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Focal+gene+misexpression+in+zebrafish+embryos+induced+by+local+heat+shock+using+a+modified+soldering+iron.">Focal gene misexpression in zebrafish embryos induced by local heat shock using a modified soldering iron.</a> Dev Dyn. 236 (11), 3071-3071 (2007).</li></ol>

The authors have nothing to disclose.

Создание химерных эмбрионов мощный инструмент, который решает многие вопросы исследования в течение нескольких модельных системах, а именно плодовой мушки (D.melanogaster), червей (C.elegans), данио (D.rerio) и мыши (M.musculus). Мы утверждаем, что система данио модели уникально подходит для создания химер в относительно простой, быстрый и универсальный способ. Данио является позвоночных, которая развивается вне матери делает его значительно более доступным по сравнению с мышиной моделью. Данио рерио также значительно больше, чем мух или червей, что упрощает эмбриологических манипуляций, таких как сотовые трансплантации. Кроме того, способность сочетать процедуры клеточной трансплантации с трансгенными методами позволяет большой массив возможных экспериментов, в которых функции гена можно манипулировать в локализованной тканеспецифические образом. Например, маленькие клоны GFP + или родамина меченых клеток позволяют характеристика полной морфологии ячейки, которые часто теряются в гомозиготных трансгенных донора или невозможны для визуализации из-за дифференциального субклеточных маркировки с общими антител. Кроме того, с помощью transgenically тегами или флуоресцентно заполненные ячейки, мы можем отследить донорских клеток в живых эмбрионов данио с течением времени. Timelapse визуализации отдельных клеток предлагает новый анализ клеточного поведения в контексте всего организма. Наша лаборатория также сочетает в себе использование теплового шока индуцибельной трансгенных линий с клеточной трансплантации, что определенные сигналы руководством аксон может быть misexpressed в донорских клеток после возвышения в температуры инкубации (данные не показывают). Эта техника очень мощный и прямой подход к локально misexpress белка интереса к пространственной и временной, определенным образом, который позволяет нам увидеть, как специфического белка влияет на развитие. В нашем случае этот метод может расширить наши знания за функцией слит-Robo сигналы руководства в позиционировании спаек и глиальных клеток в средней линии 5. Другие подходы к локально misexpressing генов, таких как фокусное uncaging УФ и локализованные инструменты heatshock (лазерная или паяльником), предлагают альтернативные способы манипулирования экспрессию генов и маркеров в небольшой группе клеток, 7-9, однако клеточной трансплантации устанавливает Окончательный анализ среды, свободной от какой-либо травмы, индуцированных УФ, лазерной или тепла принятия клеточной трансплантации более контролируемой экспериментальный подход. В заключение, мы нашли процедуры клеточной трансплантации быть важной частью нашей нервной исследования биологии. Создание клонов клеток с различными свойствами, является важным инструментом для развития биологии в решении фундаментальных вопросов клеточной поведения, функции генов и клеточной автономии.

<table border="1" cellspacing="0" cellpadding="0"><tbody><tr><td> Имя </td><td> Тип </td><td> Компания </td><td> Номер в каталоге </td><td> Особенности </td></tr><tr><td> Чашки Петри </td><td> Инструмент </td><td> Fisherbrand </td><td> 08-757-13 </td><td> 100 х 15 мм </td></tr><tr><td> Стеклянные пластины нижней культуры </td><td> Инструмент </td><td> Маттек </td><td> P35G-1.5-2.0-C </td><td> 35 х 15 мм, № 1,5, без покрытия, гамма-облучении </td></tr><tr><td> Широкие отверстия стекла Пастера пипец </td><td> Инструмент </td><td> Fisherbrand </td><td> 63А-53-WT </td><td></td></tr><tr><td> Стекло нить капилляры для корыта формы (без шнура) и инъекционных игл (с нитью) </td><td> Инструмент </td><td> Инструменты Всемирного Precision </td><td> 1B150F-4 </td><td> 4 дюйма (100 мм), 1,5 / 0,84 OD / ID (мм) </td></tr><tr><td> Пересадка Капилляры (TransferTip) </td><td> Инструмент </td><td> Эппендорф </td><td> 83000122-8 </td><td> Тип IV, стерильные, Int. 15 мкм; 20 градусов изгиб </td></tr><tr><td> Пересадка плесень </td><td> Инструмент </td><td> Адаптивная науки Инструменты </td><td> PT-1 </td><td> 150 треугольных дерн провести отдельные эмбрионов </td></tr><tr><td> Агарозы, Тип I </td><td> Реагент </td><td> Sigma Aldrich </td><td> A6013-250G </td><td> 1,5% агарозном сделаны в EM </td></tr><tr><td> (Антибиотик) эмбрионов среднего </td><td> Реагент </td><td></td><td></td><td> Смотрите Уэстерфилд, 2007 </td></tr><tr><td> Фосфатного буфера </td><td> Реагент </td><td></td><td></td><td> Смотрите Уэстерфилд, 2007 </td></tr><tr><td> Сторож Пинцет </td><td> Инструмент </td><td> Инструменты изобразительных наук </td><td></td><td> 100 + мм наконечником (тусклый), 50 мм наконечником </td></tr><tr><td> Родамина Б Декстран </td><td> Lineage трассирующими красителя </td><td> Молекулярные зонды, Invitrogen </td><td> D1824 </td><td> 10000 МВт Да, лизин-поправимо, красный (590nm) флуоресцентного красителя волнует зеленый (570nm) свет </td></tr><tr><td> Препаровальная лупа </td><td> Микроскоп </td><td> Олимп </td><td> SZX7 </td><td></td></tr><tr><td> Флуоресцентные Стереомикроскоп </td><td> Микроскоп </td><td> Zeiss </td><td> LUMAR </td><td> Полностью автоматизированная Джойстик Контролируемые (Sycop) </td></tr><tr><td> Пересадка аппарата </td><td> Инструмент </td><td> Эппендорф корпорации </td><td> AirTram </td><td></td></tr><tr><td> Автоматизированная микроманипулятора </td><td> Инструмент </td><td> Эппендорф корпорации </td><td> TransferMan NK2 </td><td> Джойстик Контролируемые </td></tr><tr><td> Микроманипулятор </td><td> Инструмент </td><td> Прикладных научных Instruments, Inc </td><td> 00-42-101-0000 </td><td> MM33 правой </td></tr><tr><td> Microinjector с задним удельное давление </td><td> Инструмент </td><td> Прикладных научных Instruments, Inc </td><td> ИПМТ-2 ГПП </td><td></td></tr><tr><td> Flamming / коричневый микропипеткой Puller </td><td> Инструмент </td><td> Саттер Instrument Company </td><td> Модель P97 </td><td> Программа: Тепло 550; Скорость 200; Время / Задержка 200; Вытяните силы 120. </td></tr></tbody></table>

tissue targeted embryonic chimeras: zebrafish gastrula cell transplantation

Некоторые фундаментальные вопросы в области биологии развития можно будет ответить только тогда, когда клетки помещают в романе средах или при небольших групп клеток в более широком контексте меняются. Наблюдая, как одна клетка взаимодействует и ведет себя в уникальной природной среды имеет важное значение для характеристики клеточных функций. Определение того, как локализованные misexpression конкретного влияния белка окружающие клетки обеспечивает глубокую информацию о роли, которую играет протеин в различных процессов развития. Наша лаборатория использует данио модели системы однозначно объединить генетические подходы с классическими методами трансплантации для получения генотипических или фенотипических химеры. Мы изучаем нейрон-глиальных взаимодействий клетка в процессе формирования переднего мозга спайки в данио. Это видео описывает метод, который позволяет нашей лаборатории, чтобы исследовать роль астроглиального населения в промежуточном мозге и роли конкретных сигналов руководства, которые влияют на проектирование аксонов при пересечении средней линии. Из-за их эмбрионов данио прозрачность являются идеальными моделями для этого типа внематочной размещения ячейки или локализованные misexpression гена. Отслеживание пересаженных клеток может быть выполнена с использованием жизненно важных красителя или трансгенной линии рыбы выражения флуоресцентного белка. Мы демонстрируем здесь, как подготовить доноров эмбрионов с жизненно трассирующими краситель для трансплантации, а также, как извлекать и пересаживать клетки от одного гаструлы поставил эмбриона другой. Мы приводим данные, показывающие, внематочной GFP + трансгенных клеток в переднем мозге эмбрионов данио из и характеризуют расположение этих клеток относительно переднего мозга спайки. Кроме того, мы показываем лазерной сканирующей конфокальной микроскопии timelapse от Alexa 594 меченые клетки пересаживают в GFP + трансгенных эмбрионов хоста. Эти данные свидетельствуют, что гаструлы поставил трансплантации позволяет целевого позиционирования внематочной клетки для решения различных вопросов в биологии развития.

Watch this Scientific Journal Video about Tissue Targeted Embryonic Chimeras: Zebrafish Gastrula Cell Transplantation at JoVE.com

Tissue Targeted Embryonic Chimeras: Zebrafish Gastrula Cell Transplantation

Данио рерио клеточной трансплантации позволяет сочетание генетики и эмбриологии для создания ткани конкретных химеры. Это видео демонстрирует гаструлы поставил ячейки трансплантаций, которые позволили нашей лаборатории для исследования роли астроглиального населения или отдельные сигналы руководство во время спайки образование в переднем мозге.

Эмбриональные ткани Целевые химерами: данио рерио Гаструла клеточной трансплантации

Certain fundamental questions in the field of developmental biology can only be answered when cells are placed in novel environments or when small groups ...

Research

JoVE Journal

Biology

Transplantation of Whole Kidney Marrow in Adult Zebrafish

Трансплантация почки Всего мозга у взрослых данио рерио

Hematopoietic stem cells (HSC) are a rare population of pluripotent cells that maintain all the differentiated blood lineages throughout the life of an ...

Actin Co-Sedimentation Assay; for the Analysis of Protein Binding to F-Actin

Актина сотрудничества седиментации Пробирной; для анализа связывание белка с F-актин

The actin cytoskeleton within the cell is a network of actin filaments that allows the movement of cells and cellular processes, and that generates ...

Generating Chimeric Zebrafish Embryos by Transplantation

Создание химерных эмбрионов данио рерио по трансплантации

One of the most powerful tools used to gain insight into complex developmental processes is the analysis of chimeric embryos. A chimera is defined as an ...

Microdissection of Zebrafish Embryonic Eye Tissues

Микродиссекции данио рерио эмбриональных тканей глаз

Zebrafish is a popular animal model for research on eye development because of its rapid ex utero development and good fecundity. By 3 days post ...

Dechorionation of Medaka Embryos and Cell Transplantation for the Generation of Chimeras

Dechorionation эмбрионов оризии и клеточной трансплантации для генерации химерами

Medaka is a small egg-laying freshwater fish that allows both genetic and embryological analyses and is one of the three vertebrate model organisms in ...

Multicolor Time-lapse Imaging of Transgenic Zebrafish: Visualizing Retinal Stem Cells Activated by Targeted Neuronal Cell Ablation

Многоцветный Покадровый изображений трансгенных данио рерио: Визуализация сетчатки стволовых клеток, активированных нейронов Целевые абляция сотовый

High-resolution time-lapse imaging of living zebrafish larvae can be utilized to visualize how biological processes unfold (for review see 1). Compound ...

Primary Cell Cultures from Drosophila Gastrula Embryos

Primary Cell Cultures from Drosophila Gastrula Embryos

Первичных клеточных культур из Drosophila Гаструла Эмбрионы

Here we describe a method for preparing and culturing primary cells dissociated from Drosophila gastrula embryos.   In brief, a large amount of staged ...

Transplantation of Cells Directly into the Kidney of Adult Zebrafish

Трансплантация клеток непосредственно в почках взрослых данио рерио

Regenerative medicine based on the transplantation of stem or progenitor cells into damaged tissues has the potential to treat a wide range of chronic ...

Quantifying the Frequency of Tumor-propagating Cells Using Limiting Dilution Cell Transplantation in Syngeneic Zebrafish

Количественная Частота опухолей, распространяющихся ячеек с использованием Ограничение трансплантации Разбавление сотовый в сингенных данио рерио

Self-renewing cancer cells are the only cell types within a tumor that have an unlimited ability to promote tumor growth, and are thus known as ...

Immunostaining of Dissected Zebrafish Embryonic Heart

Иммуноокрашивание расчлененного данио рерио Эмбриональные сердца

Zebrafish embryo becomes a popular in vivo vertebrate model for studying cardiac development and human heart diseases due to its advantageous embryology ...