Name: fluorescent labeling of drosophila heart structures
Uploaded: 2009-10-13T23:30:00
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Os autores agradecem SI Bernstein (San Diego State University) para a leitura crítica e sugestões úteis sobre a preparação deste manuscrito. Este trabalho foi financiado pelo NIH concede a SI Bernstein, SDSU, e de R. Bodmer, BIMR, e por uma bolsa de pós-doutorado da filial dos Estados do Oeste da Associação Americana do Coração para G. Vogler e A. Cammarato.

Antes de começar a <ol><li> Prepare as seguintes soluções: <ol class="lalpha"><li> buffer de relaxamento (artificial Drosophila hemolinfa (ADH) (ver &quot;Visualizando o coração batendo em Drosophila&quot;) que contém 10 mM EGTA) </li><li> fixador (formaldeído 4% em PBS 1x) </li><li> PBSTx (PBS contendo 0,1% Triton-X-100) </li><li> Apropriadamente diluída primário e espécie-específicos fluorescente etiquetado anticorpos secundários em PBSTx </li></ol></li><li> Dissecar <e...

<ol>
	<li>Brent, J. R., Werner, K. M., McCabe, B. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Drosophila+larval+NMJ+dissection.">Drosophila larval NMJ dissection.</a> J Vis Exp. , (2009).</li><li>Molina, M. R., Cripps, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ostia,+the+inflow+tracts+of+the+Drosophila+heart,+develop+from+a+genetically+distinct+subset+of+cardial+cells.">Ostia, the inflow tracts of the Drosophila heart, develop from a genetically distinct subset of cardial cells.</a> Mech Dev. 1, 51-59 (2001).</li><li>Dulcis, D., Levine, R. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Glutamatergic+innervation+of+the+heart+initiates+retrograde+contractions+in+adult+Drosophila+melanogaster.">Glutamatergic innervation of the heart initiates retrograde contractions in adult Drosophila melanogaster.</a> J Neurosci. 2, 271-280 (2005).</li><li>Zeitouni, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Signalling+pathways+involved+in+adult+heart+formation+revealed+by+gene+expression+profiling+in+Drosophila.">Signalling pathways involved in adult heart formation revealed by gene expression profiling in Drosophila.</a> PLoS Genet. 10, 1907-1921 (2007).</li><li>Robertson, C. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+metamorphosis+of+Drosophila+melanogaster,+including+an+accurately+timed+account+of+the+principal+morphological+change.">The metamorphosis of Drosophila melanogaster, including an accurately timed account of the principal morphological change.</a> J. Morphol. 2, 351-399 (1936).</li><li>Miller, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> The internal anatomy and histology of the imago of Drosophila melanogaster. , (1950).</li><li>Rizki, T. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+circulatory+system+and+associated+cells+and+tissues.">The circulatory system and associated cells and tissues.</a> , (1978).</li><li>Cammarato, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Myosin+transducer+mutations+differentially+affect+motor+function,+myofibril+structure,+and+the+performance+of+skeletal+and+cardiac+muscles.">Myosin transducer mutations differentially affect motor function, myofibril structure, and the performance of skeletal and cardiac muscles.</a> Mol Biol Cell. 2, 553-562 (2008).</li><li>Taghli-Lamallem, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dystrophin+deficiency+in+Drosophila+reduces+lifespan+and+causes+a+dilated+cardiomyopathy+phenotype.">Dystrophin deficiency in Drosophila reduces lifespan and causes a dilated cardiomyopathy phenotype.</a> Aging Cell. 2, 237-249 (2008).</li><li>Kelso, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=a+database+documenting+a+GFP+protein-trap+insertion+screen+in+Drosophila+melanogaster.">a database documenting a GFP protein-trap insertion screen in Drosophila melanogaster.</a> Nucleic Acids Res. 32, D418-D420 (2004).</li><li>Dietzl, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+genome-wide+transgenic+RNAi+library+for+conditional+gene+inactivation+in+Drosophila.">A genome-wide transgenic RNAi library for conditional gene inactivation in Drosophila.</a> Nature. 7150, 151-156 (2007).</li><li>Mery, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Drosophila+muscle+LIM+protein,+Mlp84B,+is+essential+for+cardiac+function.">The Drosophila muscle LIM protein, Mlp84B, is essential for cardiac function.</a> J Exp Biol. 211, 15-23 (2008).</li></ol>

Aqui apresentamos um protocolo útil para preparar e coloração da Drosophila melanogaster vaso dorsal e dos tecidos adjacentes para geração de imagens através de microscopia fluorescente ou confocal. Nós fornecemos um relato conciso dos passos refinado por e comumente empregado em nosso laboratório para a coloração eficaz que permite a bem-resolvido em imagens in situ de larvas e tubos coração adulto Drosophila. Outros descreveram métodos similares de forma abreviada ...

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		<div>
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		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>Ethylene glycol-bis (2-amino-ethylether) -N,N,N&#x2019;,N&#x2019;-tetra-acetic acid (EGTA)</td>
<td>Reagent</td>
<td>Sigma-Aldrich&reg;</td>
<td>E4378</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Formaldehyde, 10%, methanol free, Ultra Pure</td>
<td>Reagent</td>
<td>Polysciences Inc.</td>
<td>50-00-0</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Triton-X-100</td>
<td>Reagent</td>
<td>Sigma-Aldrich&reg;</td>
<td>9002-93-1</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Alexa Fluor&reg; 594 phalloidin</td>
<td>Reagent</td>
<td>Invitrogen&trade;</td>
<td>A12381</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Vectashield&reg; Mounting Medium for Fluorescence with DAPI</td>
<td>Reagent</td>
<td>Vector Laboratories, Inc.</td>
<td>H-1200</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Tungsten pins</td>
<td>Reagent</td>
<td>Fine Science Tools</td>
<td>26002-10</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Pin holder</td>
<td>Reagent</td>
<td>Fine Science Tools</td>
<td>26018-17</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>

fluorescent labeling of drosophila heart structures

O<em&gt; Drosophila melanogaster</em&gt; Embarcação dorsal, ou coração, é uma estrutura tubular composta de uma única camada de cardiomiócitos contrátil, as células do pericárdio que se alinham ao longo de cada lado da parede do coração, músculos Alary de apoio e, em adultos, uma camada de células musculares longitudinal ventral. A casa fibras contrátil conservados constituintes da citoarquitetura muscular, incluindo feixes de miofibrilas densamente e complexos de proteínas do citoesqueleto / submembranas, que interagem com homólogos componentes da matriz extracelular. Aqui nós descrevemos um protocolo para a fixação e à rotulagem de determinados elementos fluorescentes do miocárdio do coração de larvas dissecadas e semi-intactas de adultos<em&gt; Drosophila</em&gt;. Especificamente, nós demonstramos a rotulagem de sarcômero F-actina e α-actinina nos corações larval. Além disso, realizamos rotulagem de F-actina e α-actinina em miosina-GFP expressar moscas adultas e de α-actinina e pericardin, um colágeno tipo IV matriz extracelular, no coração do adulto tipo selvagem. É dada especial atenção a uma estratégia de montagem para os corações semi-intactas de adultos que minimiza a manipulação e otimiza a oportunidade para manter a integridade dos tubos e os tecidos cardíacos associados. Estas preparações são adequadas para geração de imagens através de microscopia de fluorescência e confocal. No geral, este procedimento permite a análise cuidadosa e detalhada das características estruturais do coração de um sistema poderoso modelo geneticamente tratável.

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Fluorescent Labeling of Drosophila Heart Structures

Aqui nós descrevemos um protocolo básico para a rotulagem fluorescentes de diferentes elementos de tubos de coração de larva e adulto<em&gt; Drosophila melanogaster</em&gt;. Estas amostras são bem adaptados para geração de imagens através de microscopia fluorescente ou confocal. Essa técnica permite a análise estrutural detalhada das características dos corações de um organismo modelo poderoso.

Labeling fluorescentes de Drosophila Estruturas Coração

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