Name: fluorescent labeling of drosophila heart structures
Uploaded: 2009-10-13T23:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Fluorescent Labeling of Drosophila Heart Structures at JoVE.com

Авторы выражают благодарность С. И. Бернштейн (San Diego State University) за критическое прочтение и полезные предложения по подготовке этой рукописи. Эта работа была поддержана грантами NIH С. И. Бернштейн, СДСУ и Р. Бодмер, BIMR; и пост-докторские стипендии с партнерской западных государств Американской ассоциации сердца к Г. Фоглер и А. Cammarato.

Перед тем как начать <ol><li> Подготовьте следующие решения: <ol class="lalpha"><li> расслабляющий буфера (искусственный дрозофилы гемолимфы (АДГ) (см. &quot;Визуализация бьющегося сердца у дрозофилы&quot;), который содержит 10 мМ EGTA) </li><li> фиксатор (4% формальдегида в 1x PBS) </li><li> PBSTx (PBS, сод?...

<ol>
	<li>Brent, J. R., Werner, K. M., McCabe, B. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Drosophila+larval+NMJ+dissection.">Drosophila larval NMJ dissection.</a> J Vis Exp. , (2009).</li><li>Molina, M. R., Cripps, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ostia,+the+inflow+tracts+of+the+Drosophila+heart,+develop+from+a+genetically+distinct+subset+of+cardial+cells.">Ostia, the inflow tracts of the Drosophila heart, develop from a genetically distinct subset of cardial cells.</a> Mech Dev. 1, 51-59 (2001).</li><li>Dulcis, D., Levine, R. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Glutamatergic+innervation+of+the+heart+initiates+retrograde+contractions+in+adult+Drosophila+melanogaster.">Glutamatergic innervation of the heart initiates retrograde contractions in adult Drosophila melanogaster.</a> J Neurosci. 2, 271-280 (2005).</li><li>Zeitouni, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Signalling+pathways+involved+in+adult+heart+formation+revealed+by+gene+expression+profiling+in+Drosophila.">Signalling pathways involved in adult heart formation revealed by gene expression profiling in Drosophila.</a> PLoS Genet. 10, 1907-1921 (2007).</li><li>Robertson, C. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+metamorphosis+of+Drosophila+melanogaster,+including+an+accurately+timed+account+of+the+principal+morphological+change.">The metamorphosis of Drosophila melanogaster, including an accurately timed account of the principal morphological change.</a> J. Morphol. 2, 351-399 (1936).</li><li>Miller, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> The internal anatomy and histology of the imago of Drosophila melanogaster. , (1950).</li><li>Rizki, T. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+circulatory+system+and+associated+cells+and+tissues.">The circulatory system and associated cells and tissues.</a> , (1978).</li><li>Cammarato, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Myosin+transducer+mutations+differentially+affect+motor+function,+myofibril+structure,+and+the+performance+of+skeletal+and+cardiac+muscles.">Myosin transducer mutations differentially affect motor function, myofibril structure, and the performance of skeletal and cardiac muscles.</a> Mol Biol Cell. 2, 553-562 (2008).</li><li>Taghli-Lamallem, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dystrophin+deficiency+in+Drosophila+reduces+lifespan+and+causes+a+dilated+cardiomyopathy+phenotype.">Dystrophin deficiency in Drosophila reduces lifespan and causes a dilated cardiomyopathy phenotype.</a> Aging Cell. 2, 237-249 (2008).</li><li>Kelso, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=a+database+documenting+a+GFP+protein-trap+insertion+screen+in+Drosophila+melanogaster.">a database documenting a GFP protein-trap insertion screen in Drosophila melanogaster.</a> Nucleic Acids Res. 32, D418-D420 (2004).</li><li>Dietzl, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+genome-wide+transgenic+RNAi+library+for+conditional+gene+inactivation+in+Drosophila.">A genome-wide transgenic RNAi library for conditional gene inactivation in Drosophila.</a> Nature. 7150, 151-156 (2007).</li><li>Mery, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Drosophila+muscle+LIM+protein,+Mlp84B,+is+essential+for+cardiac+function.">The Drosophila muscle LIM protein, Mlp84B, is essential for cardiac function.</a> J Exp Biol. 211, 15-23 (2008).</li></ol>

Здесь мы приводим протокол полезно для подготовки и окраски спинной дрозофилы судна и связанные с ними тканей для работы с изображениями с помощью люминесцентных или конфокальной микроскопии. Мы предоставляем краткий отчет о шагах уточнены и обычно используются в нашей лаборато...

<!DOCTYPE html PUBLIC "-//W3C//DTD XHTML 1.0 Transitional//EN" "http://www.w3.org/TR/xhtml1/DTD/xhtml1-transitional.dtd">
<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>Ethylene glycol-bis (2-amino-ethylether) -N,N,N&#x2019;,N&#x2019;-tetra-acetic acid (EGTA)</td>
<td>Reagent</td>
<td>Sigma-Aldrich&reg;</td>
<td>E4378</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Formaldehyde, 10%, methanol free, Ultra Pure</td>
<td>Reagent</td>
<td>Polysciences Inc.</td>
<td>50-00-0</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Triton-X-100</td>
<td>Reagent</td>
<td>Sigma-Aldrich&reg;</td>
<td>9002-93-1</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Alexa Fluor&reg; 594 phalloidin</td>
<td>Reagent</td>
<td>Invitrogen&trade;</td>
<td>A12381</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Vectashield&reg; Mounting Medium for Fluorescence with DAPI</td>
<td>Reagent</td>
<td>Vector Laboratories, Inc.</td>
<td>H-1200</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Tungsten pins</td>
<td>Reagent</td>
<td>Fine Science Tools</td>
<td>26002-10</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Pin holder</td>
<td>Reagent</td>
<td>Fine Science Tools</td>
<td>26018-17</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>

fluorescent labeling of drosophila heart structures

<em&gt; Дрозофилы</em&gt; Спинной сосуд, или сердце, является трубчатая структура состоит из одного слоя сократительные кардиомиоциты, клетки, перикарда выровнять вдоль каждой стороны сердечной стенки, поддерживающие мышцы крыловидный и у взрослых, слой вентральных продольных мышечных клеток. Сократительной дом волокна сохраняется составляющих мышцу cytoarchitecture включая плотно упакованных пучков миофибрилл и цитоскелета / submembranous белковых комплексов, которые взаимодействуют с гомологичными компонентов внеклеточного матрикса. Здесь мы опишем протокол для фиксации и флуоресцентные маркировки частности инфаркта элементы из сердца расчлененный личинок и полу-нетронутыми взрослых<em&gt; Drosophila</em&gt;. В частности, мы демонстрируем маркировки саркомерных F-актин и α-актинина в личиночной сердца. Кроме того, мы выполняем маркировка F-актин и α-актинина в миозина-GFP выражения взрослых мух и α-актинина и pericardin, тип IV внеклеточной коллагеновой матрицы, в диких сердцем взрослого типа. Особое внимание уделяется установке стратегии для полу-нетронутыми сердца взрослых, которая минимизирует обработку и оптимизирует возможности для сохранения целостности сердечной трубки и связанных тканей. Эти препараты предназначены для работы с изображениями с помощью флуоресцентной и конфокальной микроскопии. В целом, эта процедура позволяет тщательный и подробный анализ структурных характеристик сердца от мощного генетически послушный модели системы.

Watch this Scientific Journal Video about Fluorescent Labeling of Drosophila Heart Structures at JoVE.com

Fluorescent Labeling of Drosophila Heart Structures

Здесь мы опишем основные протокол для флуоресцентной маркировки различных элементов сердце труб из личинки и взрослых<em&gt; Дрозофилы</em&gt;. Эти образцы хорошо подходят для работы с изображениями с помощью люминесцентных или конфокальной микроскопии. Эта техника позволяет детальный структурный анализ особенностей сердца от могучий организм модели.

Флуоресцентная маркировка Drosophila Структур сердца

The Drosophila melanogaster dorsal vessel, or heart, is a tubular structure comprised of a single layer of contractile cardiomyocytes, pericardial cells ...

Research

JoVE Journal

Biology

Fluorescent Labeling of Drosophila Heart Structures

Labeling Stem Cells with Fluorescent Dyes for non-invasive Detection with Optical Imaging

Маркировка стволовых клеток с флуоресцентными красителями для неинвазивного обнаружения оптических изображений с

Optical imaging (OI) is an easy, fast and inexpensive tool for in vivo monitoring of new stem cell based therapies. The technique is based on ex vivo ...

Visualizing the Live Drosophila Glial-neuromuscular Junction with Fluorescent Dyes

Visualizing the Live Drosophila Glial-neuromuscular Junction with Fluorescent Dyes

Визуализация Живая Drosophila Глиальные-нервно-мышечном соединении с флуоресцентными красителями

Our project identified GFP labeled glial structures at the developing larval fly neuromuscular synapse. To look at development of live glial-nerve-muscle ...

Visualizing the Beating Heart in Drosophila

Visualizing the Beating Heart in Drosophila

Визуализация бьющееся сердце в Drosophila</em

The Drosophila heart has recently emerged as a good model system for examining the genetic, cellular, and molecular mechanisms underlying function in ...

Monitoring Heart Function in Larval Drosophila melanogaster for Physiological Studies

Monitoring Heart Function in Larval Drosophila melanogaster for Physiological Studies

Мониторинг функции сердца в личинок Дрозофилы Для физиологических исследований

We present various methods to record cardiac function in the larval Drosophila. The approaches allow heart rate to be measured in unrestrained  and  ...

Preparation of embryos for Electron Microscopy of the Drosophila embryonic heart tube

Preparation of embryos for Electron Microscopy of the Drosophila embryonic heart tube

Подготовка эмбрионов для электронной микроскопии Drosophila Эмбриональные трубки сердца

The morphogenesis of the Drosophila  embryonic heart tube has emerged as a valuable model system for studying cell migration, cell-cell adhesion and cell ...

Preparation of Drosophila Polytene Chromosome Squashes for Antibody Labeling

Подготовка политенных хромосом Drosophila Кабачки для антител маркировки

Drosophila has long been a favorite model system for studying the relationship between chromatin structure and gene regulation due to the cytological ...

Fluorescent Labeling of COS-7 Expressing SNAP-tag Fusion Proteins for Live Cell Imaging

Флуоресцентная маркировка COS-7 выражая SNAP-теги Белки Fusion для живых изображений сотовый

SNAP-tag and CLIP-tag protein labeling systems enable the specific, covalent attachment of molecules, including fluorescent dyes, to a protein of interest ...

Whole Mount RNA Fluorescent in situ Hybridization of Drosophila Embryos

Whole Mount RNA Fluorescent in situ Hybridization of Drosophila Embryos

Всего горы РНК Флуоресцентные<em&gt; На месте</em&gt; Гибридизация<em&gt; Drosophila</em&gt; Эмбрионы

Assessing  the expression pattern of a gene, as well as the subcellular localization  properties of its transcribed RNA, are key features for ...

Intravital Microscopy for Imaging Subcellular Structures in Live Mice Expressing Fluorescent Proteins

Прижизненные микроскопия для визуализации субклеточных структур в живых мышей, экспрессирующих флуоресцентные белки

Here we describe a procedure to image subcellular structures in live rodents that is based on the use of confocal intravital microscopy. As a model organ, ...

Drosophila Preparation and Longitudinal Imaging of Heart Function In Vivo Using Optical Coherence Microscopy (OCM)

Drosophila Preparation and Longitudinal Imaging of Heart Function In Vivo Using Optical Coherence Microscopy OCM

Drosophila Подготовка и Продольная Визуализация сердца Функция In Vivo Использование оптической когерентной микроскопии (ОКМ)

Longitudinal study of the heartbeat in small animals contributes to understanding structural and functional changes during heart development. Optical ...