Name: fast and sensitive colloidal coomassie g-250 staining for proteins in polyacrylamide gels
Uploaded: 2009-08-03T00:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Fast and Sensitive Colloidal Coomassie G-250 Staining for Proteins in Polyacrylamide Gels at JoVE.com

Wij danken dr. Nicola Wiethölter voor de voorbereiding en kleuring van een D-gels. Dit werk werd gefinancierd door een subsidie ​​van de Deutsche Forschungsgemeinschaft (GRK 1089/project 5 tot ND en SM) en ondersteund door een onderzoeksbeurs van de Jürgen Manchot Stiftung te ND.

Deel 1: Twee-dimensionale (2-D) gelelektroforese met cup-loading <ol><li> IPG-strip rehydratie en iso-elektrische focussering (IEF) <ul><li> Hydrateren Immobiline DryStrip gels, pH 6-11 (7 cm) in 125 ul rehydration solution [7 M ureum, 2 M thio, 4% CHAPS, 50 mM hydroxyethyldisulfide en 2% IPG Buffer pH 6-11] met behulp van Immobiline DryStrip Reswelling Lade voor ten minste 10 uur. </li><li> Los neergeslagen eiwitmonster in IEF monsterbuffer [7 M ureum, 2 M thio, 2% CHAPS, 2% ASB-14, 50 mM hydroxyethyldisulfide en 2% ...

<ol>
	<li>Fazekas de St Groth, S., Webster, S. R. G., Datyner, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Two+new+staining+procedures+for+quantitative+estimation+of+proteins+on+electrophoretic+strips.">Two new staining procedures for quantitative estimation of proteins on electrophoretic strips.</a> Biochim. Biophys. Acta. 71, 377-391 (1963).</li><li>Neuhoff, V., Arold, N., Taube, D., Ehrhardt, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improved+staining+of+proteins+in+polyacrylamide+gels+including+isoelectric+focusing+gels+with+clear+background+at+nanogram+sensitivity+using+Coomassie+Brilliant+Blue+G-250+and+R-250.">Improved staining of proteins in polyacrylamide gels including isoelectric focusing gels with clear background at nanogram sensitivity using Coomassie Brilliant Blue G-250 and R-250.</a> Electrophoresis. 9, 255-262 (1988).</li><li>Candiano, G., Bruschi, M., Musante, L., Santucci, L., Ghiggeri, G. M., Carnemolla, B., Orecchia, P., Zardi, L., Rigetti, P. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Blue+Silver:+A+very+sensitive+colloidal+Coomassie+G-250+staining+for+proteome+analysis.">Blue Silver: A very sensitive colloidal Coomassie G-250 staining for proteome analysis.</a> Electrophoresis. 25, 1327-1333 (2004).</li><li>Kang, D., Gho, S. G., Suh, M., Kang, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Highly+Sensitive+and+Fast+Protein+Detection+with+Coomassie+Brilliant+Blue+in+Sodium+Dodecyl+Sulfate-Polyacrylamide+Gel+Electrophoresis.">Highly Sensitive and Fast Protein Detection with Coomassie Brilliant Blue in Sodium Dodecyl Sulfate-Polyacrylamide Gel Electrophoresis.</a> Bull. Korean Chem. Soc. 11, 1511-1512 (2002).</li><li>Shevchenko, A., Wilm, M., Vorm, O., Mann, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mass+spectrometric+sequencing+of+proteins+silver-stained+polyacrylamide+gels.">Mass spectrometric sequencing of proteins silver-stained polyacrylamide gels.</a> Anal. Chem. 68, 850-858 (1996).</li></ol>

Innovatieve of gewoon een andere Coomassie protocol? Op dit moment bestaan ​​er verschillende protocollen voor kleuringen met Coomassie Brilliant Blue. De meesten van hen het gevolg zijn van kleine of grote wijzigingen van een van de meest gebruikte protocollen door Neuhoff en collega&#39;s 2. Ook Kang&#39;s protocol op basis van formule Neuhoff&#39;s. Maar is het echt een alternatief Coomassie kleuring methode voor proteomics onderzoek? We zullen foto twee belangrijke kwestie...

<table border="1" ><tr><td> Naam van het product </td><td> Vennootschap </td><td> Catalogus Nee. </td><td> Reacties </td></tr><tr><td> Voor IEF en SDS-PAGE: </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> Immobiline DryStrip gels </td><td> GE Healthcare </td><td> 17-6001-94 </td><td> Kan zelfs gebruikt worden 2 jaar na vervaldatum. </td></tr><tr><td> Immobiline DryStrip Reswelling Tray </td><td> GE Healthcare </td><td> 80-6371-84 </td><td> Niet schoon met organische oplosmiddelen. Ontworpen voor 7-18 cm IPG-strips. </td></tr><tr><td> Immobiline DryStrip Kit </td><td> GE Healthcare </td><td> 18-1004-30 </td><td> Inclusief een lade, lastang, anode en kathode elektroden, aligner en sample cup bar en proef de cups. </td></tr><tr><td> EPS 3501 XL Power Supply </td><td> GE Healthcare </td><td> 18-1130-05 </td><td> Levert spanning tot 3500 V. </td></tr><tr><td> Multiphor II elektroforeseapparaat </td><td> GE Healthcare </td><td> 18-1018-06 </td><td> Beweegbare elektroden kan IEF in IPG stroken van alle lengte (7-24 cm IPG-strips) </td></tr><tr><td> PerfectBlue gel systeem Twin S </td><td> Peqlab </td><td> 45-1010-C </td><td> SDS-PAGE in 10x10 cm mini-gel-formaat. Gel kamer is voorzien van een koelsysteem. </td></tr><tr><td> Voor colloïdaal Coomassie G-250 kleuring: </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> vlekken gerechten met deksels </td><td> VWR </td><td> 216-3412 </td><td> Past voor mini-gels. Stapelbaar op de shaker. </td></tr><tr><td> aluminiumsulfaat-18-hydraat </td><td> Merck </td><td> 1.01102.5000 </td><td> We hebben de beste ervaring met Merck. Alleen beschikbaar in 5 kg pakket. </td></tr><tr><td> orthofosforzuur </td><td> Prolabo </td><td> 20 624.295 </td><td> Verkocht in glazen flessen. </td></tr></table>

fast and sensitive colloidal coomassie g-250 staining for proteins in polyacrylamide gels

Coomassie Brilliant Blue (CBB) is een kleurstof gebruikt voor de visualisatie van eiwitten gescheiden door SDS-PAGE, het aanbieden van een eenvoudige procedure kleuren en een hoge kwantificatie. Bovendien is het volledig compatibel met massaspectrometrische eiwit identificatie. Maar ondanks deze voordelen, is het CBB beschouwd worden minder gevoelig dan zilver of fluorescentie kleuringen en dus zelden gebruikt voor de detectie van proteïnen in de analytische gel op basis van proteomics benadering. Diverse verbeteringen van de oorspronkelijke Coomassie protocol 1 zijn gedaan om de gevoeligheid van de CBB te verhogen. Twee belangrijke wijzigingen werden ingevoerd om de detectie van lage-overvloedige eiwitten te verbeteren door het omzetten van de kleurstof moleculen in colloïdale deeltjes: In 1988, Neuhoff en collega&#39;s toegepast 20% methanol en hogere concentraties van ammonium sulfaat in het CBB G 250-gebaseerde kleuroplossing 2, en in 2004 Candiano et al.. opgericht Blue Silver met behulp van CBB G-250 met fosforzuur in de aanwezigheid van ammoniumsulfaat en methanol 3. Toch zijn al deze aanpassingen maar laat een detectie van ongeveer 10 ng eiwit. Een breed fameless protocol voor het colloïdale Coomassie kleuring werd gepubliceerd door Kang et al.. In 2002, waar ze aangepaste colloïdaal CBB Neuhoff&#39;s kleuringsprotocol ten aanzien van de complexvormers stoffen. In plaats van ammoniumsulfaat ze gebruikt aluminiumsulfaat en methanol werd vervangen door de minder toxische ethanol 4. De nieuwe aluminium-gebaseerde vlekken in de studie van Kang&#39;s toonde superieure gevoeligheid die detecteert zo laag als 1 ng / band (fosforylase b) met weinig gevoeligheid variëren afhankelijk van eiwitten. Hier tonen we de toepassing van het protocol Kang&#39;s voor een snelle en gevoelige colloïdale Coomassie kleuring van eiwitten in analytische doeleinden. We illustreren de snelle en gemakkelijke protocol met behulp van twee-dimensionale gels routinematig uitgevoerd in onze werkgroep.

Watch this Scientific Journal Video about Fast and Sensitive Colloidal Coomassie G-250 Staining for Proteins in Polyacrylamide Gels at JoVE.com

Fast and Sensitive Colloidal Coomassie G-250 Staining for Proteins in Polyacrylamide Gels

Deze video zal populariseren een colloïdale Coomassie G-250 kleuringsprotocol volgens Kang<em&gt; Et al..</em&gt; Voor de detectie van gemiddeld 4 ng eiwit in gels. De kleuring is binnen twee uur en zonder enige inspanning. We routinematig gebruik van Kang&#39;s protocol voor analytische doeleinden in gel op basis van proteomics.

Snelle en gevoelige colloïdaal Coomassie G-250 Kleuring voor Eiwitten in polyacrylamidegels

Coomassie Brilliant Blue (CBB) is a dye commonly used for the visualization of proteins separated by SDS-PAGE, offering a simple staining procedure and ...

Research

JoVE Journal

Biology

Staining Proteins in Gels

Kleuring Eiwitten in Gels

Following separation by electrophoretic methods, proteins in a gel can be detected by several staining methods. This unit describes protocols for ...

Method for Whole Mount Antibody Staining in Chick

Methode voor Whole Mount antilichaam kleuring in Chick

The chick embryo is a valuable tool in the study of early embryonic development. Its transparency, accessibility and ease of manipulation, make it an ...

Staining of Proteins in Gels with Coomassie G-250 without Organic Solvent and Acetic Acid

Kleuring van eiwitten in Gels met Coomassie G-250 zonder organisch oplosmiddel en azijnzuur

In classical protein staining protocols using Coomassie Brilliant Blue (CBB), solutions with high contents of toxic and flammable organic solvents ...

Denaturing Urea Polyacrylamide Gel Electrophoresis (Urea PAGE)

Denaturing Urea Polyacrylamide Gel Electrophoresis Urea PAGE

Denatureren Ureum polyacrylamide gel elektroforese (Urea PAGE)

Urea PAGE or denaturing urea polyacrylamide gel electrophoresis employs 6-8 M urea, which denatures secondary DNA or RNA structures and is used for their ...

Measuring Fast Calcium Fluxes in Cardiomyocytes

Het meten van Fast Calcium stromen in cardiomyocyten

Cardiomyocytes have multiple Ca2+ fluxes of varying duration that work together to optimize function 1,2. Changes in Ca2+ activity in response to ...

A Strategy for Sensitive, Large Scale Quantitative Metabolomics

Een strategie voor de gevoelige, Large Scale Quantitative Metabolomics

Metabolite profiling has been a valuable asset in the study of metabolism in health and disease. However, current platforms have different limiting ...

Development of a Colloidal Gold-based Immunochromatographic Test Strip for Detection of Cetacean Myoglobin

Ontwikkeling van een colloïdaal goud-gebaseerde immunochromatographic teststrip voor detectie van walvisachtigen Myoglobin

This protocol describes the development of a colloidal gold immunochromatographic test strip based on the sandwich format that can be used to ...

A Fast Air-dry Dropping Chromosome Preparation Method Suitable for FISH in Plants

Een Fast Air-droge Dropping Chromosome Bereidingswijze Geschikt voor vissen in planten

Preparation of chromosome spreads is a prerequisite for the successful performance of fluorescence in situ hybridization (FISH). Preparation of high ...

Detection of Modified Forms of Cytosine Using Sensitive Immunohistochemistry

Detectie van gemodificeerde vormen van cytosine behulp Sensitive Immunohistochemie

Methylation of cytosine bases (5-methylcytosine, 5mC) occurring in vertebrate genomes is usually associated with transcriptional silencing. ...

Quantitative Proteomics Workflow using Multiple Reaction Monitoring Based Detection of Proteins from Human Brain Tissue

Kwantitatieve Proteomics Workflow met behulp van multiple reaction monitoring gebaseerde detectie van eiwitten uit menselijk hersenweefsel

The proteomic analysis of the human brain tissue over the last decade has greatly enhanced our understanding of the brain. However, brain related ...