Name: fast and sensitive colloidal coomassie g-250 staining for proteins in polyacrylamide gels
Uploaded: 2009-08-03T00:00:00
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Ringraziamo il Dott. Nicola Wiethölter per la preparazione e colorazione di 1-D gel. Questo lavoro è stato finanziato da una sovvenzione della Deutsche Forschungsgemeinschaft (GRK 1089/project 5 a ND e SM) e sostenuto da una borsa di ricerca dal Manchot Jürgen Stiftung di ND.

Parte 1: bidimensionale (2-D), elettroforesi su gel con coppa di carico <ol><li> IPG-strip reidratazione e concentrandosi isoelettrico (IEF) <ul><li> Reidratare gel DryStrip Immobiline, pH 6-11 (7 cm) in 125 microlitri soluzione di reidratazione [7 M urea, 2 M tiourea, 4% CHAPS, 50 hydroxyethyldisulfide mM e 2% IPG tampone pH 6-11] usa il cassetto Immobiline DryStrip Reswelling per almeno 10 ore. </li><li> Sciogliere campione precipitato proteine ​​in un tampone campione IEF [7 M urea, 2 M tiourea, 2% CHAPS, 2% AS...

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	<li>Fazekas de St Groth, S., Webster, S. R. G., Datyner, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Two+new+staining+procedures+for+quantitative+estimation+of+proteins+on+electrophoretic+strips.">Two new staining procedures for quantitative estimation of proteins on electrophoretic strips.</a> Biochim. Biophys. Acta. 71, 377-391 (1963).</li><li>Neuhoff, V., Arold, N., Taube, D., Ehrhardt, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improved+staining+of+proteins+in+polyacrylamide+gels+including+isoelectric+focusing+gels+with+clear+background+at+nanogram+sensitivity+using+Coomassie+Brilliant+Blue+G-250+and+R-250.">Improved staining of proteins in polyacrylamide gels including isoelectric focusing gels with clear background at nanogram sensitivity using Coomassie Brilliant Blue G-250 and R-250.</a> Electrophoresis. 9, 255-262 (1988).</li><li>Candiano, G., Bruschi, M., Musante, L., Santucci, L., Ghiggeri, G. M., Carnemolla, B., Orecchia, P., Zardi, L., Rigetti, P. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Blue+Silver:+A+very+sensitive+colloidal+Coomassie+G-250+staining+for+proteome+analysis.">Blue Silver: A very sensitive colloidal Coomassie G-250 staining for proteome analysis.</a> Electrophoresis. 25, 1327-1333 (2004).</li><li>Kang, D., Gho, S. G., Suh, M., Kang, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Highly+Sensitive+and+Fast+Protein+Detection+with+Coomassie+Brilliant+Blue+in+Sodium+Dodecyl+Sulfate-Polyacrylamide+Gel+Electrophoresis.">Highly Sensitive and Fast Protein Detection with Coomassie Brilliant Blue in Sodium Dodecyl Sulfate-Polyacrylamide Gel Electrophoresis.</a> Bull. Korean Chem. Soc. 11, 1511-1512 (2002).</li><li>Shevchenko, A., Wilm, M., Vorm, O., Mann, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mass+spectrometric+sequencing+of+proteins+silver-stained+polyacrylamide+gels.">Mass spectrometric sequencing of proteins silver-stained polyacrylamide gels.</a> Anal. Chem. 68, 850-858 (1996).</li></ol>

Innovativi o solo un altro protocollo Coomassie? Al momento esistono diversi protocolli per le procedure di colorazione con Coomassie Brilliant Blue. La maggior parte di loro il risultato di modifiche minori o maggiori di uno dei protocolli più comunemente utilizzati dai Neuhoff e colleghi 2. Anche il protocollo di Kang basato sulla formula di Neuhoff. Ma è davvero un&#39;alternativa metodo di colorazione Coomassie per la ricerca proteomica? Noi immagine due questioni principali...

<table border="1" ><tr><td> Nome del prodotto </td><td> Azienda </td><td> Catalogo No. </td><td> Commenti </td></tr><tr><td> Per IEF e SDS-PAGE: </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> Immobiline DryStrip gel </td><td> GE Healthcare </td><td> 17-6001-94 </td><td> Può essere utilizzato anche 2 anni dopo la data di scadenza. </td></tr><tr><td> Immobiline DryStrip Reswelling Vassoio </td><td> GE Healthcare </td><td> 80-6371-84 </td><td> Non pulire con solventi organici. Progettato per 7-18 centimetri IPG-strisce. </td></tr><tr><td> Immobiline DryStrip Kit </td><td> GE Healthcare </td><td> 18-1004-30 </td><td> Include un vassoio di elettrodi, portaelettrodi, anodo e catodo, allineatore e coppa campioni bar e coppe campioni. </td></tr><tr><td> EPS 3501 XL Alimentazione </td><td> GE Healthcare </td><td> 18-1130-05 </td><td> Forniture di tensione fino a 3500 V. </td></tr><tr><td> Multiphor II elettroforesi Unità </td><td> GE Healthcare </td><td> 18-1018-06 </td><td> Elettrodi mobili consentono IEF in strisce IPG di ogni lunghezza (7-24 centimetri IPG strisce) </td></tr><tr><td> PerfectBlue gel sistema Doppia S </td><td> Peqlab </td><td> 45-1010-C </td><td> SDS-PAGE in 10x10 cm mini-gel formato. Gel da camera comprende un sistema di raffreddamento. </td></tr><tr><td> Per colloidale Coomassie G-250 colorazione: </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> colorazione piatti con coperchi </td><td> VWR </td><td> 216-3412 </td><td> Adatto per mini-gel. Sovrapposte a shaker. </td></tr><tr><td> solfato di alluminio-18-idrato </td><td> Merck </td><td> 1.01102.5000 </td><td> Abbiamo fatto migliore esperienza con Merck. Appena disponibile in 5 pacchetti kg. </td></tr><tr><td> ortofosforico </td><td> Prolabo </td><td> 20 624.295 </td><td> Venduto in bottiglie di vetro. </td></tr></table>

fast and sensitive colloidal coomassie g-250 staining for proteins in polyacrylamide gels

Coomassie Brilliant Blue (CBB) è un colorante comunemente utilizzato per la visualizzazione di proteine ​​separate mediante SDS-PAGE, offrendo una procedura semplice colorazione e quantificazione alto. Inoltre, è completamente compatibile con l&#39;identificazione delle proteine ​​spettrometria di massa. Ma nonostante questi vantaggi, CBB è considerato essere meno sensibile di colorazioni argento o fluorescenza e quindi raramente utilizzato per la rilevazione di proteine ​​in gel analitici approcci basati sulla proteomica. Diversi miglioramenti del protocollo originale Coomassie 1 sono stati fatti per aumentare la sensibilità della CBB. Due importanti modifiche sono state introdotte per migliorare la rilevazione di proteine ​​a bassa abbondanza convertendo le molecole di colorante in particelle colloidali: Nel 1988, Neuhoff e colleghi hanno applicato il 20% metanolo e concentrazioni più elevate di solfato di ammonio nel G-250 CBB soluzione colorante a base 2, e nel 2004 Candiano et al. stabilito Blue Silver con CBB G-250 con acido fosforico in presenza di solfato di ammonio e metanolo 3. Tuttavia, tutte queste modifiche solo permettono una rilevazione di circa 10 proteine ​​ng. Un protocollo ampiamente fameless per la colorazione Coomassie colloidale è stato pubblicato da Kang et al. Nel 2002 dove si è modificato Neuhoff colloidale protocollo di colorazione CBB per quanto riguarda le sostanze complessanti. Invece di solfato di ammonio hanno usato solfato di alluminio e il metanolo è stato sostituito dal 4 etanolo meno tossici. Il romanzo a base di alluminio colorazione in studio Kang ha dimostrato una sensibilità superiore che rileva fino a 1 ng / banda (fosforilasi b) con variazione scarsa sensibilità in funzione delle proteine. In questo studio dimostriamo applicazione del protocollo di Kang per una rapida e sensibile colorazione Coomassie colloidale di proteine ​​per scopi di analisi. Ci illustrerà il protocollo veloce e semplice utilizzando bidimensionali gel eseguita di routine nel nostro gruppo di lavoro.

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Fast and Sensitive Colloidal Coomassie G-250 Staining for Proteins in Polyacrylamide Gels

Questo video è diffondere una colloidale Coomassie G-250 protocollo di colorazione a seconda Kang<em&gt; Et al.</em&gt; Per la rilevazione di media 4 ng proteine ​​in gel. La colorazione è completata entro 2 ore e senza alcuno sforzo. Noi abitualmente utilizzano il protocollo di Kang per scopi di analisi in gel a base di proteomica.

Veloce e sensibile colloidale Coomassie G-250 colorazione per le proteine ​​in gel di poliacrilammide

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