Name: fast and sensitive colloidal coomassie g-250 staining for proteins in polyacrylamide gels
Uploaded: 2009-08-03T00:00:00
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我々は1 - Dゲルの調製および染色のために博士ニコラWiethölterに感謝。 この作品は、ドイツ学術振興（NDとSMへのGRK 1089/project 5）からの助成金によって資金を供給され、NDに財団ユルゲンManchotから研究フェローシップによってサポートされていました。

パート1：カップローディングを使用して二次元（2 - D）ゲル電気泳動<ol><li> IPGストリップの水和と等電点電気泳動（IEF） <ul><li> 125μlの補液でイモビのDryStripゲル、pHが6-11（7 cm）の水和する[7 M尿素、2 Mチオ尿素、4％CHAPS、50 mMリンhydroxyethyldisulfideと2％IPGの緩衝液pH 6月11日]のためにイモビDryStrip Reswellingトレイを使用して少なくとも10時間。 </li><li> [7 M尿素、2 Mチオ尿素、2％CHAPS、2％ASB - 14、50...

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	<li>Fazekas de St Groth, S., Webster, S. R. G., Datyner, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Two+new+staining+procedures+for+quantitative+estimation+of+proteins+on+electrophoretic+strips.">Two new staining procedures for quantitative estimation of proteins on electrophoretic strips.</a> Biochim. Biophys. Acta. 71, 377-391 (1963).</li><li>Neuhoff, V., Arold, N., Taube, D., Ehrhardt, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improved+staining+of+proteins+in+polyacrylamide+gels+including+isoelectric+focusing+gels+with+clear+background+at+nanogram+sensitivity+using+Coomassie+Brilliant+Blue+G-250+and+R-250.">Improved staining of proteins in polyacrylamide gels including isoelectric focusing gels with clear background at nanogram sensitivity using Coomassie Brilliant Blue G-250 and R-250.</a> Electrophoresis. 9, 255-262 (1988).</li><li>Candiano, G., Bruschi, M., Musante, L., Santucci, L., Ghiggeri, G. M., Carnemolla, B., Orecchia, P., Zardi, L., Rigetti, P. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Blue+Silver:+A+very+sensitive+colloidal+Coomassie+G-250+staining+for+proteome+analysis.">Blue Silver: A very sensitive colloidal Coomassie G-250 staining for proteome analysis.</a> Electrophoresis. 25, 1327-1333 (2004).</li><li>Kang, D., Gho, S. G., Suh, M., Kang, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Highly+Sensitive+and+Fast+Protein+Detection+with+Coomassie+Brilliant+Blue+in+Sodium+Dodecyl+Sulfate-Polyacrylamide+Gel+Electrophoresis.">Highly Sensitive and Fast Protein Detection with Coomassie Brilliant Blue in Sodium Dodecyl Sulfate-Polyacrylamide Gel Electrophoresis.</a> Bull. Korean Chem. Soc. 11, 1511-1512 (2002).</li><li>Shevchenko, A., Wilm, M., Vorm, O., Mann, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mass+spectrometric+sequencing+of+proteins+silver-stained+polyacrylamide+gels.">Mass spectrometric sequencing of proteins silver-stained polyacrylamide gels.</a> Anal. Chem. 68, 850-858 (1996).</li></ol>

革新的なまたは単に別のクマのプロトコル？ 現時点ではクマシーブリリアントブルーで手続きを染色するための複数のプロトコルが存在する。それらのほとんどはNeuhoffと同僚2で最も一般的に使用されるプロトコルのいずれかのマイナーまたはメジャーの変更に起因する。また、カンのプロトコルは、Neuhoffの式に基づいた。しかし、それは本当にプロテオミクス...

<table border="1" ><tr><td> 製品の名称 </td><td> 会社 </td><td> カタログ番号 </td><td> コメント </td></tr><tr><td> IEFとSDS - PAGE用： </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>イモビDryStripゲル</td><td> GEヘルスケア</td><td> 17-6001-94 </td><td>さらに有効期限を2年後に使用することができます。 </td></tr><tr><td>イモビDryStrip Reswellingトレイ</td><td> GEヘルスケア</td><td> 80-6371-84 </td><td>有機溶剤で洗浄しないでください。 7〜18センチメートルIPGストリップのために設計されています。 </td></tr><tr><td>イモビDryStripキット</td><td> GEヘルスケア</td><td> 18-1004-30 </td><td>トレイ、電極ホルダー、アノードとカソード電極、アライナーとサンプルカップバーとサンプルカップを含みます。 </td></tr><tr><td> EPS 3501 XLの電源</td><td> GEヘルスケア</td><td> 18-1130-05 </td><td>消耗品は、3500までの電圧V </td></tr><tr><td> Multiphor II電気泳動ユニット</td><td> GEヘルスケア</td><td> 18-1018-06 </td><td>可動電極は、すべての長さのIPGストリップにIEFを有効にする（7〜24センチメートルはストリップをIPG） </td></tr><tr><td> PerfectBlueゲルシステムツインS </td><td> Peqlab </td><td> 45から1010 - C </td><td> 10 × 10センチメートルミニゲルフォーマットでSDS - PAGE。ゲルチャンバーは、冷却システムが含まれています。 </td></tr><tr><td> コロイドクマG - 250染色の場合： </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>蓋付染色皿</td><td> VWR </td><td> 216-3412 </td><td>ミニゲルのはめあい。シェーカーでスタッカブル。 </td></tr><tr><td>硫酸アルミニウム- 18 -水和物</td><td>メルク</td><td> 1.01102.5000 </td><td>我々は、メルクとの最高の体験をしました。 5kgのパッケージでだけ利用できる。 </td></tr><tr><td>オルトリン酸</td><td> Prolabo </td><td> 20 624.295 </td><td>ガラスびんで販売。 </td></tr></table>

fast and sensitive colloidal coomassie g-250 staining for proteins in polyacrylamide gels

クマシーブリリアントブルー（CBB）は、一般的にシンプルな染色法と高い定量を提供し、SDS - PAGEにより分離されたタンパク質の可視化のために使用される色素です。さらに、質量分析、タンパク質の同定と完全に互換性があります。しかし、これらの利点にもかかわらず、CBBは、銀や蛍光stainingsよりも感度が低いとみなされるため、分析用ゲル電気泳動ベースのプロテオミクスのアプローチ中のタンパク質の検出に用いることはめったにありません。 オリジナルのクマプロトコル1のいくつかの改良がCBBの感度を高めるために行われています。二つの主要な変更は、コロイド粒子に色素分子を変換することにより、低濃度タンパク質の検出を強化するために導入されました：1988年、Neuhoffらは、CBB G - 250ベースの染色液2に20％メタノールおよび硫酸アンモニウムの高濃度を適用し、そして2004年にCandiano ら 。硫酸アンモニウムとメタノール3の存在下でリン酸とCBB G - 250を使用して確立されたブルーシルバー 。それにもかかわらず、これらすべての修正はわずか約10 ngのタンパク質の検出を可能にする。コロイドクマシー染色のための広くfamelessプロトコルは、Kang らによって出版された。彼らは錯化物質に関するNeuhoffのコロイドCBB染色のプロトコルを変更した2002年。代わりに硫酸アンモニウムを彼らは硫酸アルミニウムとメタノールが毒性の少ないエタノール4によって置き換えられたために使用。小説アルミベースのカンの研究では染色はタンパク質によって若干の感度のばらつきとは1 ng /バンド（ホスホリラーゼb）のように低い検出する優れた感度を示した。 ここでは、分析目的のタンパク質の迅速かつ高感度コロイドクマシー染色のためのカンのプロトコルのアプリケーションを示しています。我々は日常的に私たちのワーキンググループで行われる二次元のゲルを使って素早く簡単にプロトコルを説明します。

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Fast and Sensitive Colloidal Coomassie G-250 Staining for Proteins in Polyacrylamide Gels

このビデオでは、カンによるとコロイドクマG - 250染色プロトコールを普及するものと<em&gt;ら。</em&gt;ゲルの平均4 ngのタンパク質の検出のための。染色は2時間以内と何の努力もせずに完了します。我々は日常的にゲルベースの​​プロテオミクス、分析目的のためにカンのプロトコルを使用してください。

ポリアクリルアミドゲルでのタンパク質の迅速かつ高感度コロイドクマG - 250染色

Coomassie Brilliant Blue (CBB) is a dye commonly used for the visualization of proteins separated by SDS-PAGE, offering a simple staining procedure and ...

Research

JoVE Journal

Biology

Staining Proteins in Gels

ゲルでタンパク質を染色

Following separation by electrophoretic methods, proteins in a gel can be detected by several staining methods. This unit describes protocols for ...

Method for Whole Mount Antibody Staining in Chick

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The chick embryo is a valuable tool in the study of early embryonic development. Its transparency, accessibility and ease of manipulation, make it an ...

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クーマシー有機溶媒および酢酸のないG - 250でゲル中のタンパク質の染色

In classical protein staining protocols using Coomassie Brilliant Blue (CBB), solutions with high contents of toxic and flammable organic solvents ...

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変性尿素ポリアクリルアミドゲル電気泳動（尿素PAGE）

Urea PAGE or denaturing urea polyacrylamide gel electrophoresis employs 6-8 M urea, which denatures secondary DNA or RNA structures and is used for their ...

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A Strategy for Sensitive, Large Scale Quantitative Metabolomics

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植物におけるFISHのための適切な高速空気乾燥滴下染色体製造方法

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Detection of Modified Forms of Cytosine Using Sensitive Immunohistochemistry

高感度免疫組織化学を使用してシトシンの修飾された形態の検出

Methylation of cytosine bases (5-methylcytosine, 5mC) occurring in vertebrate genomes is usually associated with transcriptional silencing. ...

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