Name: fast and sensitive colloidal coomassie g-250 staining for proteins in polyacrylamide gels
Uploaded: 2009-08-03T00:00:00
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우리는 1 차원 젤의 준비와 얼룩에 대한 박사 니콜라 Wiethölter 감사합니다. 이 작품은 독일 Forschungsgemeinschaft (ND와 SM에 GRK 1089/project 5)에서 부여로 투자 및 ND에 Stiftung 위르겐 만촛에서 연구 활동에 의해 지원되었다.

1 부 : 컵 로딩을 사용하여 2 차원 (2 - D) 겔 전기 영동 <ol><li> IPG - 스트립 rehydration과 isoelectric 초점 (IEF) <ul><li> 125 μl rehydration 솔루션의 Immobiline의 DryStrip의 젤, 산도 6-11을 (7cm) Rehydrate [7 M 우레아, 2 M 티오 우레아, 4 % 챕스, 버퍼 산도 6-11을 IPG 50 MM의 hydroxyethyldisulfide 2 %]에 대한 Immobiline DryStrip Reswelling 트레이를 사용하여 적어도 10 시간. </li><li> IEF 샘플 버퍼 시켰던 단백질 샘플을 디졸브 [7 M 우레아, ...

<ol>
	<li>Fazekas de St Groth, S., Webster, S. R. G., Datyner, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Two+new+staining+procedures+for+quantitative+estimation+of+proteins+on+electrophoretic+strips.">Two new staining procedures for quantitative estimation of proteins on electrophoretic strips.</a> Biochim. Biophys. Acta. 71, 377-391 (1963).</li><li>Neuhoff, V., Arold, N., Taube, D., Ehrhardt, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improved+staining+of+proteins+in+polyacrylamide+gels+including+isoelectric+focusing+gels+with+clear+background+at+nanogram+sensitivity+using+Coomassie+Brilliant+Blue+G-250+and+R-250.">Improved staining of proteins in polyacrylamide gels including isoelectric focusing gels with clear background at nanogram sensitivity using Coomassie Brilliant Blue G-250 and R-250.</a> Electrophoresis. 9, 255-262 (1988).</li><li>Candiano, G., Bruschi, M., Musante, L., Santucci, L., Ghiggeri, G. M., Carnemolla, B., Orecchia, P., Zardi, L., Rigetti, P. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Blue+Silver:+A+very+sensitive+colloidal+Coomassie+G-250+staining+for+proteome+analysis.">Blue Silver: A very sensitive colloidal Coomassie G-250 staining for proteome analysis.</a> Electrophoresis. 25, 1327-1333 (2004).</li><li>Kang, D., Gho, S. G., Suh, M., Kang, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Highly+Sensitive+and+Fast+Protein+Detection+with+Coomassie+Brilliant+Blue+in+Sodium+Dodecyl+Sulfate-Polyacrylamide+Gel+Electrophoresis.">Highly Sensitive and Fast Protein Detection with Coomassie Brilliant Blue in Sodium Dodecyl Sulfate-Polyacrylamide Gel Electrophoresis.</a> Bull. Korean Chem. Soc. 11, 1511-1512 (2002).</li><li>Shevchenko, A., Wilm, M., Vorm, O., Mann, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mass+spectrometric+sequencing+of+proteins+silver-stained+polyacrylamide+gels.">Mass spectrometric sequencing of proteins silver-stained polyacrylamide gels.</a> Anal. Chem. 68, 850-858 (1996).</li></ol>

혁신 아니면 그냥 다른 쿠매시 프로토콜? 현재 쿠매시 브릴리언트 블루와 절차를 얼룩에 대해 여러 개의 프로토콜이 존재. 그들의 대부분은 Neuhoff 및 동료 2에서 가장 일반적으로 사용되는 프로토콜 중 하나의 미성년자 또는 대대적인 개조로 인한. 또한 강의 프로토콜은 Neuhoff의 공식에 따라. 하지만 정말 proteomic 연구에 대안 쿠매시의 얼룩 방법인가요? 우리는 다른 ?...

<table border="1" ><tr><td> 제품 이름 </td><td> 회사 </td><td> 카탈로그 번호 </td><td> 댓글 </td></tr><tr><td> : IEF와 SDS - PAGE에 대한 </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> Immobiline DryStrip 젤 </td><td> GE 헬스케어 </td><td> 17-6001-94 </td><td> 심지어 날짜 만료 2 년후 사용할 수 있습니다. </td></tr><tr><td> Immobiline DryStrip Reswelling 트레이 </td><td> GE 헬스케어 </td><td> 80-6371-84 </td><td> 유기 용제와 함께 세척하지 마십시오. 7-18센티미터 IPG - 부착된를 위해 마련되었습니다. </td></tr><tr><td> Immobiline DryStrip 키트 </td><td> GE 헬스케어 </td><td> 18-1004-30 </td><td> 트레이, 전극 홀더, 양극과 음극 전극, aligner과 샘플 컵 표시줄과 샘플 컵을 포함합니다. </td></tr><tr><td> EPS 3501 XL 전원 공급 장치 </td><td> GE 헬스케어 </td><td> 18-1130-05 </td><td> 용품 3,500 최대 전압 V. </td></tr><tr><td> Multiphor II 전기 영동 단위 </td><td> GE 헬스케어 </td><td> 18-1018-06 </td><td> 가동 전극은 모든 길이의 IPG 스트립에서 IEF를 활성화 (7-24센티미터가 스트립을 IPG) </td></tr><tr><td> PerfectBlue 젤 시스템 트윈 S </td><td> Peqlab </td><td> 45-1010 - C </td><td> 10x10 cm 미니 젤 형식의 SDS - PAGE. 젤 챔버는 냉각 시스템이 포함되어 있습니다. </td></tr><tr><td> : 콜로이드 쿠매시 G - 250 염색법에 대한 </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> 뚜껑과 함께 요리를 염색법 </td><td> VWR </td><td> 216-3412 </td><td> 미니 젤에 대한 힘드 네요. 쉐이크에 Stackable. </td></tr><tr><td> 알루미늄 황산 - 18 - 하이드 레이트 </td><td> 머크 </td><td> 1.01102.5000 </td><td> 우리는 머크와 함께 최고의 경험을했다. 5kg 패키지에 단지 가능합니다. </td></tr><tr><td> orthophosphoric 수 소산 </td><td> Prolabo </td><td> 20 624.295 </td><td> 유리병에서 판매. </td></tr></table>

fast and sensitive colloidal coomassie g-250 staining for proteins in polyacrylamide gels

쿠매시 블리언트 블루 (CBB)은 일반적으로 간단한 얼룩 절차 및 높은 quantitation를 제공 SDS - PAGE로 구분하여 단백질의 시각화에 사용되는 염료입니다. 또한, 그것은 대량 spectrometric 단백질 식별와 완벽하게 호환됩니다. 그러나 이러한 장점에도 불구하고, CBB는 은색 또는 형광 stainings보다 민감하고 따라서 분석 젤 기반 proteomic 접근에서 단백질의 검출에 사용되는 거의 없습니다 것으로 간주된다. 원래 쿠매시 프로토콜 1 몇 가지 개선 CBB의 감도를 증가되었습니다. 두 대대적인 개조가 콜로이드 입자로 염료 분자를 변환하여 낮은 풍부한 단백질의 검출을 향상시키기 위해 도입되었습니다 : 1988 년, Neuhoff와 동료는 CBB G - 250을 기반으로 얼룩 솔루션 2에 20 % 메탄올 및 암모늄 황산의 높은 농도를 적용 2004 Candiano 외 인치 암모늄 황산과 메탄올 3의 존재에있는 인산과 CBB G - 250을 사용하여 블루 실버를 설립하였습니다. 그럼에도 불구하고, 모든 수정은 약 10 NG 단백질의 검출을 허용합니다. 콜로이드 쿠매시의 얼룩에 대해 광범위하게 fameless 프로토콜은 강 외에 의해 출판되었다. 2002 년 그들은 complexing 물질에 관한 Neuhoff의 콜로이드 CBB의 얼룩 프로토콜을 수정 곳. 대신 암모늄 황산의 그들은 황산 알루미늄과 메탄올이 적은 독성 에탄올 4로 대체되었다를 사용합니다. 소설 알루미늄 기반의 강호의 연구에 얼룩이 약간 감도 유사 단백질에 따라 1 NG / 밴드 (phosphorylase B)처럼 낮은 감지 우수한 감도를 보여주었다. 여기서는 분석 목적에 단백질의 신속하고 민감한 콜로이드 쿠매시의 얼룩을 위해 강호의 프로토콜의 응용 프로그램을 보여줍니다. 우리는 일상적으로 우리의 작업 그룹에서 수행 2 차원 젤을 사용하여 빠르고 쉽게 프로토콜을 설명합니다.

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Fast and Sensitive Colloidal Coomassie G-250 Staining for Proteins in Polyacrylamide Gels

이 동영상은 강호에 따라 콜로이드 쿠매시 G - 250 얼룩 프로토콜을 대중화한다<em&gt; 외.</em&gt; 젤 평균 4 NG 단백질의 검출을위한. 얼룩은 2 시간 이내에 어떠한 노력도없이 ​​완료됩니다. 우리는 일상적으로 젤 기반 proteomics의 분석을 위해 강호의 프로토콜을 사용합니다.

Polyacrylamide의 젤의 단백질에 대한 신속하고 민감한 콜로이드 쿠매시 G - 250 스테 이닝

Coomassie Brilliant Blue (CBB) is a dye commonly used for the visualization of proteins separated by SDS-PAGE, offering a simple staining procedure and ...

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