Name: fast and sensitive colloidal coomassie g-250 staining for proteins in polyacrylamide gels
Uploaded: 2009-08-03T00:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Fast and Sensitive Colloidal Coomassie G-250 Staining for Proteins in Polyacrylamide Gels at JoVE.com

Мы благодарим доктора Никола Wiethölter для подготовки и окрашивания 1-D гелей. Эта работа финансировалась за счет гранта Deutsche Forschungsgemeinschaft (ГРК 1089/project 5 до Н. Д. и С. М.) и при поддержке исследований общении с Юргеном Manchot Stiftung в НД.

Часть 1: двумерные (2-D) гель-электрофореза использованием чашки загрузкой <ol><li> IPG-полосы регидратации и изоэлектрической фокусировки (МЭФ) <ul><li> Увлажняет Immobiline DryStrip гели, рН 6-11 (7 см) в 125 мкл раствора регидратации [7 М мочевины, 2 М тиомочевины, 4% CHAPS, 50 hydroxyethyldisulfide мм и 2% IPG буфера рН 6-11] с пом?...

<ol>
	<li>Fazekas de St Groth, S., Webster, S. R. G., Datyner, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Two+new+staining+procedures+for+quantitative+estimation+of+proteins+on+electrophoretic+strips.">Two new staining procedures for quantitative estimation of proteins on electrophoretic strips.</a> Biochim. Biophys. Acta. 71, 377-391 (1963).</li><li>Neuhoff, V., Arold, N., Taube, D., Ehrhardt, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improved+staining+of+proteins+in+polyacrylamide+gels+including+isoelectric+focusing+gels+with+clear+background+at+nanogram+sensitivity+using+Coomassie+Brilliant+Blue+G-250+and+R-250.">Improved staining of proteins in polyacrylamide gels including isoelectric focusing gels with clear background at nanogram sensitivity using Coomassie Brilliant Blue G-250 and R-250.</a> Electrophoresis. 9, 255-262 (1988).</li><li>Candiano, G., Bruschi, M., Musante, L., Santucci, L., Ghiggeri, G. M., Carnemolla, B., Orecchia, P., Zardi, L., Rigetti, P. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Blue+Silver:+A+very+sensitive+colloidal+Coomassie+G-250+staining+for+proteome+analysis.">Blue Silver: A very sensitive colloidal Coomassie G-250 staining for proteome analysis.</a> Electrophoresis. 25, 1327-1333 (2004).</li><li>Kang, D., Gho, S. G., Suh, M., Kang, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Highly+Sensitive+and+Fast+Protein+Detection+with+Coomassie+Brilliant+Blue+in+Sodium+Dodecyl+Sulfate-Polyacrylamide+Gel+Electrophoresis.">Highly Sensitive and Fast Protein Detection with Coomassie Brilliant Blue in Sodium Dodecyl Sulfate-Polyacrylamide Gel Electrophoresis.</a> Bull. Korean Chem. Soc. 11, 1511-1512 (2002).</li><li>Shevchenko, A., Wilm, M., Vorm, O., Mann, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mass+spectrometric+sequencing+of+proteins+silver-stained+polyacrylamide+gels.">Mass spectrometric sequencing of proteins silver-stained polyacrylamide gels.</a> Anal. Chem. 68, 850-858 (1996).</li></ol>

Инновационные или просто еще один протокол Кумасси? На данный момент существует множество протоколов для окрашивания процедуры Кумасси бриллиантовый синий. Большинство из них возникают незначительные или значительные изменения одного из наиболее широко используемы?...

<table border="1" ><tr><td> Наименование продукта </td><td> Компания </td><td> Каталог Нет. </td><td> Комментарии </td></tr><tr><td> Для МЭФ и SDS-PAGE: </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> Immobiline DryStrip гели </td><td> GE Healthcare </td><td> 17-6001-94 </td><td> Может использоваться даже спустя 2 года после срока годности. </td></tr><tr><td> Immobiline DryStrip Reswelling лоток </td><td> GE Healthcare </td><td> 80-6371-84 </td><td> Не чистите с органическими растворителями. Предназначен для 7-18 см IPG-полосок. </td></tr><tr><td> Immobiline DryStrip Kit </td><td> GE Healthcare </td><td> 18-1004-30 </td><td> Включает в себя поднос, держатель электрода, анода и катода электродов, выравниватель и бар образец чашки и стаканы образца. </td></tr><tr><td> EPS 3501 XL питания </td><td> GE Healthcare </td><td> 18-1130-05 </td><td> Поставки напряжением до 3500 В. </td></tr><tr><td> Multiphor II группы Электрофорез </td><td> GE Healthcare </td><td> 18-1018-06 </td><td> Подвижные электроды позволяют МЭФ в IPG полос всей длине (7-24 см IPG полос) </td></tr><tr><td> PerfectBlue гелевой системы Твин S </td><td> Peqlab </td><td> 45-1010-C </td><td> SDS-PAGE в 10х10 см мини-гель формате. Гель камера включает в себя системы охлаждения. </td></tr><tr><td> Для коллоидных Кумасси G-250 окрашивания: </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> окрашивание блюда с крышками </td><td> VWR </td><td> 216-3412 </td><td> Подходит для мини-гелей. Стекируемые на шейкере. </td></tr><tr><td> сульфата алюминия-18-гидрат </td><td> Merck </td><td> 1.01102.5000 </td><td> Мы сделали лучший опыт Merck. Просто доступен в 5-килограммовой упаковки. </td></tr><tr><td> ортофосфорная кислота </td><td> Prolabo </td><td> 20 624.295 </td><td> Продается в стеклянных бутылках. </td></tr></table>

fast and sensitive colloidal coomassie g-250 staining for proteins in polyacrylamide gels

Кумасси бриллиантовый синий (CBB) является красителя обычно используется для визуализации белков, разделенных SDS-PAGE, предлагая простой процедуры окрашивания и высокий количественный. Кроме того, она полностью совместима с масс-спектрометрического идентификации белков. Но, несмотря на эти преимущества, CBB считается, менее чувствительны, чем серебро или флуоресценции окрашивания и поэтому редко используется для обнаружения белка в аналитической гель подходов протеомных. Несколько улучшений оригинальной Кумасси протокол 1 были внесены повысить чувствительность CBB. Два основных изменения были внесены для повышения вероятности обнаружения низкого обильные белки путем преобразования молекул красителя в коллоидных частиц: В 1988 году Neuhoff и коллеги применяется 20% метанола и более высокие концентрации сульфата аммония в CBB G-250 решение на базе окрашивания 2, а в 2004 году Candiano и соавт. создана Blue Silver использованием CBB G-250 с фосфорной кислотой в присутствии сульфата аммония и метанола 3. Тем не менее, все эти изменения просто позволить обнаружения приблизительно 10 нг белка. Широко неизвестный протокол для коллоидного окрашивания Кумасси был опубликован Кан и соавт. В 2002 году, где они изменение коллоидного окрашивания CBB Neuhoff в протокол о комплексообразующих веществ. Вместо того, сульфат аммония они использовали сульфат алюминия и метанола была заменена менее токсичны этанола 4. Роман на основе алюминия, окрашивание в исследовании Кан показал высокую чувствительность, которая обнаруживает, даже в 1 нг / полоса (фосфорилазы б) с небольшим изменением чувствительности в зависимости от белков. Здесь мы демонстрируем применение протокола Канга для быстрого и чувствительного коллоидного окрашивания Кумасси белков в аналитических целях. Мы проиллюстрируем быстрый и легкий протокол, используя двумерный гель регулярно проводится в нашей рабочей группы.

Watch this Scientific Journal Video about Fast and Sensitive Colloidal Coomassie G-250 Staining for Proteins in Polyacrylamide Gels at JoVE.com

Fast and Sensitive Colloidal Coomassie G-250 Staining for Proteins in Polyacrylamide Gels

Это видео должно популяризировать коллоидных Кумасси G-250 окрашивания протокол в соответствии с Кан<em&gt; Соавт.</em&gt; Для обнаружения среднем 4 нг белка в гелях. Окрашивание выполняется в течение 2 часов и без каких-либо усилий. Мы регулярно использовать протокол Канга для аналитических целей в основе геля протеомики.

Быстро и чувствительной Коллоидное Кумасси G-250 для окрашивания белков в полиакриламидном геле

Coomassie Brilliant Blue (CBB) is a dye commonly used for the visualization of proteins separated by SDS-PAGE, offering a simple staining procedure and ...

Research

JoVE Journal

Biology

Staining Proteins in Gels

Окрашивание белков в гелях

Following separation by electrophoretic methods, proteins in a gel can be detected by several staining methods. This unit describes protocols for ...

Method for Whole Mount Antibody Staining in Chick

Метод полного окрашивания антител горе в Чик

The chick embryo is a valuable tool in the study of early embryonic development. Its transparency, accessibility and ease of manipulation, make it an ...

Staining of Proteins in Gels with Coomassie G-250 without Organic Solvent and Acetic Acid

Окрашивание белков в гелях Кумасси G-250 без органических растворителей и уксусной кислоты

In classical protein staining protocols using Coomassie Brilliant Blue (CBB), solutions with high contents of toxic and flammable organic solvents ...

Denaturing Urea Polyacrylamide Gel Electrophoresis (Urea PAGE)

Denaturing Urea Polyacrylamide Gel Electrophoresis Urea PAGE

Денатурирующих Мочевина полиакриламидном геле (мочевина PAGE)

Urea PAGE or denaturing urea polyacrylamide gel electrophoresis employs 6-8 M urea, which denatures secondary DNA or RNA structures and is used for their ...

Measuring Fast Calcium Fluxes in Cardiomyocytes

Измерение Быстрые потоки кальция в кардиомиоциты

Cardiomyocytes have multiple Ca2+ fluxes of varying duration that work together to optimize function 1,2. Changes in Ca2+ activity in response to ...

A Strategy for Sensitive, Large Scale Quantitative Metabolomics

Стратегия для чувствительной, крупномасштабного Количественные Metabolomics

Metabolite profiling has been a valuable asset in the study of metabolism in health and disease. However, current platforms have different limiting ...

Development of a Colloidal Gold-based Immunochromatographic Test Strip for Detection of Cetacean Myoglobin

Разработка коллоидного золота на основе Иммунохроматографические тест-полоски для обнаружения китообразных миоглобина

This protocol describes the development of a colloidal gold immunochromatographic test strip based on the sandwich format that can be used to ...

A Fast Air-dry Dropping Chromosome Preparation Method Suitable for FISH in Plants

Быстрый воздушно-сухой Падение Хромосома Способ получения Подходит для рыбы у растений

Preparation of chromosome spreads is a prerequisite for the successful performance of fluorescence in situ hybridization (FISH). Preparation of high ...

Detection of Modified Forms of Cytosine Using Sensitive Immunohistochemistry

Обнаружение измененных форм цитозина с использованием чувствительных иммуногистохимии

Methylation of cytosine bases (5-methylcytosine, 5mC) occurring in vertebrate genomes is usually associated with transcriptional silencing. ...

Quantitative Proteomics Workflow using Multiple Reaction Monitoring Based Detection of Proteins from Human Brain Tissue

Рабочий процесс количественной протеомики с использованием множественного мониторинга реакций на основе обнаружения белков из ткани мозга человека

The proteomic analysis of the human brain tissue over the last decade has greatly enhanced our understanding of the brain. However, brain related ...