Name: rna isolation from embryonic zebrafish and cdna synthesis for gene expression analysis
Uploaded: 2009-08-07T16:40:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about RNA Isolation from Embryonic Zebrafish and cDNA Synthesis for Gene Expression Analysis at JoVE.com

<p class="jove_title"> Partie 1: Extraction des ARN totaux à l&#39;aide du réactif Trizol </p><p class="jove_content"> Lorsque vous travaillez avec de l&#39;ARN, il est très important de travailler dans un environnement qui est exempt de RNases. Des précautions simples, comme avoir des pipettes réservées à un usage uniquement avec les procédures de l&#39;ARN et la pulvérisation de la zone de travail avec un réactif décontaminant (par exemple, RNase Away) avant le début de la procédure sont très utiles. </p><ol><li> Pour atteindre ...

<ol>
	<li>. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> <em style='font-style: italic'>TRIzol Reagent Manual</em>. , (2007).</li><li>. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> <em style='font-style: italic'>RNEasy Mini Handbook</em>. , (2006).</li><li>. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> <em style='font-style: italic'>SuperScript First-Strand Synthesis System for RT-PCR</em>. , (2003).</li></ol>

<p class="jove_content"> La fragilité de la molécule d&#39;ARN est le facteur le plus critique qui devrait se rappeler tout au long de ce protocole. Matériel stérile qui est RNAse free devrait toujours être utilisé dans une zone de RNAse free du laboratoire. Il est utile de réserver une partie du laboratoire pour être utilisés pour les procédures d&#39;ARN seulement. Cette zone doit être fréquemment pulvérisés avec un produit RNAse enlever, comme RNAse Away. Les échantillons d&#39;ARN devraient toujours être manipulés avec des ...

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		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>Glycogen (5 mg/ml)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Ambion</td>
<td>9510</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>NanoDrop ND-100</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Thermo Scientific </td>
<td>ND-1000</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Pellet Pestles with Microfuge Tube</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>VWR</td>
<td>KT749520-0090</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Phase Lock Gel Light, 1.5 ml</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Eppendorf</td>
<td>2302800</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Phenol, Tris-saturated</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Roche Diagnostics</td>
<td>3117944001</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>RNAse Away</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>VWR</td>
<td>17810-491</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>RNAse-Free DNase Set</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Qiagen</td>
<td>79254</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>RNEasy Mini Kit</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Qiagen</td>
<td>74104</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>SuperScript&reg; First-Strand Synthesis System for RT-PCR</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>11904-018</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>TRIzol</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>15596-026</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>
	

rna isolation from embryonic zebrafish and cdna synthesis for gene expression analysis

<p class="jove_content">Beaucoup de procédures de laboratoire importants et complexes nécessitent une entrée de haute qualité, l&#39;ARN intact. Un échantillon de dégradé ou de la présence d&#39;impuretés peuvent conduire à des résultats désastreux en aval des applications expérimentales. Il est donc primordial d&#39;utiliser des techniques solides avec de nombreuses garanties et des contrôles de qualité afin d&#39;assurer un échantillon de qualité supérieure. Ici, nous détaillons un protocole pour isoler l&#39;ARN total à partir d&#39;embryons de poisson zèbre entier en utilisant un dénaturant chimiques disponibles dans le commerce et le nettoyage subséquent pour enlever les traces de l&#39;ADN et les impuretés à l&#39;aide d&#39;un kit d&#39;isolation commerciale ARN. Comme l&#39;ARN est relativement instable et facilement sujettes au clivage par RNases, la plupart des protocoles d&#39;expression génique dosage en utilisant un produit d&#39;ADNc qui est directement synthétisée à partir d&#39;une matrice d&#39;ARN. Nous détaillons une procédure pour convertir l&#39;ARN dans le produit plus stable d&#39;ADNc en utilisant un kit disponible dans le commerce. Tout au long de ces procédures il ya de nombreux contrôles de qualité afin de s&#39;assurer que l&#39;échantillon n&#39;est pas dégradés ou contaminés. Le produit final de ces protocoles est d&#39;ADNc qui est approprié pour biopuces d&#39;analyse, la RT-PCR ou stockage à long terme.</p>

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RNA Isolation from Embryonic Zebrafish and cDNA Synthesis for Gene Expression Analysis

<p class="jove_content">L&#39;isolement de haute qualité, intacte ARN est une étape essentielle dans de nombreux protocoles de laboratoire. Ici, nous démontrons l&#39;extraction d&#39;ARN à partir d&#39;embryons de poisson zèbre ensemble et synthèse de l&#39;ADNc pour l&#39;application ultérieure dans diverses procédures expérimentales, y compris l&#39;analyse des microréseaux d&#39;expression génique.</p>

Isolement d&#39;ARN à partir de synthèse d&#39;ADNc embryonnaires Zebrafish et pour analyser l&#39;expression génique

Many important and complex laboratory procedures require an input of high quality, intact RNA.  A degraded sample or the presence of impurities can lead ...

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La préparation des cultures primaires de cellules hématopoïétiques de la moelle osseuse murine pour l&#39;électroporation

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Aide d&#39;un compteur de cellules automatisé pour simplifier les études d&#39;expression génique: Knockdown siRNA de l&#39;IL-4 dans l&#39;expression des gènes dépendant cellules Namalwa

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