Name: rna isolation from embryonic zebrafish and cdna synthesis for gene expression analysis
Uploaded: 2009-08-07T16:40:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about RNA Isolation from Embryonic Zebrafish and cDNA Synthesis for Gene Expression Analysis at JoVE.com

<p class="jove_title"> भाग 1: कुल शाही सेना के निष्कर्षण TRIzol अभिकर्मक का उपयोग </p><p class="jove_content"> जब शाही सेना के साथ काम कर रहे यह बहुत महत्वपूर्ण है के लिए एक वातावरण है कि RNAses से मुक्त है में काम. शाही सेना प्रक्रियाओं के साथ केवल उपयोग ...

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	<li>. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> <em style='font-style: italic'>TRIzol Reagent Manual</em>. , (2007).</li><li>. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> <em style='font-style: italic'>RNEasy Mini Handbook</em>. , (2006).</li><li>. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> <em style='font-style: italic'>SuperScript First-Strand Synthesis System for RT-PCR</em>. , (2003).</li></ol>

<p class="jove_content"> शाही सेना अणु की कमजोरी सबसे महत्वपूर्ण विचार है कि इस प्रोटोकॉल भर में याद किया जाना चाहिए है. बाँझ उपकरण है कि RNase मुक्त है हमेशा प्रयोगशाला के एक RNase मुक्त क्षेत्र में किया जाना चाहिए. यह केवल शाही सेना ?...

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		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>Glycogen (5 mg/ml)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Ambion</td>
<td>9510</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>NanoDrop ND-100</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Thermo Scientific </td>
<td>ND-1000</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Pellet Pestles with Microfuge Tube</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>VWR</td>
<td>KT749520-0090</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Phase Lock Gel Light, 1.5 ml</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Eppendorf</td>
<td>2302800</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Phenol, Tris-saturated</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Roche Diagnostics</td>
<td>3117944001</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>RNAse Away</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>VWR</td>
<td>17810-491</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>RNAse-Free DNase Set</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Qiagen</td>
<td>79254</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>RNEasy Mini Kit</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Qiagen</td>
<td>74104</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>SuperScript&reg; First-Strand Synthesis System for RT-PCR</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>11904-018</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>TRIzol</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>15596-026</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>
	

rna isolation from embryonic zebrafish and cdna synthesis for gene expression analysis

<p class="jove_content">कई महत्वपूर्ण और जटिल प्रयोगशाला प्रक्रिया उच्च गुणवत्ता बरकरार शाही सेना के एक इनपुट की आवश्यकता है. एक अपमानित नमूना या अशुद्धियों की उपस्थिति बहाव प्रयोगात्मक अनुप्रयोगों में विनाशकारी परिणाम के लिए नेतृत्व कर सकते हैं. इसलिए यह अत्यंत महत्व के कई रक्षोपायों और गुणवत्ता नियंत्रण की जाँच के साथ ठोस तकनीक का उपयोग करने के लिए एक बेहतर नमूना सुनिश्चित है. इस के साथ साथ, हम विस्तार करने के लिए एक पूरे zebrafish भ्रूण से एक व्यावसायिक रूप से उपलब्ध रासायनिक denaturant और बाद में सफाई का उपयोग करने के लिए डीएनए और दोष एक वाणिज्यिक आरएनए अलगाव किट का उपयोग कर के निशान हटाने कुल शाही सेना को अलग प्रोटोकॉल. के रूप में शाही सेना अपेक्षाकृत अस्थिर है और आसानी से RNAses द्वारा दरार करने के लिए प्रवण है, सबसे प्रोटोकॉल परख जीन अभिव्यक्ति का उपयोग कर एक सीडीएनए उत्पाद है कि सीधे एक शाही सेना टेम्पलेट से संश्लेषित है. हम एक प्रक्रिया विस्तार आरएनए अधिक स्थिर सीडीएनए उत्पाद में एक व्यावसायिक रूप से उपलब्ध किट का उपयोग कर कन्वर्ट. इन प्रक्रियाओं के दौरान वहाँ कई गुणवत्ता नियंत्रण चेक करने के लिए सुनिश्चित करें कि नमूना अपमानित या दूषित नहीं है. इन प्रोटोकॉल के अंत उत्पाद सीडीएनए कि माइक्रोएरे विश्लेषण, RT-पीसीआर या लंबी अवधि के भंडारण के लिए उपयुक्त है.</p>

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RNA Isolation from Embryonic Zebrafish and cDNA Synthesis for Gene Expression Analysis

<p class="jove_content">उच्च गुणवत्ता के अलगाव, शाही सेना बरकरार कई प्रयोगशाला प्रोटोकॉल में एक आवश्यक कदम है. यहाँ, हम पूरे zebrafish भ्रूण और बाद में जीन की अभिव्यक्ति माइक्रोएरे विश्लेषण सहित विभिन्न प्रयोगात्मक प्रक्रियाओं में आवेदन के लिए सीडीएनए संश्लेषण से शाही सेना निकासी प्रदर्शित करता है.</p>

भ्रूणीय Zebrafish और सीडीएनए संश्लेषण से जीन एक्सप्रेशन विश्लेषण के लिए शाही सेना अलगाव

Many important and complex laboratory procedures require an input of high quality, intact RNA.  A degraded sample or the presence of impurities can lead ...

Research

JoVE Journal

Biology

The Preparation of Primary Hematopoietic Cell Cultures From Murine Bone Marrow for Electroporation

प्राथमिक electroporation के लिए murine अस्थि मज्जा से hematopoietic सेल संस्कृतियों की तैयारी

It is becoming increasingly apparent that electroporation is the most effective way to introduce plasmid DNA or siRNA into primary cells. The Gene Pulser ...

Global Gene Expression Analysis Using a Zebrafish Oligonucleotide Microarray Platform

वैश्विक जीन एक्सप्रेशन विश्लेषण एक Zebrafish Oligonucleotide माइक्रोएरे प्लेटफार्म का उपयोग करना

Gene microarray technology permits quantitative measurement and gene expression profiling of transcript levels on a genome-wide basis. Gene microarray ...

Using the Gene Pulser MXcell Electroporation System to Transfect Primary Cells with High Efficiency

जीन Pulser MXcell electroporation प्रणाली का उपयोग करने के लिए उच्च क्षमता के साथ प्राथमिक कोशिकाओं transfect

Using an Automated Cell Counter to Simplify Gene Expression Studies: siRNA Knockdown of IL-4 Dependent Gene Expression in Namalwa Cells

एक स्वचालित सेल काउंटर का उपयोग करने के लिए जीन एक्सप्रेशन अध्ययन सरल: आईएल-4 निर्भर जीन एक्सप्रेशन के Namalwa कक्ष में siRNA नॉकडाउन

The use of siRNA mediated gene knockdown is continuing to be an important tool in studies of gene expression.  siRNA studies are being conducted not only ...

Isolation and Culture of Cells from the Nephrogenic Zone of the Embryonic Mouse Kidney

और भ्रूण माउस किडनी की nephrogenic क्षेत्र से कक्ष के अलगाव और संस्कृति

Embryonic development of the kidney has been extensively studied both as a model for epithelial-mesenchymal interaction in organogenesis and  to gain ...

Metabolic Labeling of Newly Transcribed RNA for High Resolution Gene Expression Profiling of RNA Synthesis, Processing and Decay in Cell Culture

सेल संस्कृति में शाही सेना संश्लेषण, प्रसंस्करण और क्षय के उच्च संकल्प जीन एक्सप्रेशन प्रोफाइलिंग के लिए नव लिखित आरएनए की मेटाबोलिक लेबल

The development of whole-transcriptome microarrays and next-generation sequencing has revolutionized our understanding of the complexity of cellular gene ...

Analysis of Embryonic and Larval Zebrafish Skeletal Myofibers from Dissociated Preparations

अलग तैयारी से भ्रूण और लार्वा zebrafish कंकाल myofibers का विश्लेषण

The zebrafish has  proven to be a valuable model system for exploring skeletal muscle function and  for studying human muscle diseases. Despite  the many ...

Affinity-based Isolation of Tagged Nuclei from <em>Drosophila</em> Tissues for Gene Expression Analysis

Affinity-based Isolation of Tagged Nuclei from Drosophila Tissues for Gene Expression Analysis

से टैग्ड नाभिक की आत्मीयता के आधार पर अलगाव<em&gt; ड्रोसोफिला</emजीन एक्सप्रेशन विश्लेषण के लिए&gt; टिश्यूज

Drosophila melanogaster embryonic and larval tissues often contain a highly heterogeneous mixture of cell types, which can complicate the analysis of gene ...

Analysis of Global RNA Synthesis at the Single Cell Level following Hypoxia

Hypoxia निम्नलिखित एकल कोशिका के स्तर पर ग्लोबल शाही सेना संश्लेषण का विश्लेषण

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Targeted RNA Sequencing Assay to Characterize Gene Expression and Genomic Alterations

आरएनए अनुक्रमण परख जीन एक्सप्रेशन और जीनोमिक बदलाव विशेषताएँ करने का लक्ष्य

RNA sequencing (RNAseq) is a versatile method that can be utilized to detect and characterize gene expression, mutations, gene fusions, and noncoding ...