Name: rna isolation from embryonic zebrafish and cdna synthesis for gene expression analysis
Uploaded: 2009-08-07T16:40:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about RNA Isolation from Embryonic Zebrafish and cDNA Synthesis for Gene Expression Analysis at JoVE.com

<p class="jove_title"> 1 부 : TRIzol 시약을 사용하여 총 RNA의 추출 </p><p class="jove_content"> RNA와 함께 작업하는 경우가 RNAses 무료입니다 환경에서 작동하는 것은 매우 중요합니다. 이러한 RNA 절차에만 사용하기 위해 예약된 pipettes가 발생하고 절차를 시작하기 전에 decontaminant 시약 (예 : RNAse 거리)로 작업 영역을 분사와 같은 간단한주의 사항은 매우 도움이됩니다. </p><ol><li> 1.5 ML의 microfuge 튜브에 RNA 수영장 50 zebrafish의 배아 ?...

<ol>
	<li>. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> <em style='font-style: italic'>TRIzol Reagent Manual</em>. , (2007).</li><li>. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> <em style='font-style: italic'>RNEasy Mini Handbook</em>. , (2006).</li><li>. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> <em style='font-style: italic'>SuperScript First-Strand Synthesis System for RT-PCR</em>. , (2003).</li></ol>

<p class="jove_content"> RNA 분자의 취약성이 프로토콜을 통해 기억되어야하는 가장 중요한 고려 사항이다. RNAse - 무료 살균 장비는 항상 연구실의 RNAse없는 영역에서 사용해야합니다. 단 RNA 절차에 사용하는 실험실의 일부를 예약하는 것이 도움이 그것입니다. 이 지역은 자주 자리 비움 같은 RNAse으로 RNAse 제거 제품과 뿌렸해야합니다. RNA 샘플은 항상 장갑을 착용 한채로 처리하고 저하를 방지하기 위해 얼음에 보관해야?...

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<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>Glycogen (5 mg/ml)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Ambion</td>
<td>9510</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>NanoDrop ND-100</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Thermo Scientific </td>
<td>ND-1000</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Pellet Pestles with Microfuge Tube</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>VWR</td>
<td>KT749520-0090</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Phase Lock Gel Light, 1.5 ml</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Eppendorf</td>
<td>2302800</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Phenol, Tris-saturated</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Roche Diagnostics</td>
<td>3117944001</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>RNAse Away</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>VWR</td>
<td>17810-491</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>RNAse-Free DNase Set</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Qiagen</td>
<td>79254</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>RNEasy Mini Kit</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Qiagen</td>
<td>74104</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>SuperScript&reg; First-Strand Synthesis System for RT-PCR</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>11904-018</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>TRIzol</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>15596-026</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>
	

rna isolation from embryonic zebrafish and cdna synthesis for gene expression analysis

<p class="jove_content">대부분의 중요하고 복잡한 실험 절차는 고품질, 손상 RNA의 입력을 필요로합니다. 타락한 샘플이나 불순물의 존재는 하류 실험 응용 프로그램에서 치명적인 결과를 초래할 수 있습니다. 그것은 우수한 샘플을 보장하기 위해 다양한 안전 및 품질 관리 검사와 견고한 기술을 사용하는 가장 중요 따라서이다. 여기에, 우리는 세부 상업 RNA 분리 키트를 사용하여 DNA와 불순물의 흔적을 제거하는 상용 화학 denaturant 이후 정리를 사용하여 전체 zebrafish의 배아에서 총 RNA를 분리하는 프로토콜. RNA는 상대적으로 불안정하고 RNAses에 의해 절단 쉽게 경향이 있으므로, 대부분의 프로토콜 분석 유전자 발현 직접 RNA의 템플릿에서 합성되는 cDNA 제품을 사용하고 있습니다. 우리는 세부 절차를 상용 키트를 사용하여보다 안정적인 cDNA 제품에 RNA를 변환합니다. 이러한 절차를 통해 샘플 강등 당하거나 오염되지 않도록하기 위해 다양한 품질 관리 검사가 없습니다. 이러한 프로토콜의 최종 제품은 microarray 분석, RT - PCR 또는 장기 보관에 적합한 것을 cDNA입니다.</p>

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RNA Isolation from Embryonic Zebrafish and cDNA Synthesis for Gene Expression Analysis

<p class="jove_content">양질의 절연이 손상 RNA는 많은 실험실 프로토콜에서 필수적인 단계입니다. 여기, 우리는 전체 zebrafish의 배아 및 유전자 표현 microarray 분석 등 다양한 실험 절차에 후속 응용 프로그램에 대한 cDNA 합성에서 RNA 추출을 보여줍니다.</p>

유전자 발현 분석을위한 배아 Zebrafish 및 cDNA 합성에서 RNA 격리

Many important and complex laboratory procedures require an input of high quality, intact RNA.  A degraded sample or the presence of impurities can lead ...

Research

JoVE Journal

Biology

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Electroporation에 대한 Murine 골수에서 조혈 세포 차 문화의 준비

It is becoming increasingly apparent that electroporation is the most effective way to introduce plasmid DNA or siRNA into primary cells. The Gene Pulser ...

연구

생물학

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Zebrafish Oligonucleotide Microarray의 플랫폼을 사용하여 글로벌 유전자 발현 분석

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Using the Gene Pulser MXcell Electroporation System to Transfect Primary Cells with High Efficiency

고효율 기본 셀을 Transfect하는 진 Pulser Electroporation MXcell의 시스템을 사용하여

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유전자 발현 연구를 단순화하는 자동 셀 카운터를 사용하여 : Namalwa 셀에서 IL - 4 종속 유전자 발현의 siRNA의 최저

The use of siRNA mediated gene knockdown is continuing to be an important tool in studies of gene expression.  siRNA studies are being conducted not only ...

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배아 마우스 신장의 Nephrogenic 지대의 세포의 분리 및 문화

Embryonic development of the kidney has been extensively studied both as a model for epithelial-mesenchymal interaction in organogenesis and  to gain ...

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