Name: global gene expression analysis using a zebrafish oligonucleotide microarray platform
Uploaded: 2009-08-10T00:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Global Gene Expression Analysis Using a Zebrafish Oligonucleotide Microarray Platform at JoVE.com

<p class="jove_title"> Deel 1: Fluorescerende Labeling van cDNA </p><p class="jove_content"> De Cy3 kleurstof gebruikt in de microarray experiment is gevoelig voor foto-degradatie. De procedure moet plaatsvinden in een minimale hoeveelheid licht. De etikettering protocol werd aangepast van de BioPrime Array CGH Genomic Labeling System Manual <sup>1.</sup> </p><ol><li> De reagentia voor de etikettering reactie zijn opgeslagen bij -20 ° C. Van de BioPrime Array CGH Genomic Labeling System dooi 2,5 maal de Random Primer Buffer, 10x dCTP mix, en n...

<ol>
	<li>. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> <em style='font-style: italic'>BioPrime Array CGH Genomic Labeling System Manual</em>. , (2004).</li><li>. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> <em style='font-style: italic'>Roche NimbleGen Arrays User's Guide for Gene Expression Analysis</em>. , (2008).</li></ol>

<p class="jove_content"> Veel microarray-protocollen, inclusief de hier beschreven, gebruik fluorescente kleurstoffen als een middel van het meten en kwantificeren van hybridisatie. De Cy3 fluorescente kleurstof is gevoelig voor foto-en ozon degradatie. Het wordt aanbevolen dat de procedure worden gevoerd in een minimale belichting. Bovendien kunnen kleine stofdeeltjes interfereren met hybridisatie en scannen. Bijzondere aandacht moet worden besteed om er zeker van het werkgebied is schoon en vrij van stof. </p><p class="jove_content"> Er zijn ...

<!DOCTYPE html PUBLIC "-//W3C//DTD XHTML 1.0 Transitional//EN" "http://www.w3.org/TR/xhtml1/DTD/xhtml1-transitional.dtd">
<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>Array Microcentrifuge Dryer</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>ISC Bioexpress</td>
<td>C-1303-T</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>BioPrime Array CGH Genomic Labeling System</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>18095-011</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Cyanine 3-dCTP</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>PerkinElmer</td>
<td>NEL576</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>GenePix 4000B</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Molecular Devices</td>
<td>GENEPIX 4000B</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Microcon YM-30</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Millipore</td>
<td>42411</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>NimbleGen Array Processing Accessories</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Roche NimbleGen</td>
<td>5223539001</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>NimbleGen Hybridization Kit</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Roche NimbleGen</td>
<td>5223474001</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>NimbleGen Hybridization System 4</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Roche NimbleGen</td>
<td>5223652001</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>NimbleGen Wash Buffer Kit</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Roche NimbleGen</td>
<td>5223504001</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>X1 Mixers</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Roche NimbleGen</td>
<td>5223725001</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>
	

global gene expression analysis using a zebrafish oligonucleotide microarray platform

<p class="jove_content">Gene microarray technologie maakt kwantitatieve meting en gen expressie profilering van transcriptie niveaus op een genoom-brede basis. Gene microarray technologie wordt gebruikt in tal van biologische disciplines in een verscheidenheid aan toepassingen, waaronder de wereldwijde genexpressie analyse in relatie tot ontwikkelingsfase, een ziekte staat, en in toxische reacties. Hierin hebben we onder meer een demonstratie van de wereldwijde genexpressie analyse met behulp van een uitgebreide zebravis-specifieke oligonucleotide microarray platform. De zebravis expressie microarray platform bevat 385.000 probes, 60 baseparen lang, te ondervragen 37.157 doelen met maximaal 12 sondes per doel. Voor dit platform, was alles cDNA en genomisch informatie beschikbaar voor de zebravis verzameld uit verschillende databases waaronder genomische Ensembl (http://www.ensembl.org), VEGA (http://vega.sanger.ac.uk), UCSC ( http://genome.ucsc.edu), en ZFIN (http://www.zfin.org). Als gevolg daarvan deze expressie-array biedt volledige dekking van de huidige zebravis transcriptoom. De zebravis expressie microarray werd gedrukt door Roche NimbleGen (Madison, WI). Deze technische demonstratie omvat de tl-etikettering van een cDNA product, hybridisatie van de gelabelde cDNA product aan de microarray platform, en de reeks scannen voor signaal acquisitie het gebruik van de een kleuranalyse strategie.</p>

Watch this Scientific Journal Video about Global Gene Expression Analysis Using a Zebrafish Oligonucleotide Microarray Platform at JoVE.com

Global Gene Expression Analysis Using a Zebrafish Oligonucleotide Microarray Platform

<p class="jove_content">Gen microarrays zijn krachtige tools in gen expressie profilering bij een genoom-brede niveau. Deze technologie heeft toepassing in een verscheidenheid van biologische disciplines, waaronder ontwikkelingsbiologie en toxicologie. In deze video, we detail een protocol voor de wereldwijde genexpressie analyse met behulp van een uitgebreid oligonucleotide microarray platform voor de zebravis.</p>

Global analyse van genexpressie met behulp van een zebravis oligonucleotide microarray platform

Gene microarray technology permits quantitative measurement and gene expression profiling of transcript levels on a genome-wide basis. Gene microarray ...

Research

JoVE Journal

Biology

Bacterial Gene Expression Analysis Using Microarrays

Bacteriële Gene Expression analyse met behulp van Microarrays

The Preparation of Primary Hematopoietic Cell Cultures From Murine Bone Marrow for Electroporation

De vervaardiging van primaire hematopoietische cellen culturen uit Murine Bone Marrow voor Elektroporatie

It is becoming increasingly apparent that electroporation is the most effective way to introduce plasmid DNA or siRNA into primary cells. The Gene Pulser ...

RNA Isolation from Embryonic Zebrafish and cDNA Synthesis for Gene Expression Analysis

RNA isolatie van embryonale zebravis en cDNA synthese voor de analyse van genexpressie

Many important and complex laboratory procedures require an input of high quality, intact RNA.  A degraded sample or the presence of impurities can lead ...

Using the Gene Pulser MXcell Electroporation System to Transfect Primary Cells with High Efficiency

Met behulp van de Gene Puiser MXcell Elektroporatie systeem om primaire cellen transfecteren met een hoog rendement

Using an Automated Cell Counter to Simplify Gene Expression Studies: siRNA Knockdown of IL-4 Dependent Gene Expression in Namalwa Cells

Met behulp van een geautomatiseerde cel Counter aan Gene Expression Studies Vereenvoudigen: siRNA Knockdown van IL-4 Afhankelijk van genexpressie in cellen Namalwa

The use of siRNA mediated gene knockdown is continuing to be an important tool in studies of gene expression.  siRNA studies are being conducted not only ...

Analysis of Gene Expression in Emerald Ash Borer (<em>Agrilus planipennis</em>) Using Quantitative Real Time-PCR

Analysis of Gene Expression in Emerald Ash Borer Agrilus planipennis Using Quantitative Real Time-PCR

Analyse van genexpressie in Emerald Ash Borer (<em> Agrilus planipennis</em>) Met behulp van kwantitatieve Real Time-PCR

Emerald ash borer (EAB, Agrilus planipennis) is an exotic invasive pest, which has killed millions of ash trees (Fraxinus spp) in North America. EAB ...

Microarray Analysis for <em>Saccharomyces cerevisiae</em>

Microarray Analysis for Saccharomyces cerevisiae

Microarray analyse voor<em> Saccharomyces cerevisiae</em

In this protocol, gene expression in yeast (Saccharomyces cerevisiae) is changed after exposure to oxidative stress induced by the addition of hydrogen ...

Determining Genetic Expression Profiles in <em>C. elegans</em> Using Microarray and Real-time PCR

Determining Genetic Expression Profiles in C. elegans Using Microarray and Real-time PCR

Het bepalen van genetische expressie profielen in<em> C. elegans</em> Met behulp van microarray en real-time PCR

Synapses are composed of a presynaptic active zone in the signaling cell and a postsynaptic terminal in the target cell. In the case of chemical synapses, ...

<em>In vitro</em> Reconstitution of the Active <em>T. castaneum</em> Telomerase

In vitro Reconstitution of the Active T. castaneum Telomerase

<em>In vitro</em> reconstitutie van de Active <em>T. castaneum</em> Telomerase

Efforts to isolate the catalytic subunit of telomerase, TERT, in sufficient quantities for structural studies, have been met with limited success for more ...

Gene Trapping Using Gal4 in Zebrafish

Gene Trapping behulp Gal4 in zebravis

Large clutch size and external development of optically transparent embryos make zebrafish an exceptional vertebrate model system for in vivo insertional ...