Name: method for measurement of viral fusion kinetics at the single particle level
Uploaded: 2009-09-07T16:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Method for Measurement of Viral Fusion Kinetics at the Single Particle Level at JoVE.com

وأيد عمل المعاهد الوطنية للصحة منح AI57159 (لSCH) وAI72346 (لAMvO). SCH هو هوارد هيوز الطبي محقق المعهد.

الزجاج functionalization تغطية زلة يتم اعتماد طبقة ثنائية مستو المستخدمة في فحص الانصهار على فيلم رطب من ديكستران. ديكستران الأفعال كفاصل بين طبقة ثنائية ومستو سطح الزجاج. هذا يمنع من أن تصبح مكونات غشاء عالقة على سطح الزجاج ، ويوفر أيضا ف...

<ol>
	<li>Elender, G., Kuhner, M., Sackmann, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functionalisation+of+Si/SiO2+and+glass+surfaces+with+ultrathin+dextran+films+and+deposition+of+lipid+bilayers.">Functionalisation of Si/SiO2 and glass surfaces with ultrathin dextran films and deposition of lipid bilayers.</a> Biosens Bioelectron. 11, 565-577 (1996).</li><li>Floyd, D. L., Ragains, J. R., Skehel, J. J., Harrison, S. C., van Oijen, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Single-particle+kinetics+of+influenza+virus+membrane+fusion.">Single-particle kinetics of influenza virus membrane fusion.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 105, 15382-15387 (2008).</li></ol>

ويمكن إعداد السوائل والدهون طبقات ثنائية مستمرة بدعم أمرا صعبا. وكميات ضئيلة من المواد الملوثة أو عيوب السطح منع انتشار طبقات ثنائية. تنظيف دقيق وترسب طبقة موحدة من ديكستران ضرورية. يمكن التصوير لفترة طويلة من جزيئات الفيروس الت...

<!DOCTYPE html PUBLIC "-//W3C//DTD XHTML 1.0 Transitional//EN" "http://www.w3.org/TR/xhtml1/DTD/xhtml1-transitional.dtd">
<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>Corning cover glass squares, 25 mm</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma</td>
<td>CLS286525</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Fused silica slides</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Technical Glass</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Staining rack</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Thomas Scientific</td>
<td>8542E40</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>(3- glycidoxypropyl)trimethoxysilane</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Gelest</td>
<td>SIG5840.1</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Dextran T-500</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Pharmacosmos</td>
<td>5510 0500 4006</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>1,2-dioleoyl-sn-glycero-3-phosphocholine (DOPC)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Avanti</td>
<td>850375</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>1-palmitoyl-2oleoyl-sn-glycero-3-phosphocholine (POPC)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Avanti</td>
<td>850457</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Cholesterol</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Avanti</td>
<td>700000</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>N-((6-(biotinoyl)amino)hexanoyl)-1,2-dihexadecanoyl-sn-glycero-3-phosphoethanolamine, triethylammonium salt (biotin-X DHPE)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>B1616</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Streptavidin, fluorescein conjugate</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>S-869</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Disialoganglioside GD1a from bovine brain</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma</td>
<td>G2392</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Mini Extruder</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Avanti</td>
<td>610000</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>0.1 micron polycarbonate membrane filters</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Whatman</td>
<td>800309</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>10 mm drain discs (membrane supports)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Whatman</td>
<td>230300</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Sulforhodamine b sodium salt</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>S1402</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Octadecyl rhodamine 110 (Rh110C18)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>See Floyd et al. 2008 for synthesis protocol</td>
</tr>
<tr>
<td>PD-10 desalting columns</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>GE Healthcare</td>
<td>17-0851-01</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Nikon fluorescence microscope</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Nikon</td>
<td>TE2000-U</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Plan Apo TIRF 60x 1.45 NA objective</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Nikon</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Innova 70C Spectrum Ar/Kr laser</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Coherent</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Syringe Pump</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Harvard Apparatus</td>
<td>702213</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>

method for measurement of viral fusion kinetics at the single particle level

الانصهار الغشاء هو خطوة أساسية أثناء دخول الفيروسات يلفها في الخلايا. المقايسات التقليدية الانصهار التقرير عادة على عدد كبير من الأحداث الانصهار ، مما يجعل من الصعب تحليلها كميا تسلسل الخطوات الجزيئية المعنية. طورنا في المختبر ، وهما لونا مقايسة مضان لرصد حركية من جسيمات فيروس واحد الصمامات مع طبقة ثنائية الهدف على دعم السوائل أساسا. يتم تحضين جزيئات الأنفلونزا الفيروسية مع fluorophore a الأخضر لمحبة للدهون وصمة عار في الغشاء وfluorophore ماء حمراء لصبغ الداخلية الفيروسية. نحن إيداع طبقة ثنائية الدهن غانغليوزيد المحتوية على سطح الزجاج ديكستران - functionilized خلية تدفق الجزيئات الفيروسية احتضان على طبقة ثنائية مستو وصورة مضان من 100 × 100 مساحتها 2 ميكرون ، تحتوي على عدة مئات من الجزيئات ، على اتفاقية مكافحة التصحر الكاميرا. بواسطة التصوير كلا من مضان أحمر وأخضر ، ويمكننا رصد سلوك واحد للصباغة غشاء (الخضراء) والمحتوى المائي (أحمر) من الجسيمات. على خفض درجة الحموضة إلى قيمة أقل من الرقم الهيدروجيني الانصهار ، سوف تندمج مع جزيئات الغشاء. Hemifusion ، ودمج المنشور في الغشاء الخارجي الفيروسية مع النشرة الخارجي للغشاء الهدف ، وسوف تكون واضحة على أنه تغيير مفاجئ في مضان أخضر من الجسيمات. وبناء على الاندماج اللاحقة للمنشورات two القاصي المتبقية يتم تشكيل المسام ، وسوف يتم الافراج عن fluorophore الحمراء التي تنبعث منها في الجسيمات الفيروسية تحت غشاء الهدف. هذا الحدث سوف تؤدي إلى انخفاض في مضان أحمر من الجزيئات الفردية. أخيرا ، ومضان متكاملة من fluorophore الحموضة حساسة مضمن في غشاء الهدف تقارير عن الوقت المحدد لانخفاض الرقم الهيدروجيني. من آثار مضان وقت الثلاث يمكن ، الآن كل الأحداث الهامة (انخفاض درجة الحموضة ، واختلاط الدهون على المحتوى ، وعند خلط hemifusion تشكيل مسام) يمكن استخراجها بطريقة مباشرة ومنفردة لكل جسيم. من خلال جمع العصر المنقضي لالتحولات المختلفة للكثير من الجزيئات الفردية في رسوم بيانية ، يمكننا تحديد أعمار وسيطة من المقابلة. يمكن أن تكون وسيطة حتى الخفية التي لم يكن لديك تصور يمكن ملاحظتها مباشرة الفلورسنت مباشرة من هذه المدرج الاحصائي.

Watch this Scientific Journal Video about Method for Measurement of Viral Fusion Kinetics at the Single Particle Level at JoVE.com

Method for Measurement of Viral Fusion Kinetics at the Single Particle Level

نحن تقديم<em&gt; في المختبر ،</em&gt; اللونين مقايسة مضان لتصور اندماج جزيئات فيروس واحد مع طبقة ثنائية الهدف السوائل. وذلك عبر تسمية الجسيمات الفيروسية مع fluorophores أن صمة بالتفاوت في الغشاء الفيروسية وباطنها ، ونحن قادرون على رصد حركية hemifusion وتشكيل المسام.

طريقة لقياس حركية الانصهار الفيروسي على مستوى الجسيمات واحدة

Membrane fusion is an essential step during entry of enveloped viruses into cells. Conventional fusion assays typically report on a large number of fusion ...

Research

JoVE Journal

Biology

Single Particle Electron Microscopy Reconstruction of the Exosome Complex Using the Random Conical Tilt Method

واحد المجهر الإلكتروني التعمير الجسيمات مجمع Exosome باستخدام أسلوب عشوائي الخيمة المخروطية

Single particle electron microscopy (EM) reconstruction has recently become a popular tool to get the three-dimensional (3D) structure of large ...

Measuring the Kinetics of mRNA Transcription in Single Living Cells

قياس حركية النسخ مرنا في الخلايا الحية واحدة

The transcriptional activity of RNA polymerase II (Pol II) is a dynamic process and therefore measuring the kinetics of the transcriptional process in ...

Studying Proteolysis of Cyclin B at the Single Cell Level in Whole Cell Populations

دراسة التحلل البروتيني B من السيكلين على مستوى خلية واحدة في الجامعة السكان الخلية

Equal distribution of chromosomes between the two daughter cells during cell division is a prerequisite for guaranteeing genetic stability 1. Inaccuracies ...

Analysis of Global RNA Synthesis at the Single Cell Level following Hypoxia

تحليل الحمض النووي الريبي العالمي التجميعي على مستوى خلية واحدة نقص الأكسجة التالي

Hypoxia or lowering of the oxygen availability is involved in many physiological and pathological processes. At the molecular level, cells initiate a ...

Measurement of Heme Synthesis Levels in Mammalian Cells

قياس مستويات هيم في تخليق خلايا الثدييات

Heme serves as the prosthetic group for a wide variety of proteins known as hemoproteins, such as hemoglobin, myoglobin and cytochromes. It is involved in ...

Analysis of LINE-1 Retrotransposition at the Single Nucleus Level

تحليل الخط-1 Retrotransposition في واحدة نواة مستوى

Long interspersed nuclear element-1 (Line-1 or L1) accounts for approximately 17% of the DNA present in the human genome. While the majority of L1s are ...

Open-source Single-particle Analysis for Super-resolution Microscopy with VirusMapper

المصدر المفتوح تحليل واحد الجسيمات لسوبر قرار المجهري مع VirusMapper

Super-resolution fluorescence microscopy is currently revolutionizing cell biology research. Its capacity to break the resolution limit of around 300 nm ...

Advanced Confocal Microscopy Techniques to Study Protein-protein Interactions and Kinetics at DNA Lesions

تقنيات الفحص المجهري [كنفوكل] لدراسة تفاعلات البروتين البروتين وحركية في الحمض النووي آفات متقدمة

Local microirradiation with lasers represents a useful tool for studies of DNA-repair-related processes in live cells. Here, we describe a methodological ...

Simple and Effective Administration and Visualization of Microparticles in the Circulatory System of Small Fishes Using Kidney Injection

إدارة بسيطة وفعالة والتصور من المجهرية الدقيقة في الدورة الدموية للأسماك الصغيرة باستخدام الحقن الكلي

The systemic administration of micro-size particles into a living organism can be applied for vasculature visualization, drug and vaccine delivery, ...

Analysis of Beta-cell Function Using Single-cell Resolution Calcium Imaging in Zebrafish Islets

تحليل وظيفة خلايا بيتا باستخدام تصوير الكالسيوم القرار خلية واحدة في الجزيرات الزرد

Pancreatic beta-cells respond to increasing blood glucose concentrations by secreting the hormone insulin. The dysfunction of beta-cells leads to ...