Name: denaturing urea polyacrylamide gel electrophoresis (urea page)
Uploaded: 2009-10-29T07:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Denaturing Urea Polyacrylamide Gel Electrophoresis Urea PAGE at JoVE.com

Dit werk werd ondersteund door de Singapore Academic Research Council (ARC) [subsidie ​​nummer 90/07]. Wij danken radiodurans voor de steun.

De volledige en gedetailleerde tekst protocol voor dit experimentele procedure is beschikbaar in Current Protocols in Molecular Biology. Gedetailleerde stap-voor-stap instructies voor de montage van de gel-sandwich en voor gel apparatuur is te vinden op de website van BioRad 3. Benodigde apparatuur: Glasplaten (binnenste en buitenste) 10 cm cel: 10,1 x 7,3 cm (binnenste plaat), 10,1 x 8,2 cm (buitenste plaat), BioRad 20 cm cel: 20 x 20 cm (binnenste plaat), 20...

<ol>
	<li>Maniatis, T., Jeffrey, A., van deSande, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chain+length+determination+of+small+double-+and+single-stranded+DNA+molecules+by+polyacrylamide+gel+electrophoresis.">Chain length determination of small double- and single-stranded DNA molecules by polyacrylamide gel electrophoresis.</a> Biochemistry. 14, 3787-3794 (1975).</li><li>Albright, L. M., Slatko, B. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Denaturing+polyacrylamide+gel+electrophoresis.">Denaturing polyacrylamide gel electrophoresis.</a> Curr Protoc Nucleic Acid Chem. , (2001).</li><li>. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> PROTEAN II xi Cell and PROTEAN II xi 2-D Cell Instruction Manual. , (2001).</li></ol>

<ol><li> De band scherpte hangt af van verschillende factoren. Het volume van het monster geladen voor een scherpe bands moet zo klein mogelijk, dat wil zeggen idealiter tussen 1-5 pl. Echter, tot en met 15 ul worden geladen die nog steeds acceptabele oplossing zorgt. Minder monstervolume resulteert in scherpere bands. </li><li> De band kwaliteit is ook afhankelijk van de dikte van gel. Dunnere gels, zoals 0,75 mm tonen betere resultaten dan 1,5 mm dik gels. </li><li> De vorm van banden kunnen ook worden beïnvloed tijdens het laden van gel, al...

denaturing urea polyacrylamide gel electrophoresis (urea page)

Ureum PAGE of denaturering ureum polyacrylamidegelelektroforese maakt gebruik van 6-8 m ureum, waar secundaire DNA of RNA-structuren gedenatureerd en wordt gebruikt voor hun scheiding in een polyacrylamide gel matrix op basis van het molecuulgewicht. Fragmenten van 2 tot 500 basen, met een lengte verschillen zo klein als een single nucleotide, kunnen worden gescheiden met behulp van deze methode 1. De migratie van het monster is afhankelijk van de gekozen acrylamide concentratie. Een hoger percentage van polyacrylamide lost een lager molecuulgewicht fragmenten. De combinatie van ureum en temperaturen van 45-55 ° C in de gel run zorgt voor de scheiding van ongestructureerde DNA of RNA-moleculen. In het algemeen is deze methode nodig om te analyseren of te zuiveren enkelstrengs DNA of RNA-fragmenten, zoals gesynthetiseerd of gelabelde oligonucleotiden of producten van enzymatische splitsing reacties. In deze video artikel tonen we hoe voor te bereiden en uit te voeren de denaturering ureum polyacrylamide gels. Technische tips zijn opgenomen, in aanvulling op het oorspronkelijke protocol 1,2.

Watch this Scientific Journal Video about Denaturing Urea Polyacrylamide Gel Electrophoresis Urea PAGE at JoVE.com

Denaturing Urea Polyacrylamide Gel Electrophoresis Urea PAGE

Denaturerende ureum polyacrylamidegelelektroforese wordt gebruikt voor het enkelstrengs DNA gescheiden of tot RNA tot een limiet van 500 nucleotiden. Ureum in combinatie met de hitte gedenatureerd monsters en ongestructureerde enkele strengen migreren binnen de gel matrix op basis van hun moleculair gewicht.

Denatureren Ureum polyacrylamide gel elektroforese (Urea PAGE)

Urea PAGE or denaturing urea polyacrylamide gel electrophoresis employs 6-8 M urea, which denatures secondary DNA or RNA structures and is used for their ...

Research

JoVE Journal

Biology

Denaturing Urea Polyacrylamide Gel Electrophoresis (Urea PAGE)

Denaturing Gradient Gel Electrophoresis (DGGE)

Denaturing Gradient Gel Electrophoresis DGGE

Denaturerende gradiënt Gel Elektroforese (DGGE)

Optimized Fibrin Gel Bead Assay for the Study of Angiogenesis

Geoptimaliseerde fibrinegel Bead Assay voor de Studie van Angiogenese

Angiogenesis is a complex multi-step process, where, in response to angiogenic stimuli, new vessels are created from the existing vasculature.  These ...

Assessing Neural Stem Cell Motility Using an Agarose Gel-based Microfluidic Device

Het beoordelen van neurale stamcellen Motiliteit Met behulp van een agarosegel-based Microfluïdische Device

While microfluidic technology is reaching a new level of maturity for macromolecular assays, cell-based assays are still at an infant stage1. This is ...

Screening for Amyloid Aggregation by Semi-Denaturing Detergent-Agarose Gel Electrophoresis

Screening op Amyloid Aggregation door semi-denaturerende Detergent-agarosegelelektroforese

Amyloid aggregation is associated with numerous protein misfolding pathologies and underlies the infectious properties of prions, which are ...

Fast and Sensitive Colloidal Coomassie G-250 Staining for Proteins in Polyacrylamide Gels

Snelle en gevoelige colloïdaal Coomassie G-250 Kleuring voor Eiwitten in polyacrylamidegels

Coomassie Brilliant Blue (CBB) is a dye commonly used for the visualization of proteins separated by SDS-PAGE, offering a simple staining procedure and ...

Blue Native Polyacrylamide Gel Electrophoresis (BN-PAGE) for Analysis of Multiprotein Complexes from Cellular Lysates

Blue Native Polyacrylamide Gel Electrophoresis BN-PAGE for Analysis of Multiprotein Complexes from Cellular Lysates

Blauwe Inheemse polyacrylamidegelelektroforese (BN-PAGE) voor de Analyse van multiprotein complexen van Cellular Lysaten

Multiprotein complexes (MPCs) play a crucial role in cell signalling, since most proteins can be found in functional or regulatory complexes with other ...

Pouring and Running a Protein Gel by reusing Commercial Cassettes

Gieten en runnen van een eiwitgel door hergebruik van Commercial Cassettes

The evaluation of proteins using sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE) analysis is a common technique used by biochemistry ...

Metabolic Pathway Confirmation and Discovery Through 13C-labeling of Proteinogenic Amino Acids

Metabolic Pathway Confirmation and Discovery Through 13C-labeling of Proteinogenic Amino Acids

Metabole route Bevestiging en Discovery door 13 C-etikettering van proteïnogene aminozuren

Microbes have complex metabolic pathways that can be investigated using biochemistry and functional genomics methods. One important technique to examine ...

Agarose Gel Electrophoresis for the Separation of DNA Fragments

Agarosegelelektroforese voor de scheiding van DNA fragmenten

Agarose gel electrophoresis is the most effective way of separating DNA fragments of varying sizes ranging from 100 bp to 25 kb1. Agarose is isolated from ...

Preparation of DNA-crosslinked Polyacrylamide Hydrogels

Bereiding van DNA verknoopt polyacrylamide hydrogels

Mechanobiology is an emerging scientific area that addresses the critical role of physical cues in directing cell morphology and function. For example, ...